"МУК 4.1.2986-12. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств кломазона в капусте методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 19.03.2012)

Свидетельство о метрологической аттестации от 23.09.2011 N 01.5.04.032/01.00043/2011.

Настоящие методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения в капусте массовой концентрации кломазона в диапазоне концентраций 0,01 - 1,0 мг/кг.

Название вещества по ИСО: кломазон.

Название вещества по ИЮПАК: 2-(2-хлоробензил)-4,4-диметил-1,2-оксазолидин-3-он.

Структурная формула:

Эмпирическая формула: .

Молекулярная масса: 239,7.

Химически чистый кломазон представляет собой вязкую светло-коричневую жидкость.

Плотность - 1,192 при 20 °C.

Давление паров при 25 °C - 19,2 мПа.

Растворимость в воде - 1,1 г/л.

Растворимость в органических растворителях: хорошо растворим в ацетоне, ацетонитриле, хлороформе, циклогексаноне, гексане, гептане, хлористом метилене, метаноле, диметилформамиде, толуоле, диоксане и других органических растворителях.

Коэффициент распределения в системе октанол - вода при 20 °C lg P = 2,5.

Кломазон устойчив при хранении. При комнатной температуре может храниться без потерь в течение года, при 50 °C - в течение 3 месяцев. В водных растворах период полураспада при солнечном свете более 30 дней, в почве - 30 - 135 дней (в зависимости от почвенно-климатических условий).

Краткая токсикологическая характеристика

для крыс - 1369 - 2077 мг/кг. для мышей - 2 350 мг/кг.

Гигиенические нормативы. МДУ кломазона в капусте не установлен.

Область применения

Селективный системный гербицид, используемый для борьбы со злаковыми и некоторыми двудольными сорными растениями на посевах сои, кукурузы, рапса, гороха и ряде овощных культур при довсходовом и послевсходовом внесении. Он хорошо проникает в растение через корни и листья и подавляет рост и развитие двудольных и злаковых сорняков.

2.1. Принцип метода

Метод определения кломазона в капусте основан на экстракции пестицида органическим растворителем и очистке на патроне Диапак С. Количественное определение кломазона проводят методом газожидкостной хроматографии с капиллярной колонкой и использованием термоионного детектора.

Идентификация кломазона проводится по времени удерживания, количественное определение - методом абсолютной калибровки.

2.2. Метрологическая характеристика метода

Метрологическая характеристика метода представлена в табл. 1 и 2.

2.3. Избирательность метода

Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.

3.1. Средства измерений

Примечание. Допускается использование средств измерения иных производителей с аналогичными характеристиками.

3.2. Реактивы

Примечание. Допускается использование реактивов квалификацией не ниже указанных.

3.3. Вспомогательные устройства и материалы

Примечание. Допускается использование другого вспомогательного оборудования иных производителей с аналогичными техническими характеристиками.

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-2009, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

4.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и ГН 2.2.5.2308-07.

Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.

4.3. При работе с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см2), необходимо соблюдать "Правила устройства и безопасной эксплуатации стационарных компрессорных установок, воздухопроводов и газопроводов под давлением", ПБ-03-576-03.

Запрещается открывать вентиль баллона, не установив на нем понижающий редуктор.

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом газожидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.

При выполнении измерений выполняют следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Отбор проб капусты проводят в соответствии с ГОСТ 1724-85 "Капуста белокочанная свежая. Заготовка и поставка" или ГОСТ 7967-87 "Капуста краснокочанная свежая. Заготовка и поставка".

Для длительного хранения аналитические пробы капусты помещают в герметично закрытый двойной полиэтиленовый пакет и хранят в морозильной камере с температурой -18 °C.

8.1. Кондиционирование колонки

Капиллярную или насадочную колонку перед анализом кондиционируют в токе азота при температуре 250 °C до установления нулевой линии.

8.2. Подготовка и очистка реактивов и растворителей

Перед началом работы рекомендуется проверить чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 см3 растворителя упаривают в ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °C до объема 1,0 см3 и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку растворителей производят в соответствии с типовыми методиками.

8.3. Приготовление элюента N 1

Для приготовления раствора гексан/этилацетат в соотношении 9/1 в мерную колбу на 100 см3 вносят 10 см3 этилацетата и доводят до метки гексаном.

8.4. Приготовление стандартного и градуировочных растворов

8.4.1. Основной раствор с концентрацией 100 мкг/см3. Точную навеску кломазона (10 +/- 0,1) мг помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3, растворяют в гексане и доводят объем до метки гексаном.

Градуировочные растворы кломазона с концентрациями 10,0; 5,0; 1,0; 0,2 и 0,1 мкг/см3 готовят методом последовательного разбавления основного раствора, используя гексан.

8.4.2. Раствор N 1 с концентрацией кломазона 10 мкг/см3. В мерную колбу вместимостью 10 см3 вносят 1 см3 основного раствора и доводят объем до метки гексаном.

8.4.3. Раствор N 2 с концентрацией кломазона 5 мкг/см3. В мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 5 см3 раствора N 1 и доводят объем до метки гексаном.

8.4.4. Раствор N 3 с концентрацией кломазона 1 мкг/см3. В мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 1 см3 раствора N 1 и доводят объем до метки гексаном.

8.4.5. Раствор N 4 с концентрацией кломазона 0,2 мкг/см3. В мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 2 см3 раствора N 3 и доводят объем до метки гексаном.

8.4.6. Раствор N 5 с концентрацией кломазона 0,1 мкг/см3. В мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 1 см3 раствора N 3 и доводят объем до метки гексаном.

Основной раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °C в течение 1 месяца, градуировочные растворы - в течение суток. Для внесения в образец при определении полноты извлечения используют основной раствор кломазона, разбавленный гексаном до соответствующей концентрации.

8.5. Построение градуировочного графика

Для построения градуировочного графика в хроматограф вводят по 1 мм3 градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют высоты или площади пиков и строят график зависимости среднего значения высоты (площади) пика от концентрации кломазона в градуировочном растворе (мкг/см3).

Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.

Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:

где C - аттестованное значение массовой концентрации кломазона в градуировочном растворе;

- результат контрольного измерения массовой концентрации кломазона в градуировочном растворе;

- норматив контроля градуировочного коэффициента, % ( при P = 0,95).

8.6. Проверка хроматографического поведения кломазона на патронах Диапак С

Перед употреблением патрон промывают 10 - 15 см3 гексана. Затем в патрон вносят 3 см3 градуировочного раствора кломазона N 3 (1 мкг/см3 кломазона в гексане) и промывают 5 см3 гексана. Элюат отбрасывают. Для определения фракции, содержащей кломазон, используют элюент N 1 (гексан/этилацетат - 9/1, по объему). В патрон вносят 6 см3 элюента N 1 и отбирают фракции элюата по 1 см3 в мерные пробирки на 5 см3. Элюаты выпаривают досуха с помощью установки для упаривания растворителей в токе азота. Сухие остатки растворяют в 1 см3 гексана и последовательно вводят в хроматограф. Фракции, содержащие кломазон, объединяют.

8.7. Подготовка приборов и средств измерения

Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводятся в соответствии с требованиями технической документации.

9.1. Экстракция кломазона из капусты

Капусту измельчают, берут навеску (10 +/- 0,1) г, помещают в коническую колбу на 250 см3, проводят экстракцию 70 см3 гексана на ультразвуковой бане в течение 10 мин, экстракцию повторяют дважды порциями по 40 см3. Объединенный экстракт фильтруют через бумажный фильтр "красная лента" и упаривают на роторном испарителе при температуре не выше 40 °C до объема 1 - 2 см3. Дальнейшую очистку проводят на патронах Диапак С по п. 9.2.

9.2. Очистка экстрактов на патронах Диапак С

Количественно переносят в патрон 1 - 2 см3 полученного по п. 9.1 экстракта и промывают 3 см3 гексана, фильтрат отбрасывают. Кломазон элюируют 4 см3 элюента N 1 (гексан/этилацетат - 9/1), собирая в колбу-концентратор на 10 см3, выпаривают досуха на роторном испарителе при температуре не выше 40 °C. Сухой остаток растворяют в 1 см3 гексана и хроматографируют.

9.3. Условия хроматографирования

Хроматограф газовый "Кристалл 2000М" с ДТИ.

Колонка капиллярная кварцевая длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм с неподвижной фазой НР-35, толщина слоя 0,25 мкм.

Температура колонки программируется от 170 °C (1 мин) до 250 °C (5 мин) со скоростью 25 °C/мин, температура испарителя 280 °C, детектора 380 °C.

Расход газа-носителя (азот) через колонку (давление на входе 100 кПа), (сброс пробы), (поддув ТИД), (водород к ТИД), (воздух к ТИД). Деление потока 1:1. Объем вводимой пробы - 1 мм3.

Время удерживания кломазона 5 мин (35 +/- 5) с.

Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки, содержание кломазона в пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

где - высота (площадь) пика кломазона в стандартном растворе, мм (мв x с);

- высота (площадь) пика кломазона в анализируемой пробе, мм (мв x с);

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см3;

P - навеска анализируемого образца, г;

C - концентрация кломазона в стандартном растворе, мкг/см3.

Содержание остаточных количеств кломазона в анализируемом образце вычисляют как среднее из 2 параллельных определений.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор кломазона 10 мкг/см3, разбавляют гексаном.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

где , - результаты параллельных определений, мг/кг;

r - значение предела повторяемости .

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

где - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

- граница абсолютной погрешности, мг/кг;

где - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

содержание вещества в пробе "менее нижней границы определения" (например: менее 0,01*, где * - 0,01 мг/кг - предел определения кломазона в капусте).

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.

Величина добавки должна удовлетворять условию:

где - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:

где - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

где - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

Результат контроля процедуры рассчитывают по формуле:

где , X, - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/кг (мг/дм3).

Норматив контроля K рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контроля процедуры с нормативом контроля (K).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

где и - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг (мг/дм3);

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций), %.

Долженко В.И., Цибульская И.А., Остроухова О.К. (ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений Россельхозакадемии, г. Санкт-Петербург).

Методика прошла метрологическую экспертизу (Свидетельство об аттестации N 01.5.04.032/01.00043/2011) и внесена в Федеральный реестр (ФР.1.31.2011.10797).