"МУК 4.1.2910-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Фосэтил алюминия в плодах огурца, томата и томатном соке методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 12.07.2011)

1. Разработаны Российским государственным аграрным университетом МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научным консультационным центром "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов" Минсельхоза России.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 02.06.2011 N 1).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 12 июля 2011 г.

4. Введены в действие с момента утверждения.

5. Введены впервые.

Свидетельство о метрологической аттестации N 0070.06.12.10 от 08.12.2010.

Настоящие методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения уровня остаточных количеств Фосэтила алюминия в плодах огурцов, томатов и томатном соке в диапазоне 2,0 - 16,0 мг/кг.

Название действующего вещества по ИЮПАК: этилгидрофосфонат алюминия.

Структурная формула (не приводится).

Молекулярная масса: 354,1.

Химически чистый Фосэтил алюминий представляет собой бесцветный порошок.

Давление паров (при 25 °C): < 0,013 мПа.

Температура плавления: > 200 °C.

Область применения: Фосэтил алюминий - системный фунгицид защитного и искореняющего действия. Высокоэффективен против возбудителей болезней плодовых, овощных и декоративных культур и виноградной лозы, вызываемых грибами из класса Phycomycetes. Вещество ингибирует прорастание спор или подавляет развитие мицелия и споруляцию. Проявляет активность против некоторых бактериальных патогенов растений.

Применяется в России в качестве фунгицида на огурцах открытого грунта, луке и винограде с нормой расхода до 2 кг д.в./га и трехкратной обработкой за сезон.

В России для Фосэтил алюминия установлены следующие гигиенические нормативы: ДСД - 3,0 мг/кг массы человека; МДУ в плодах огурца - 0,5 мг/кг.

МДУ Фосэтила алюминия (в импортируемой продукции): плоды огурца - 75 мг/кг, плоды томата - 100 мг/кг.

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.

Метод основан на определении Фосэтила алюминия методом капиллярной газожидкостной хроматографии с использованием термоионного детектора после его экстракции из образцов 1%-м водным раствором серной кислотой и последующего получения его метилового производного.

Идентификация проводится по времени удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором капиллярной колонки и условий программирования температуры.

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C, относительной влажности не более 80% и нормальном атмосферном давлении;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики.

Диэтиловый эфир, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/куб. дм. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 ч. Затем эфир сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см аппарата для перегонки растворителей.

Диэтиловый эфир перегоняют при температуре 34,6 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 34,6 °C, отбрасывают.

Дистиллят помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцовокислый калий из расчета 1 г/куб. дм и кипятят в течение 6 ч.

Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °C, отбрасывают.

7.2.1.1. Приготовление 1%-го водного раствора серной кислоты.

Раствор готовят из химически чистой концентрированной серной кислоты с плотностью 1,83 путем разведения 10,5 куб. см кислоты очищенной водой в мерной колбе на 1000 куб. см.

7.2.1.2. Приготовление смеси изопропилового спирта с 1%-м раствором серной кислоты.

Раствор готовят в конической колбе на 100 куб. см, смешивая 90 куб. см изопропилового спирта и 10 куб. см 1%-й серной кислоты (соотношение 9:1 по объему).

7.2.1.3. Приготовление 40%-го раствора гидроокиси калия.

В мерную колбу на 100 куб. см переносят 40 г гидроокиси калия, куда предварительно наливают около 40 куб. см дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).

7.2.1.4. Получение N-нитрозо-N-метилмочевины.

При отсутствии коммерческого препарата нитрозометилмочевины осуществляют его синтез.

При получении нитрозометилмочевины соблюдать осторожность и обязательно работать под тягой.

В круглодонную колбу на шлифе вместимостью 1000 куб. см, снабженную обратным холодильником, помещают 80 г метиламина гидрохлорида и 300 г мочевины, растворяют содержимое в 400 куб. см воды и нагревают 3 ч с обратным холодильником. После этого добавляют в раствор 110 г нитрита натрия, охлаждают в бане со льдом до -10 °C и медленно при перемешивании вливают в смесь 600 г льда и 60 куб. см концентрированной серной кислоты, помещенную в стакан вместимостью 2000 куб. см, охлаждаемый снаружи смесью льда с поваренной солью. Выпавшее нитрозосоединение немедленно отфильтровывают на воронке Бюхнера, хорошо отсасывают под вакуумом и промывают на фильтре ледяной водой.

ВНИМАНИЕ! Нитрозометилмочевину хранят в темной склянке в холодильнике, т.к. под действием света и тепла она может взорваться.

Продукт без дальнейшей очистки может быть использован для получения диазометана.

7.2.1.5. Получение раствора диазометана (метилирующей смеси).

ВНИМАНИЕ! Диазометан взрывоопасен и очень ядовит. При получении раствора диазометана, а также при работе с этим раствором необходимо соблюдать осторожность и обязательно работать под тягой.

В коническую колбу на 100 куб. см вносят 20 куб. см 40%-го раствора гидроокиси калия и 50 куб. см диэтилового эфира, колбу помещают в баню со льдом и охлаждают до температуры 2 - 5 °C. Затем, постоянно встряхивая колбу, небольшими порциями прибавляют 5 г нитрозометилмочевины. Через 10 мин. после внесения последней порции сливают эфирный раствор диазометана и сушат его 3 ч над небольшим количеством твердого едкого калия.

Полученный раствор диазометана годен в течение 1 - 2 суток при хранении в холодильнике в неплотно закрытом сосуде.

7.2.2.1. Стандартный раствор N 1 с концентрацией Фосэтила алюминия 1,0 мг/куб. см.

Взвешивают 50 мг Фосэтила алюминия в мерной колбе объемом 50 куб. см. Навеску растворяют в очищенной воде и доводят объем до метки водой. Полученный стандартный раствор N 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор N 1 хранится в холодильнике в течение 120 суток.

7.2.2.2. Стандартный раствор N 2 с концентрацией Фосэтила алюминия 100 мкг/куб. см.

Из стандартного раствора N 1 отбирают пипеткой 10 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 100 куб. см и доводят объем до метки смесью изопропилового спирта с 1%-м раствором серной кислоты (соотношение 9:1 по объему). Стандартный раствор N 2 используют для приготовления градуировочных растворов метилового производного Фосэтила алюминия и для внесения в контрольные образцы. Стандартный раствор N 2 хранится в холодильнике в течение 1 месяца.

7.2.2.3. Приготовление градуировочных растворов метилового производного Фосэтила алюминия.

Градуировочные растворы метилового производного Фосэтила алюминия используют для построения градуировочного графика. Растворы готовят непосредственно перед использованием.

7.2.2.3.1. Стандартный раствор N 3 с концентрацией метилового производного Фосэтила алюминия 2 мкг/куб. см.

В концентратор объемом 50 куб. см помещают 1 куб. см стандартного раствора N 2, добавляют 7 куб. см метилирующей смеси (п. 7.2.1.5), закрывают концентратор пробкой и перемешивают его содержимое. Выдерживают в течение 15 мин., периодически перемешивая содержимое концентратора. По истечении времени к смеси в концентраторе приливают 1 куб. см изопропилового спирта и выпаривают содержимое на роторном вакуумном испарителе при температуре 30 °C до объема 2 - 3 куб. см. Раствор метилового производного Фосэтила алюминия переносят в мерную колбу вместимостью 50 куб. см. Концентратор обмывают тремя порциями по 10 куб. см изопропилового спирта, которые также переносят в мерную колбу. Объем раствора в колбе доводят до метки изопропиловым спиртом, перемешивают и получают градуировочный раствор N 3 с концентрацией 2 мкг/куб. см (по Фосэтил алюминию). Раствор хранят в холодильнике в течение суток.

7.2.2.3.2. Стандартный раствор N 4 с концентрацией метилового производного Фосэтила алюминия 1 мкг/куб. см.

Из стандартного раствора N 3 отбирают пипеткой 5 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см, доводят объем до метки изопропиловым спиртом и получают градуировочный раствор N 4 с концентрацией 1 мкг/куб. см (по Фосэтил алюминию). Раствор хранят в холодильнике в течение суток.

7.2.2.3.3. Стандартный раствор N 5 с концентрацией метилового производного Фосэтила алюминия 0,5 мкг/куб. см.

Из стандартного раствора N 4 отбирают пипеткой 5 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см, доводят объем до метки изопропиловым спиртом и получают градуировочный раствор N 5 с концентрацией 0,5 мкг/куб. см (по Фосэтил алюминию). Раствор хранят в холодильнике в течение суток.

7.2.2.3.4. Стандартный раствор N 6 с концентрацией метилового производного Фосэтила алюминия 0,25 мкг/куб. см.

Из стандартного раствора N 5 отбирают пипеткой 5 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см, доводят объем до метки изопропиловым спиртом и получают градуировочный раствор N 6 с концентрацией 0,25 мкг/куб. см (по Фосэтил алюминию). Раствор хранят в холодильнике в течение суток.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации Фосэтила алюминия (метилового производного) в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 0,25; 0,5; 1,0; 2,0 мкг/куб. см.

В испаритель хроматографа вводят по 1 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования, указанных в п. 9.3. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", N 2051-79 от 21.08.79, а также в соответствии с ГОСТ 1726-85 "Огурцы свежие, реализуемые в розничной торговой сети", ГОСТ Р 51810-2001 "Томаты свежие, реализуемые в розничной торговой сети", ГОСТ Р 52183-2003 "Консервы. Соки овощные. Сок томатный. ТУ".

Пробы плодов томата и огурца хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре 0 - 4 °C не более суток. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильнике при температуре -18 °C до 2 лет.

Пробы томатного сока хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре 4 °C не более 10 суток.

Образец измельченных плодов томата или огурца массой 50 г помещают в стакан гомогенизатора вместимостью 500 куб. см, добавляют 50 куб. см 1%-го раствора серной кислоты и гомогенизируют в течение 1 - 2 мин. Суспензию переносят в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования объемом 200 куб. см и центрифугируют в течение 15 мин. при скорости 4000 об./мин. Экстракт фильтруют через вату в мерный цилиндр объемом 100 куб. см и доводят объем экстракта до 100 куб. см раствором 1%-й серной кислоты. Отбирают пипеткой 5 куб. см фильтрата, помещают в мерный цилиндр объемом 50 куб. см и доводят объем до 50 куб. см изопропиловым спиртом. Полученный раствор отфильтровывают через фильтр "красная лента" в коническую колбу объемом 50 куб. см. Отбирают из колбы пипеткой 10 куб. см раствора, помещают в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают до объема 1 - 2 куб. см на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °C.

К остатку в концентраторе, полученному по п. 9.1.1, приливают 10 куб. см метилирующей смеси, плотно закрывают крышкой, перемешивают и оставляют на 15 мин., периодически перемешивая содержимое в концентраторе. По истечении времени в концентратор добавляют 1 куб. см изопропилового спирта и выпаривают до объема 2 - 2,5 куб. см на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Остаток в концентраторе переносят в мерный цилиндр объемом 10 куб. см. Исходный концентратор обмывают 1 куб. см изопропилового спирта, который также переносят в цилиндр. Объем раствора в цилиндре доводят до 4 куб. см изопропиловым спиртом.

В испаритель хроматографа вводят 1 куб. мм полученного раствора.

Навеску томатного сока массой 25 г помещают в мерный цилиндр вместимостью 50 куб. см и доводят объем до 50 куб. см раствором 1%-й серной кислоты. Отбирают пипеткой 5 куб. см полученного раствора, помещают в мерный цилиндр объемом 50 куб. см и доводят объем до 50 куб. см изопропиловым спиртом. Полученный раствор отфильтровывают через фильтр "красная лента" в коническую колбу объемом 50 куб. см. Отбирают из колбы пипеткой 10 куб. см раствора, помещают в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают до объема 1 - 2 куб. см на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °C.

Далее проводят метилирование, как указано в п. 9.1.2.

В испаритель хроматографа вводят 1 куб. мм полученного после метилирования раствора.

Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая Rtx-225 (50% цианопропилметил и 50% фенилметил полисилоксан), длина 15 м, внутренний диаметр 0,25 мм, толщина пленки 0,25 мкм, фирма "RESTEK".

Температура термостата колонки программированная. Начальная температура - 80 °С, выдержка 3 мин., нагрев колонки по 10 градусов в минуту до температуры 120 °C, а затем по 25 градусов в минуту до 260 °C.

Температура испарителя - 230 °C, температура детектора - 300 °C.

Газ 1 - гелий (газ-носитель), давление на входе - 50 кПа, линейная скорость - 29,143 см/с, давление на выходе - 101,3 кПа; поток через колонку - 0,915 куб. см/мин.; мертвое время - 0,86 мин.

Газ 2 - гелий, режим - Split less, деление потока - 1:40 (сброс пробы), начало сброса - 1 мин., длительность сброса - 2 мин., расход во время анализа - 20 куб. см/мин.

Регулятор давления гелия - РРГ-10; регулятор расхода гелия - РРГ-11.

Газ 4 - азот (поддув в детектор), расход во время анализа - 30 куб. см/мин.

Газ 5 - водород, расход во время анализа - 10 куб. см/мин.

Газ 6 - воздух, расход - 200 куб. см/мин.

Продувка детектора азотом после анализа - по 50 куб. см/мин. в течение 3 мин. при температуре колонки 260 °C. Расход газов: Г1 - 50; Г2 - 40; Г4 - 40 куб. см/мин.

Абсолютное время удерживания Фосэтила алюминия: 5,42 мин. +/- 2%.

Объем вводимой пробы: 1 куб. мм.

Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 0,25 - 2,0 нг.

Для обработки результатов хроматографического анализа используется программное обеспечение химического анализа "Хроматэк Аналитик", версия 1.20.

Содержание Фосэтил алюминия в пробах рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

A - концентрация стандартного раствора, мкг/куб. см;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;

m - масса анализируемого образца, г;

P - содержание Фосэтил алюминия в аналитическом стандарте, %.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание вещества в пробе менее 2,0 мг/кг" <*>.

--------------------------------

<*> 2,0 мг/кг - предел обнаружения.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

Российский государственный аграрный университет - МСХА имени К.А. Тимирязева.

Учебно-научный консультационный центр "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов". 127550, Москва, Тимирязевская ул., д. 53/1. Телефон: (499)976-37-68, факс: (499)976-43-26.