"МУК 4.1.3044-12. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств имидаклоприда в семенах и масле льна методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 08.10.2012)

1. Разработаны сотрудниками ГНУ Всероссийского НИИ защиты растений Россельхозакадемии.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 8 октября 2012 г.

3. Введены в действие с момента утверждения.

4. Введены впервые.

Свидетельство о метрологической аттестации N 01.5.04.090/01.00043/2012.

Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации имидаклоприда в семенах и масле льна в диапазоне концентраций 0,01 - 0,1 мг/кг.

Имидаклоприд

(Е)-1-(6-хлор-3-пиридилметил)-N-нитроимидазолидин-2-илиденамин (IUPAC)

(2Е)-1-[(6-хлор-3-пиридинил)метил]-N-нитро-2-имидазолидинимин (CAS)

Область применения препарата

Системный инсектицид и инсекто-протравитель группы неоникотиноидов. Эффективно уничтожает листовую тлю, белок-рылку, минеров, трипсов, колорадского жука, долгоносиков на хлопчатнике, рисе, картофеле, кукурузе, сахарной свекле, овощных культурах, цитрусовых, косточковых и семечковых плодовых в течение вегетационного периода. Может использоваться для обработки как почвы, так и надземных органов растений.

Гигиенические нормативы для имидаклоприда в льне масличном не установлены.

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих диапазонов концентраций.

Методика основана на определении имидаклоприда методом ВЭЖХ с использованием УФ-детектора после его извлечения из образцов ацетонитрилом с последующей очисткой на концентрирующих патронах Диапак С.

Идентификация имидаклоприда проводится по времени удерживания, количественное определение - методом абсолютной калибровки.

Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.

Примечание. Допускается использование средств измерения иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.

Примечание. Допускается использование реактивов иных производителей с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.

Примечание. Допускается применение оборудования иных производителей с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ Р 12.1.019-2009, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

4.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и ГН 2.2.5.2308-07.

Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 12.

При выполнении измерений выполняют следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Перед началом анализа колонку Acquity BEH C18 кондиционируют в потоке подвижной фазы (0,1 - 0,2 куб. см/мин.) до стабилизации нулевой линии.

Органические растворители при необходимости перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Гексан встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания свежей порции кислоты, затем промывают водой, 2% раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего его сушат над гидроксидом натрия и перегоняют. Ацетонитрил сушат над пентоксидом фосфора и перегоняют; отогнанный растворитель повторно перегоняют над углекислым калием.

Патрон с силикагелем Диапак С промывают 2 куб. см этилацетата, затем 3 куб. см элюента N 1.

Для приготовления подвижной фазы смешивают ацетонитрил с водой в соотношении 20:80 по объему, используя мерные цилиндры.

Приготовление элюента N 1: в колбе на 1000 куб. см смешивают 500 куб. см н-гексана и 500 куб. см этилацетата.

7.5.1. Основной раствор с концентрацией 0,5 мг/куб. см

Точную навеску имидаклоприда (50 мг) помешают в мерную колбу объемом 100 куб. см, растворяют в ацетонитриле и доводят до метки.

Градуировочные растворы с концентрациями 0,1; 0,2; 0,4; 0,8 и 1,0 мкг/куб. см готовят методом последовательного разбавления по объему, используя подвижную фазу.

7.5.2. Приготовление градуировочных растворов

Раствор N 1 с концентрацией имидаклоприда 1,0 мкг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 100 куб. см вносят 0,2 куб. см основного раствора и доводят объем до метки подвижной фазой.

Раствор N 2 с концентрацией имидаклоприда 0,8 мкг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 10 куб. см вносят 8,0 куб. см раствора N 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.

Раствор N 3 с концентрацией имидаклоприда 0,4 мкг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 10 куб. см вносят 4,0 куб. см раствора N 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.

Раствор N 4 с концентрацией имидаклоприда 0,2 мкг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 10 куб. см вносят 2,0 куб. см раствора N 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.

Раствор N 5 с концентрацией имидаклоприда 0,1 мкг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 10 куб. см вносят 1,0 куб. см раствора N 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.

Стандартный раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °С в течение 1 месяца, градуировочные растворы используют в течение рабочего дня.

При изучении полноты извлечения имидаклоприда используют ацетонитрильные растворы вещества, приготовленные из основного раствора методом последовательного разбавления по объему ацетонитрилом.

Для построения градуировочного графика (площадь пика - концентрация имидаклоприда в растворе) в хроматограф вводят по 10 куб. мм градуировочных растворов (не менее 3-х параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4-х точек по диапазону измеряемых концентраций). Затем измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации имидаклоприда в градуировочном растворе.

Методом наименьших квадратов рассчитывают градуировочный коэффициент (К) в уравнении линейной регрессии:

где S - площадь пика градуировочного раствора.

Градуировку признают удовлетворительной, если значение коэффициента линейной корреляции оказывается не ниже 0,99.

Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.

Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:

Отбор проб семян льна производится в соответствии с ГОСТ 10852-86 "Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб". Семена хранят при комнатной температуре в полотняных мешочках, перед анализом доводят до стандартной влажности и измельчают. Масло хранят в холодильнике при температуре 0 - 4 °С в герметично закрытой стеклянной таре в течение 6 месяцев.

Навеску размолотых на лабораторной мельнице семян (10 +/- 0,1) г или масла (10 +/- 0,1) г помешают в коническую колбу вместимостью 250 куб. см, прибавляют 40 куб. см ацетонитрила и экстрагируют имидаклоприд в УЗ-бане в течение 15 мин. при температуре 30 °С. Экстракцию повторяют с двумя свежими порциями ацетонитрила по 30 куб. см. Объединенный экстракт промывают в делительной воронке двумя порциями гексана по 25 куб. см. Гексановые промывки отбрасывают. Ацетонитрильный раствор выпаривают досуха на ротационном испарителе при температуре 40 °С. Далее пробу чистят на патроне Диапак С, как это описано в п. 9.2.

Сухой остаток, полученный по п. 9.1, растворяют в 1 куб. см элюента N 1, вносят в предварительно кондиционированный патрон, колбу ополаскивают 1 куб. см элюента N 1 и также вносят на патрон.

Патрон промывают 10 куб. см элюента N 1, элюат отбрасывают. Имидаклоприд элюируют 6 куб. см этилацетата, элюат собирают, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °С, остаток растворяют в 1 куб. см подвижной фазы и 10 куб. мм вводят в хроматограф.

Ультраэффективный жидкостный хроматограф "ACQUITY" фирмы Waters с быстросканирующим УФ-детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки.

Аналитическая колонка ACQUITY UPLC BEH C18 (2,1 х 100) мм, 1,7 мкм (Waters).

Температура колонки (30 +/- 1) °С.

Подвижная фаза: смесь ацетонитрил - вода в соотношении 20:80 (по объему).

Скорость потока элюента 0,2 куб. см/мин.

Рабочая длина волны УФ-детектора 268 нм.

Объем вводимой пробы 10 куб. мм.

Время удерживания имидаклоприда составляет (4,3 +/- 0,2) мин.

Содержание имидаклоприда в семенах и масле льна масличного (Х, мг/кг) вычисляют по формуле:

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор имидаклоприда 1 мкг/куб. см) разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

где - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание вещества в пробе "менее нижней границы определения" (например: менее 0,01 мг/кг)" <*>.

--------------------------------

<*> 0,01 мг/кг - предел обнаружения имидаклоприда в семенах и масле льна.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

12.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

12.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.

где - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:

где - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

где - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

Норматив контроля рассчитывают по формуле:

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

12.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):