"МУК 4.1.2926-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Хлорпирифос-метила в зеленой массе и корнеплодах сахарной свеклы, семенах и масле рапса методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 12.07.2011)

1. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 02.06.2011 N 1).

2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 12 июля 2011 г.

3. Введены в действие с момента утверждения.

4. Введены впервые.

Свидетельство о метрологической аттестации N 0090.05.05.11 от 11.05.2011.

Настоящие Методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения уровня остаточных количеств Хлорпирифос-метила в зеленой массе и корнеплодах сахарной свеклы, семенах и масле рапса в диапазоне 0,02 - 0,2 мг/кг.

Название по ИЮПАК: О,О-диметил О-(3,5,6-трихлор-2-пиридил)тиофосфат.

Структурная формула (не приводится).

Растворимость в воде: 2,6 мг/куб. дм (20 °C).

Растворимость в органических растворителях (г/кг, при 20 °C): в метаноле - 190, в ацетоне - более 400, в гексане - 120.

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.

Метод основан на определении Хлорпирифос-метила методом капиллярной газожидкостной хроматографии с использованием детектора по захвату электронов после экстракции его из образцов ацетонитрилом и очистки экстракта на колонках с окисью алюминия.

Идентификация проводится по времени удерживания двух характерных пиков, а количественное определение - методом абсолютной калибровки по сумме двух характерных пиков.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Избирательность обеспечивается путем подбора капиллярной колонки и условий программирования температуры.

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C, относительной влажности не более 80% и нормальном атмосферном давлении;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка колонок с окисью алюминия для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на колонках с окисью алюминия, установление градуировочной характеристики.

7.1.1. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/куб. дм. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 ч. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см аппарата для перегонки растворителей.

Ацетонитрил перегоняют при температуре 81,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81,5 °C, отбрасывают.

7.1.2. Очистка ацетона

Ацетон помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцово-кислый калий из расчета 1 г/куб. дм.

Ацетон перегоняют при температуре 56,2 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 56,2 °C, отбрасывают.

7.1.3. Приготовление бидистиллированной воды

Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцово-кислый калий из расчета 1 г/куб. дм и кипятят в течение 6 ч.

Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °C, отбрасывают.

7.2.1. Приготовление рабочих растворов

7.2.1.1. Приготовление 1%-го раствора полиэтиленгликоля.

Мерной пипеткой отбирают 1 куб. см полиэтиленгликоля и переносят в мерную колбу на 100 куб. см, добавляют 50 куб. см диэтилового эфира. Раствор перемешивают и доводят эфиром объем в колбе до метки.

7.2.2. Приготовление градуировочных растворов

7.2.2.1. Стандартный раствор N 1 с концентрацией Хлорпирифос-метила 1,0 мг/куб. см.

Взвешивают 50 мг Хлорпирифос-метила в мерной колбе объемом 50 куб. см. Навеску растворяют в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном. Полученный стандартный раствор N 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор N 1 хранится в холодильнике не более 6 месяцев.

7.2.2.2. Стандартный раствор N 2 с концентрацией Хлорпирифос-метила 10,0 мкг/куб. см.

Из стандартного раствора N 1 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 100 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 2 используется для приготовления стандартных растворов и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор N 2 хранится в холодильнике не более 4 месяцев.

7.2.2.3. Стандартный раствор N 3 с концентрацией Хлорпирифос-метила 1,0 мкг/куб. см.

Из стандартного раствора N 2 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки гексаном. Стандартный раствор N 3 используется для приготовления стандартных растворов и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор N 3 хранится в холодильнике не более 4 месяцев.

7.2.2.4. Стандартный раствор N 4 с концентрацией Хлорпирифос-метила 0,2 мкг/куб. см.

Из стандартного раствора N 3 отбирают пипеткой 2 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки гексаном. Стандартный раствор N 4 используется для приготовления стандартных растворов и установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике не более 7 дней.

7.2.2.5. Стандартный раствор N 5 с концентрацией Хлорпирифос-метила 0,1 мкг/куб. см.

Из стандартного раствора N 3 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки гексаном. Стандартный раствор N 4 используется для приготовления стандартных растворов и установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике не более 7 дней.

7.2.2.6. Стандартный раствор N 6 с концентрацией Хлорпирифоса 0,05 мкг/куб. см.

Из стандартного раствора N 5 отбирают пипеткой 5 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки гексаном. Стандартный раствор N 5 используется для установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике не более 7 дней.

7.2.2.7. Стандартный раствор N 7 с концентрацией Хлорпирифоса 0,02 мкг/куб. см.

Из стандартного раствора N 4 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки гексаном. Стандартный раствор N 6 используется установления градуировочной характеристики и хранится в холодильнике не более 7 дней.

7.2.2.8. Стандартные растворы Хлорпирифос-метила с концентрацией 2, 1, 0,5, 0,2 мкг/куб. см для внесения в образцы.

Методом последовательного разведения ацетоном стандартного раствора N 2 готовят растворы, содержащие по 2,0; 1,0; 0,5; 0,2 мкг/куб. см Хлорпирифос-метила, и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации Хлорпирифос-метила в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 0,2; 0,1; 0,05 и 0,02 мкг/куб. см.

В испаритель хроматографа вводят по 1 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.4. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.

7.4.1. Подготовка колонки с окисью алюминия для очистки экстракта

В пластиковую или стеклянную колонку диаметром 15 мм помещают 3 г окиси алюминия с зернением 40/250 меш. и, аккуратно постукивая по стенкам колонки, формируют слой адсорбента. Непосредственно перед использованием колонку промывают 10 куб. см ацетона.

7.4.2. Проверка хроматографического поведения Хлорпирифос-метила на колонке с окисью алюминия

В концентратор объемом 100 куб. см вносят 1 куб. см стандартного раствора Хлорпирифос-метила в гексане с концентрацией 0,2 мкг/куб. см и выпаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 10 куб. см ацетона, тщательно обмывают стенки концентратора и наносят на подготовленную колонку. Элюат собирают в концентратор объемом по 100 куб. см и выпаривают с добавлением 1 куб. см 1%-го раствора полиэтиленгликоля досуха при температуре не выше 30 °C.

Исходную колбу обмывают еще пятью порциями ацетона объемом 10 куб. см каждая и последовательно вносят их на колонку. Каждую порцию собирают отдельно в концентраторы объемом по 100 куб. см и выпаривают досуха с добавлением 1 куб. см 1%-го раствора полиэтиленгликоля на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

Сухой остаток каждой фракции растворяют в 1 куб. см гексана и 1 куб. мм пробы вводят в хроматограф.

Определяют фракции, содержащие Хлорпирифос-метил, полноту смывания с колонки и необходимый объем элюента.

Изучение поведения Хлорпирифос-метила на колонке проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии окиси алюминия.

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" N 2051-79 от 21.08.79, а также по ГОСТ 27262-87 "Корма растительного происхождения. Методы отбора проб" и ГОСТ Р 52647-2006 "Свекла сахарная. ТУ", ГОСТ 10852-86 "Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб", ГОСТ Р 53457-2009 "Масло рапсовое, ТУ", ГОСТ Р 52062-2003 "Масла растительные. Правила приемки и методы отбора проб".

Пробы зеленой массы и корнеплодов сахарной свеклы хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре 0 - 4 °C не более суток. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре -18 °C до 2-х лет.

Пробы семян рапса хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.

Пробы масла рапса хранят в плотно закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре 0 - 4 °C.

9.1.1. Экстракция

Образец измельченной зеленой массы или корнеплодов сахарной свеклы массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 куб. см, добавляют 50 куб. см ацетонитрила и помещают на 30 мин. на аппарат для встряхивания проб. Экстракт фильтруют в коническую колбу объемом 250 куб. см с 5 г хлористого натрия через фильтр "красная лента". Экстракцию повторяют еще два раза, используя каждый раз по 30 куб. см ацетонитрила и помещая каждый раз на 15 мин. на аппарат для встряхивания проб. Экстракты объединяют в конической колбе с хлоридом натрия, перемешивают и выдерживают при комнатной температуре 10 мин.

Затем содержимое колбы (без нерастворившейся соли) переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см и выдерживают 5 мин. Выделившуюся нижнюю водную фазу отбрасывают, а верхний ацетонитрильный экстракт собирают в концентратор объемом 250 куб. см через слой безводного сульфата натрия и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

9.1.2. Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия

Сухой остаток в концентраторе, полученный в п. 9.1.1, растворяют в 10 куб. см ацетона и наносят на заранее подготовленную колонку, элюат собирают. Исходную колбу обмывают еще двумя порциями ацетона по 10 куб. см каждая и наносят последовательно на колонку. Элюаты объединяют в концентраторе объемом 100 куб. см и выпаривают досуха с добавлением 1 куб. см 1%-го раствора полиэтиленгликоля на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 30 °C.

Сухой остаток растворяют в 10 куб. см гексана и 1 куб. мм вводят в хроматограф.

9.2.1. Экстракция

Образец измельченных семян рапса 10 г помещают в полипропиленовую банку объемом 250 куб. см, добавляют 50 куб. см ацетонитрила и встряхивают смесь на аппарате для встряхивания проб в течение 45 мин. По окончании встряхивания экстракт фильтруют методом декантации через фильтр "красная лента" в делительную воронку емкостью 250 куб. см. Повторяют экстракцию еще дважды, используя 30 куб. см ацетонитрила и встряхивая смесь каждый раз по 30 мин. на аппарате для встряхивания проб.

К объединенному ацетонитрильному экстракту в делительной воронке добавляют 20 куб. см гексана и интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения слоев нижний ацетонитрильный слой собирают в плоскодонную колбу объемом 250 куб. см, а верхний гексановый отбрасывают. Ацетонитрильную фракцию возвращают в делительную воронку. Повторяют процедуру еще раз, используя 20 куб. см гексана. Ацетонитрильный экстракт собирают в концентратор, пропуская через слой безводного сульфата натрия, и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 30 °C.

Далее проводят очистку пробы на колонке с окисью алюминия, как указано в п. 9.1.2. "Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия".

Сухой остаток растворяют в 10 куб. см гексана и 1 куб. мм вводят в хроматограф.

9.3.1. Экстракция

Из пробы рапсового масла отбирают в стакан навеску массой 5 г и переносят ее в делительную воронку объемом 250 куб. см двумя порциями гексана объемом по 25 куб. см. Добавляют в делительную воронку 50 куб. см ацетонитрила и встряхивают смесь в течение 2 мин. После полного разделения слоев нижний (ацетонитрильный) слой собирают в плоскодонную колбу объемом 250 куб. см. Повторяют экстракцию еще дважды, используя по 50 куб. см ацетонитрила, встряхивая смесь каждый раз по 2 мин. Объединенный ацетонитрильный экстракт переносят в новую делительную воронку, добавляют 20 куб. см гексана и интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения слоев нижний ацетонитрильный слой собирают в плоскодонную колбу объемом 250 куб. см, а верхний гексановый отбрасывают. Ацетонитрильную фракцию возвращают в делительную воронку. Повторяют процедуру еще раз, используя 20 куб. см гексана. Ацетонитрильный экстракт собирают в концентратор и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 30 °C.

Далее проводят очистку пробы на колонке с окисью алюминия, как указано в п. 9.1.2. "Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия".

Сухой остаток растворяют в 5 куб. см гексана и 1 куб. мм вводят в хроматограф.

Хроматограф газовый HP6890 Series GC System с детектором по захвату электронов (ЭЗД) в модификации с электронным управлением пневмонической системы (ЭУПС).

Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая Rtx-1 (100% диметилполисилоксана), длина 30 м, внутренний диаметр 0,25 мм, толщина пленки 0,25 мкм.

Температура детектора - 300 °C, поток обдува анода (азот) - 6,0 куб. см/мин., поток поддува - 59,2 куб. см/мин.

Температура испарителя - 220 °C, тип газа - гелий, режим Split, давление 15,64 psi, деление потока 20:1, split поток 16,0 мл/мин.

Программированный нагрев колонки с 180 °C (выдержка 1 мин.) по 2 град./мин. до 200 °C, с 200 °C по 30 град./мин. до 240 °C (выдержка 2 мин.), режим - постоянный поток, поток колонки 0,8 куб. см/мин., средняя скорость 26 см/с.

Абсолютное время удерживания Хлорпирифос-метила: 8,578 мин. +/- 3%.

Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,02 - 0,2 нг.

Для обработки результатов хроматографического анализа используется программное обеспечение химического анализа HP GC ChemStation Rev. A.06.03RUS.

Альтернативная обработка результатов.

Содержание Хлорпирифос-метила рассчитывают по формуле:

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание вещества в пробе менее 2,0 мг/кг" <*>.

--------------------------------

<*> 2,0 мг/кг - предел обнаружения.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений, а также контроль стабильности градуировочной характеристики осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Контроль стабильности градуировочной характеристики.

Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

Контроль стабильности градуировочной характеристики для Хлорпирифос-метила проводят при смене основного градуировочного раствора N 1 каждые 6 месяцев, при смене основных градуировочных растворов N 2 и 3 - каждые 4 месяца, при смене основных градуировочных растворов N 4, 5 и 6 - каждые 7 дней, а также в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее трех образцов концентраций для градуировки, содержание Хлорпирифос-метила в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,02 до 0,2 мкг/куб. см.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

где:

X - концентрация Хлорпирифос-метила контрольного измерения, мкг/куб. см;

C - известная концентрация градуировочного раствора Хлорпирифос-метила в гексане, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/куб. см;

5,62 - погрешность градуировочной характеристики, %.

Если величина расхождения (А) превышает 5,62%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов Хлорпирифос-метила, предусмотренных МВИ. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново согласно п. 7.3.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:

Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R):

Российский государственный аграрный университет - МСХА имени К.А. Тимирязева.

Учебно-научный консультационный центр "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов".