"МУК 4.1.3142-13. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Метод обнаружения фенилбутазона в пищевых продуктах животного происхождения. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 26.11.2013)

1. Разработаны ФГБУ "НИИ питания" РАМН (О.И. Передеряев, М.Н. Богачук, А.Д. Малинкин, И.Б. Перова, М.А. Макаренко, В.В. Бессонов, К.И. Эллер).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому надзору Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Протокол от 29 октября 2013 г. N 3).

3. Утверждены вр.и.о. руководителя Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главного государственного санитарного врача Российской Федерации А.Ю. Поповой 26 ноября 2013 г.

4. Введены впервые.

Настоящие методические указания устанавливают порядок качественного определения фенилбутазона в мясе и субпродуктах убойных животных и птицы, а также продуктах их переработки методом высокоэффективной жидкостной хроматографии тандемной масс-спектрометрией (предел обнаружения 0,05 мг/кг).

Методические указания носят рекомендательный характер.

Название действующего вещества по ИСО: фенилбутазон.

Название действующего вещества по ИЮПАК: 4-бутил-1,2-дифенил-3,5-пиразолидин-3,5-дион.

CAS N: 50-33-9.

Молекулярная масса: 308,37.

Структурная формула:

Фенилбутазон является производным пиразолона и относится к нестероидным противовоспалительным средствам. Применяется в медицинской практике как противовоспалительное, анальгезирующее и жаропонижающее средство. Доступен в России как лекарственное средство под торговым наименованием бутадион.

Фенилбутазон также применяется в ветеринарии как нестероидное противовоспалительное и обезболивающее лекарственное средство. В пищевых продуктах фенилбутазон не должен обнаруживаться в пределах обнаружения метода (0,05 мг/кг). Обнаружение фенилбутазона в пищевых продуктах связано с несоблюдением регламента его использования.

Физические свойства: белый кристаллический порошок, без запаха, температура плавления 105 °C, растворимость в воде (~0,7 мг/см3), в этаноле (~50 мг/см3), свободно растворим в диэтиловом эфире и ацетоне. Максимум поглощения в подкисленном этаноле 239,5 нм (коэффициент экстинкции 15488).

Метод основан на определении фенилбутазона методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с тандемной масс-спектрометрией.

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.

Примечание. Допускается использование вспомогательных средств измерений, устройств и материалов с аналогичными и лучшими техническими характеристиками.

3.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ Р 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф и масс-спектрометрический детектор.

3.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и 2.2.5.2308-07. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.

К выполнению измерений допускают специалиста, прошедшего обучение, освоившего методику, владеющего техникой, имеющего опыт работы на жидкостном хроматографе с масс-спектрометрическим детектором.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Для учета специфики отбора проб отдельных видов продуктов следует руководствоваться действующей нормативно-технической документацией по отбору проб для определения токсичных элементов для каждого конкретного вида продукции.

Навеску фенилбутазона массой 0,010 г, взвешенную с погрешностью не более 0,0001 г, помещают в мерную колбу вместимостью 200 см3, добавляют 120 см3 этанола, перемешивают до полного растворения, доводят объем до метки этанолом и тщательно перемешивают.

Приготовленный раствор хранят при температуре 18 °C в течение 12 месяцев.

Мерной пипеткой переносят 2 см3 основного раствора стандарта фенилбутазона в мерную колбу на 100 см3, доводят объем до метки этанолом и перемешивают.

Приготовленный раствор хранят при температуре 18 °C в течение 3 месяцев.

В стакан объемом 500 см3 добавляют 400 см3 дистиллированной воды и, тщательно перемешивая, прибавляют 0,5 см3 муравьиной кислоты. Содержимое переносят в мерную колбу на 500 см3, доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают.

В стакан объемом 50 см3 мерным цилиндром вместимостью 50 см3 вносят 15 см3 25%-го раствора аммиака и 35 см3 дистиллированной воды.

В стакан объемом мерным цилиндром вместимостью 50 см3 отмеривают 30 см3 кислоты соляной и 20 см3 дистиллированной воды.

В цилиндр объемом 500 см3 отмеривают 240 см3 гексана и доводят объем до 300 см3 тетрагидрофураном.

В мерную колбу вместимостью 50 см3 мерным цилиндром вместимостью 25 см3 отмеривают 25 см3 ацетонитрила, пипеткой вместимостью 1 см3 отмеривают 0,2 см3 муравьиной кислоты, доводят до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивают.

Исследование каждого образца проводится в двух параллельных измерениях.

- Подвергают измельчению в лабораторной мельнице 150 г образца пищевого продукта.

- В пробирку объемом 50 см3 отвешивают 5,0 г (навеска с точностью 0,1 г) гомогенизированной пробы.

- Добавляют 5 см3 дистиллированной воды и 0,5 см3 7,5%-го раствора аммиака и встряхивают в течение 20 с.

- В пробирку добавляют 10 см3 диэтилового эфира, закрывают и встряхивают в течение 10 с.

- В пробирку добавляют 10 см3 петролейного эфира, закрывают и встряхивают в течение 30 с.

- Пробирку центрифугируют с силой центрифугирования 3000 в течение 5 мин при комнатной температуре.

- Органический слой отбрасывают, оставшееся содержимое пробирки встряхивают в течение 10 с.

- Добавляют 1 см3 6 Н соляной кислоты и перемешивают.

- Добавляют 20 мл смеси тетрагидрофуран/гексан (60/240) и встряхивают на шейкере 10 мин.

- Пробирку центрифугируют с силой центрифугирования 3000 в течение 5 мин при комнатной температуре.

- Упаривают 10 см3 полученного экстракта под вакуумом досуха при температуре 50 °C.

- Сухой остаток перерастворяют в 500 мкл смеси ацетонитрил-водный раствор муравьиной кислоты (1:1).

- Получившийся раствор центрифугируют в течение 5 мин при 10000, надосадочную жидкость отделяют и исследуют.

Условия разделения методом ВЭЖХ приведены в табл. 1.

Условия детектирования на тандемном масс-спектрометрическом детекторе приведены в табл. 2.

Идентификацию компонентов на хроматограмме осуществляют путем сравнения с абсолютным временем удерживания стандарта фенилбутазона. Абсолютное время удерживания стандарта фенилбутазона устанавливают, анализируя рабочий раствор стандарта фенилбутазона.

Пример получаемой хроматограммы приведен на рисунке.

При обнаружении в предлагаемых условиях на обоих предлагаемых переходах пиков, соответствующих по времени удерживания стандартному образцу фенилбутазона, делается вывод о его наличии в исследуемом образце.

Результат анализа в документах, предусматривающих его использование, представляют в виде следующей записи: "В исследуемом образце(ах)... фенилбутазон не обнаружен (предел обнаружения метода 0,05 мг/кг)" или "В исследуемом образце(ах)... обнаружен фенилбутазон (предел обнаружения метода 0,05 мг/кг)".

Документ или запись удостоверяет лицо, проводившее измерения, а при необходимости - руководитель организации (предприятия), подпись которого заверяют печатью организации (предприятия).