"МУК 4.1.3338-16. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение концентраций валифеналата в воздухе рабочей зоны, атмосферном воздухе населенных мест и смывах с кожных покровов операторов методом газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 26.02.2016)

1. Разработаны ФБУН "Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана" Роспотребнадзора (Т.В. Юдина, М.В. Ларькина, С.К. Рогачева).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 17 декабря 2015 г. N 2).

3. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 26 февраля 2016 г.

4. Введены впервые.

Свидетельство об аттестации N РОСС RU.0001.310430/0231.10.06.15.

Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода капиллярной газожидкостной хроматографии для определения в воздухе рабочей зоны, атмосферном воздухе населенных мест и смывах с кожных покровов операторов массовой концентрации валифеналата в диапазонах 0,1 - 1,0; 0,0008 - 0,008 мг/м³ и 0,5 - 5,0 мкг/смыв соответственно.

Методические указания носят рекомендательный характер.

(изопропоксикарбонил) - L - валил[амино]пропаноат (ИЮПАК)

Эмпирическая формула: C₁₉H₂₇ClN₂O₅.

Молекулярная масса: 398,89.

Белое порошкообразное вещество. Температура плавления: 147 °C. Давление паров при 25 °C: 2,3 x 10^-7 мПа. Растворимость в органических растворителях при 20 °C (г/л): ацетон - 29,3; дихлорметан - 14,4; этилацетат - 25,4; н-гептан - 25. Коэффициент распределения в системе н-октанол - вода logK_ow - 3,1 (pH 7).

Агрегатное состояние в воздушной среде - аэрозоль.

Валифеналат - фунгицид, управляющий различными типами плесени в зерновых культурах, винограде, картофеле, томатах.

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице для соответствующих диапазонов концентраций.

Измерения концентраций валифеналата выполняют методом капиллярной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с электронозахватным детектором (ЭЗД).

Концентрирование валифеналата из воздушной среды осуществляют на бумажные фильтры, экстракцию с фильтров проводят ацетоном. Смыв с кожных покровов проводят этиловым спиртом.

Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 0,1 нг. Средняя полнота извлечения с фильтров - 92,5% (воздух рабочей зоны и атмосферный воздух), с поверхности кожи - 87,81%.

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующей дополнительной очистки растворителей.

Примечание. Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ Р 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.

4.3. При работе с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см²), необходимо соблюдать "Правила устройства и безопасной эксплуатации стационарных компрессорных установок, воздухопроводов и газопроводов под давлением", ПБ-03-576-03. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив на нем понижающий редуктор.

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на газовом хроматографе, освоивших данную методику и подтвердивших экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), кондиционирование хроматографической колонки, приготовление растворов для градуировки, установление градуировочной характеристики, подготовка фильтров и салфеток для отбора проб, отбор проб.

Ацетон перегоняют над небольшим количеством перманганата калия и прокаленным карбонатом калия или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 30. Перегнанный растворитель хранят в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 14 дней.

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора (на 1 дм³ ацетонитрила 20 г пентоксида фосфора) не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1 дм³ ацетонитрила 10 г карбоната калия).

7.2.1. Исходный раствор валифеналата для градуировки (концентрация 100 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 0,0100 г валифеналата, растворяют в 50 - 60 см³ ацетона, доводят ацетоном до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в холодильнике при температуре 4 - 6 °C в течение 3 месяцев.

7.2.2. Раствор N 1 валифеналата для градуировки и внесения (концентрация 10 мкг/см³). В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают 10 см³ исходного раствора валифеналата для градуировки с концентрацией 100 мкг/см³ (п. 7.2.1), доводят ацетоном до метки, получают раствор N 1 валифеналата для градуировки с концентрацией 10 мкг/см³.

Градуировочный раствор N 1 хранят в холодильнике при температуре 4 - 6 °C в течение 1 месяца.

7.2.3. Растворы N 2 - 6 для градуировки и внесения (концентрация 0,1 - 1,0 мкг/см³). В мерные колбы вместимостью 100 см³ помещают по 1,0; 2,5; 4,0; 5,0 и 10 см³ градуировочного раствора N 1 с концентрацией 10 мкг/см³ (п. 7.2.2), доводят до метки ацетоном, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 6 с концентрацией валифеналата 0,1; 0,25; 0,4; 0,5 и 1,0 мкг/см³ соответственно. Рабочие растворы для градуировки хранят в холодильнике при температуре 4 - 6 °C в течение 2 недель.

Эти растворы используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом "внесено-найдено", а также контроле качества результатов методом добавок.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость суммы площадей пиков изомеров валифеналата (мВ·с) от его концентраций в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 5 растворам для градуировки N 2 - 6, приготовленным по п. 7.2.3.

В испаритель хроматографа вводят по 1 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 7.3.1 или 7.3.2. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений. Устанавливают сумму площадей пиков изомеров валифеналата (мВ·с), на основании которых строят градуировочную зависимость.

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах.

Газовый хроматограф, снабженный детектором электронного захвата

Хроматографическая, капиллярная, кварцевая колонка, длиной 30 м, внутренним диаметром 0,32 мм, содержащая сорбент: 14% - цианопропилфенил, 86% - метилполисилоксан (толщина пленки сорбента 0,5 мкм.

Температура детектора: 300 °C.

Температура испарителя: 270 °C.

Температура термостата колонки программированная. Начальная температура - 200 °C, выдержка 2 мин; нагрев колонки со скоростью 10 градусов в минуту до температуры 220 °C, выдержка 2 мин; нагрев колонки со скоростью 5 градусов в минуту до температуры 260 °C, выдержка 2 мин.

Газ 1 (азот): давление 60,0 кПа, поток 1,50 см³/мин, 32,1 см/с.

Газ 2 (азот): деление потока 1:3,0; сброс 6,0 см³/мин (1 мин), до 20 см³/мин.

Хроматографируемый объем: 1 мм³.

Линейный диапазон детектирования: 0,1 - 1,0 нг.

Хроматографическая, капиллярная, кварцевая колонка, длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, содержащая сорбент: 5% - фенилполисилоксан, 95% - диметилполисилоксан (толщина пленки сорбента 0,25 мкм).

Температура детектора: квадруполя - 150 °C, источника - 230 °C; переходной камеры - 280 °C.

Температура испарителя: 260 °C.

Температура термостата колонки программированная. Начальная температура - 180 °C, выдержка 2 мин; нагрев колонки со скоростью 10 градусов в минуту до температуры 220 °C, выдержка 2 мин; нагрев колонки со скоростью 5 градусов в минуту до температуры 260 °C, выдержка 10 мин.

Газ 1 (гелий): поток в колонке 1,0 см³/мин.

Давление: 140,8 кПа.

Средняя линейная скорость: 46 см/с.

Хроматографируемый объем: 1 мм³.

Режим сканирования.

Линейный диапазон детектирования: 0,1 - 1,0 нг.

Диаметр бумажного фильтра высокой плотности должен соответствовать внутреннему диаметру фильтродержателя.

Фильтры последовательно по 3 раза промывают на воронке Бюхнера этанолом, затем ацетонитрилом порциями 25 - 30 см³, сушат с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, затем на воздухе при комнатной температуре. До использования фильтры хранят в герметично закрытой стеклянной таре.

Навеску (25 +/- 0,1) г натрия углекислого помещают в мерную колбу вместимостью 500 см³, растворяют в деионизированной воде, доводят водой до метки, перемешивают.

Вырезают салфетки (лоскуты) из белой бязи размером 10 x 10 см, затем их последовательно обрабатывают 5%-м раствором углекислого натрия (при кипячении), водой до нейтральной реакции промывных вод, 2-кратно промывают этиловым спиртом, сушат на воздухе при комнатной температуре. До использования салфетки хранят в герметично закрытой стеклянной таре.

Отбор проб осуществляют в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны" и Р 2.2.2006-05 (прилож. 9, обязательное) "Общие методические требования к организации и проведению контроля содержания вредных веществ в воздухе рабочей зоны", п. 2 "Контроль соответствия максимальным ПДК".

Воздух с объемным расходом 1 - 5 дм³/мин аспирируют через бумажный фильтр, помещенный в фильтродержатель.

Для измерения концентрации валифеналата на уровне предела обнаружения 0,1 мг/м³ необходимо отобрать 5 дм³ воздуха.

Срок хранения отобранных проб, помещенных в полиэтиленовые пакеты, в холодильнике при температуре 4 - 6 °C - 14 дней. Для длительного хранения пробы помещают в морозильную камеру при температуре (-18 +/- 2) °C.

Отбор проб осуществляют в соответствии с требованиями ГОСТ 17.2.4.02-81 "ОПА. Общие требования к методам определения загрязняющих веществ в воздухе населенных мест". Воздух с объемным расходом 5 дм³/мин аспирируют через бумажный фильтр, помещенный в фильтродержатель.

Для измерения концентрации валифеналата на уровне предела обнаружения (0,0008 мг/м³) необходимо отобрать 125 дм³ воздуха.

Срок хранения отобранных проб, помещенных в полиэтиленовые пакеты, в холодильнике (4 +/- 2) °C - 14 дней. Для длительного хранения пробы помещают в морозильную камеру при температуре (-18 +/- 2) °C.

Смывы проводят в конце работы или после выполнения отдельных операций с открытых и закрытых спецодеждой или другими СИЗ участков тела (лоб, лицо, шея, грудь, предплечье, голень, кисти рук, включая межпальцевые промежутки).

До работы выбирают участок кожи, обрабатывают его для удаления загрязнений, фиксируют площадь (не менее 200 см²). При необходимости отбирают фоновые смывы.

Смыв выполняют способом обмыва фиксированного участка кожи этиловым спиртом, помещая 20 см³ в стеклянную емкость с металлической крышкой. Тканевой салфеткой, смоченной растворителем, с помощью пинцета (индивидуально) обмывают этот участок сверху вниз. Операцию повторяют дважды.

Срок хранения отобранных проб смывов, помещенных в герметично закрытые емкости, в холодильнике при температуре (4 +/- 2) °C - 14 дней. Для длительного хранения пробы помещают в морозильную камеру при температуре (-18 +/- 2) °C.

Экспонированный фильтр переносят в химический стакан вместимостью 150 см³, заливают 10 см³ ацетона, помещают на встряхиватель на 15 мин. Растворитель сливают, фильтр еще дважды обрабатывают новыми порциями ацетона объемом 10 см³, выдерживая на встряхивателе по 10 мин.

Объединенный экстракт переносят (через воронку) в круглодонную колбу, упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °C почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха. Остаток растворяют в 5 см³ (воздух рабочей зоны) или в 1 см³ (атмосферный воздух) ацетона, тщательно перемешивают и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 7.3.1 или 7.3.2.

Пробу вводят в испаритель хроматографа не менее двух раз. Устанавливают сумму площадей пиков изомеров вещества, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию валифеналата в хроматографируемом растворе.

Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор 1,0 мкг/см³, разбавляют ацетоном (не более, чем в 50 раз).

Пробу смыва сливают (через воронку) в колбу для упаривания, с помощью пинцета извлекают салфетку, помещают в конусную химическую воронку, установленную в муфту колбы для упаривания, тщательно отжимают и промывают этиловым спиртом дважды порциями по 10 см³, предварительно ополаскивая растворителем емкость, в которой находилась проба.

Объединенный раствор упаривают в грушевидной колбе на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °C почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха. Остаток растворяют в 5 см³ ацетона и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 7.3.1 или 7.3.2.

Пробу вводят в испаритель хроматографа не менее двух раз. Устанавливают сумму площадей пиков изомеров вещества, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию валифеналата в хроматографируемом растворе.

Образцы, дающие пики большие чем градуировочный раствор с концентрацией 1,0 мкг/см³, разбавляют ацетоном (не более чем в 50 раз).

Концентрацию валифеналата в пробе воздуха (X), мг/м³, рассчитывают по формуле:

C - концентрация валифеналата в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной суммы площадей хроматографических пиков изомеров, мкг/см³;

W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³;

V_t - объем пробы воздуха, отобранный для анализа, приведенный к стандартным условиям (давление 760 мм рт. ст., температура 20 °C), дм³:

T - температура воздуха при отборе проб (на входе в аспиратор), °C;

P - атмосферное давление при отборе пробы, мм рт. ст.;

u - расход воздуха при отборе пробы, дм³/мин;

t - длительность отбора пробы, мин;

R - коэффициент, равный 0,386 для воздуха рабочей зоны; 0,357 - для атмосферного воздуха.

Концентрацию валифеналата в пробе смыва X, мкг/смыв, рассчитывают по формуле:

C - концентрация валифеналата в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной суммы площадей хроматографических пиков изомеров валифеналата, мкг/см³;

W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см³.

Примечание. Идентификация и расчет концентрации вещества в пробах могут быть проведены с помощью компьютерной программы обработки хроматографических данных, включенной в аналитическую систему.

Результат количественного анализа представляют в виде:

- результат анализа в мг/м³ (мкг/смыв), характеристика погрешности , % (таблица), P = 0,95 или

- среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/м³ (мкг/смыв);

- граница абсолютной погрешности, мг/м³ (мкг/смыв):

- граница относительной погрешности методики (показатель точности по диапазону концентраций, таблица), %.

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.

Если содержание вещества менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание валифеналата в пробе воздуха рабочей зоны - менее 0,1 мг/м³; в пробе атмосферного воздуха - менее 0,0008 мг/м³, в пробе смыва - менее 0,5 мкг/смыв" <*>.

--------------------------------

<*> 0,1 мг/м³; 0,0008 мг/м³; 0,5 мкг/смыв - пределы обнаружения валифеналата при отборе 5 дм³ воздуха рабочей зоны, при отборе 125 дм³ воздуха атмосферного воздуха; в пробе смыва (фиксированная площадь смыва, 200 см²) соответственно.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-(1-6)-02 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Контроль стабильности градуировочной характеристики.

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов градуировочных растворов, содержание валифеналата в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,1 до 1,0 мкг/см³.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

X - концентрация вещества в пробе при контрольном измерении, мкг/см³;

C - известная концентрация градуировочного раствора вещества, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см³;

B - норматив контроля стабильности градуировочной характеристики, % (равен 10% при P = 0,95).

Если величина расхождения (A) превышает 10%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов вещества, предусмотренных МВИ. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики устанавливают ее заново согласно п. 7.3.

Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

Образцами для контроля являются реальные пробы воздушной среды и смывов с кожных покровов. Объем отобранных для контроля процедуры выполнения анализа проб воздуха и смывов с кожи должен соответствовать удвоенному объему, необходимому для проведения анализа по методике, фиксированная площадь смыва должна быть увеличена в 2 раза. После отбора проб экстракт с фильтров "синяя лента", а также пробу смыва делят на две равные части, первую из которых анализируют в точном соответствии с прописью методики и получают результат анализа исходной рабочей пробы - X. Во вторую часть делают добавку анализируемого компонента (величина добавки X_д должна соответствовать 50 - 150% от содержания компонента в пробе, общая концентрация не должна превышать верхнюю границу диапазона измерения) и анализируют в точном соответствии с прописью методики, получая результат анализа рабочей пробы с добавкой - X'. Результаты анализа исходной рабочей пробы (X) и рабочей пробы с добавкой (X') получают в условиях повторяемости (один аналитик, использование одного набора мерной посуды, одной партии реактивов и т.д.).

Величина добавки C_д, должна удовлетворять условию:

- характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/м³, мкг/смыв.

Допустимо характеристику погрешности результатов анализа при внедрении методики в лаборатории устанавливать с последующим уточнением по мере накопления информации на основе выражения , где

- граница абсолютной погрешности, мг/м³:

- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

Контроль проводят путем сравнения результата контрольной процедуры К_к с нормативом контроля К.

Результат контрольной процедуры К_к рассчитывают по формуле:

, , C_д - среднее значение массовой концентрации анализируемого компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно (мг/м³, мкг/смыв).

Норматив оперативного контроля точности К рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контрольной процедуры (К_к) с нормативом контроля (К).

Если результат контрольной процедуры удовлетворяет условию

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (1) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (1) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R):

R - предел воспроизводимости (таблица), мг/м³, мкг/смыв.

(воздух рабочей зоны);

(атмосферный воздух);

(смывы с кожи).

, где Х₁, Х₂ - результаты измерений в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), мг/м³, мкг/смыв.

Если выполняется условие (2), то воспроизводимость измерений считается удовлетворительной.

При превышении норматива контроля воспроизводимости эксперимент повторяют, при повторном превышении указанного норматива выясняют причины и по возможности их устраняют.