"МУК 4.1.2858-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Топрамезона в воде, почве, зеленой массе, зерне и масле кукурузы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 31.03.2011)

1. Разработаны Российским государственным аграрным университетом - МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов" Минсельхоза России.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 28.12.2010 N 3).

3. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 31.03.2011.

4. Введены в действие с момента утверждения.

5. Введены впервые.

Свидетельство об аттестации методики от 01.12.2010 N 0059.29.11.10.

Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации Топрамезона в воде в диапазоне 0,005 - 0,05 мг/куб. дм и в почве в диапазоне 0,01 - 0,10 мг/кг, а также уровня его остаточных количеств в зеленой массе кукурузы в диапазоне 0,05 - 0,50 мг/кг, в зерне и масле кукурузы в диапазоне 0,01 - 0,10 мг/кг.

Название действующего вещества по ИЮПАК: [3-(4,5-дигидро-1,2-оксазол-3-ил)-4-мезил-о-толил](5-гидрокси-1-метилпиразол-4-ил)метанон.

Структурная формула (не приводится).

Молекулярная масса: 363,29.

Агрегатное состояние: порошок.

Цвет, запах: химически чистый Топрамезон представляет собой белый кристаллический порошок.

Температура плавления: 221,6 °C.

Коэффициент распределения октанол-вода (pH 7, 20 °C): 1,52.

Константа диссоциации (рКа) (при 25 °C): 4,06 (слабая кислота).

Растворимость в воде (при 20 °C): 100 г/куб. дм.

Растворимость в органических растворителях (г/куб. дм, при 20 °C): ацетон - 10, гексан - 10, толуол - 10, этилацетат - 10.

Топрамезон стабилен в водных растворах (период полураспада при pH 5,0 - 9,0, при 20 °C составляет 30 дней).

Период полураспада в воде при фотолизе составляет 72 дня (в природной воде), в буферном растворе при pH в диапазоне 5 - 9 стабилен.

Топрамезон долго сохраняется в почве с периодом полураспада в лаборатории 186 дней, в поле - 45 дней. Может повреждать последующие культуры севооборота (соя).

Область применения: Топрамезон - системный селективный гербицид листового действия из группы ингибиторов синтеза каратиноидов, эффективно подавляет рост и развитие двудольных однолетних и некоторых злаковых сорняков в посевах кукурузы.

В России предлагается в качестве смесевого гербицида в посевах кукурузы с нормой расхода 240 г д.в./га.

МДУ Топрамезона (в импортируемой продукции): зерно и масло кукурузы - 0,01 мг/кг.

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.

Метод основан на определении Топрамезона методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием ультрафиолетового детектора после его экстракции из образцов органическим растворителем, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами, на концентрирующих патронах Диапак Амин, Диапак П и Диапак Диол.

Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором состава подвижной фазы и выбором колонок различной полярности.

Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C, относительной влажности не более 80% и нормальном атмосферном давлении;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка колонок с окисью алюминия, концентрирующих патронов Диапак Амин и Диапак С16 для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на колонках с окисью алюминия и на концентрирующих патронах Диапак Амин и Диапак С16, установление градуировочной характеристики.

Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/куб. дм. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 ч. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см аппарата для перегонки растворителей.

Ацетонитрил перегоняют при температуре 81,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81,5 °C, отбрасывают.

Ацетон помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцово-кислый калий из расчета 1 г/куб. дм.

Ацетон перегоняют при температуре 56,2 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 56,2 °C, отбрасывают.

Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцовокислый калий из расчета 1 г/куб. дм и кипятят в течение 6 ч.

Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °C, отбрасывают.

7.2.1.1. Приготовление 1%-го раствора ацетата аммония.

10 г безводного сульфата натрия переносят в мерную колбу на 1000 куб. см, добавляют 200 - 300 куб. см очищенной воды, перемешивают до полного растворения и доводят водой объем в колбе до метки.

7.2.1.2. Раствор однозамещенного фосфата натрия (Раствор A).

7.2.1.4. Приготовление фосфатного буфера (Раствор C).

В плоскодонной колбе на 1000 куб. см смешивают 26,5 куб. см раствора A, 473,5 куб. см раствора B и 500 куб. см дистиллированной воды.

7.2.1.5. Приготовление 1 М раствора гидроокиси натрия.

20 г гидроксида натрия переносят в мерную колбу на 500 куб. см, добавляют 200 - 300 куб. см дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).

Для приготовления подвижной фазы используют свежеперегнанные ацетонитрил и 1%-й раствор ацетата аммония.

В плоскодонную колбу объемом 1000 куб. см помещают 800 куб. см 1%-го водного раствора ацетата аммония и 100 куб. см ацетонитрила. Смесь тщательно перемешивают, пропускают через нее газообразный гелий со скоростью 20 куб. см/мин. в течение 5 мин., после чего помещают в ультразвуковую ванну для удаления растворенных газов на 1 мин.

7.2.2.1. Стандартный раствор N 1 с концентрацией Топрамезона 1,0 мг/куб. см.

Взвешивают 50 мг Топрамезона в мерной колбе объемом 50 куб. см. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом. Полученный стандартный раствор N 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор N 1 хранится в холодильнике в течение 6 месяцев.

7.2.2.2. Стандартный раствор N 2 с концентрацией Топрамезона 10,0 мкг/куб. см.

Из стандартного раствора N 1 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 100 куб. см и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 9:1. Стандартный раствор N 2 используется для внесения в контрольные образцы и для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор N 2 хранится в холодильнике не более 30 суток.

7.2.2.3. Стандартный раствор N 3 с концентрацией Топрамезона 1,0 мкг/куб. см.

Из стандартного раствора N 2 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 9:1. Стандартный раствор N 3 используется для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор N 3 хранится в холодильнике не более 30 суток.

7.2.2.4. Стандартный раствор N 4 с концентрацией Топрамезона 0,5 мкг/куб. см.

Из стандартного раствора N 3 отбирают пипеткой 5 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 9:1. Стандартный раствор N 4 используется для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор N 4 хранится в холодильнике не более 30 суток.

7.2.2.5. Стандартный раствор N 5 с концентрацией Топрамезона 0,2 мкг/куб. см.

Из стандартного раствора N 2 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 50 куб. см и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 9:1. Стандартный раствор N 5 используется для установления градуировочной характеристики и для внесения в контрольные образцы. Стандартный раствор N 5 хранится в холодильнике не более 30 суток.

7.2.2.6. Стандартный раствор N 6 с концентрацией Топрамезона 0,1 мкг/куб. см.

Из стандартного раствора N 2 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 100 куб. см и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с водой в соотношении 9:1. Стандартный раствор N 6 используется для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор N 6 хранится в холодильнике не более 30 суток.

7.2.2.7. Стандартные растворы с концентрацией Топрамезона 5,0; 2,5; 2,0; 1,0; 0,4 и 0,2 мкг/куб. см для внесения в контрольные образцы.

Методом последовательного разведения ацетонитрилом готовят растворы, содержащие по 5,0; 2,5; 2,0; 1,0; 0,4 и 0,2 мкг/куб. см, и используют эти растворы с целью внесения в контрольные образцы. Стандартные растворы для внесения в контрольные образцы хранятся в холодильнике не более 30 суток.

Для внесения в контрольные образцы масла готовят растворы Топрамезона, содержащие по 2,0; 1,0; 0,4 и 0,2 мкг/куб. см, в ацетоне.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации Топрамезона в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 1,0, 0,5, 0,2 и 0,1 мкг/куб. см.

В инжектор хроматографа вводят по 20 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.6. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 куб. см/мин. (1 - 2 кап./с).

Патрон Диапак Амин устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 куб. см (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 5 куб. см ацетонитрила, а затем 5 куб. см очищенной воды. Элюат отбрасывают.

Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

В концентратор объемом 100 куб. см помещают 50 куб. см раствора C (п. 7.2.1.4), прибавляют туда 1 куб. см стандартного раствора Топрамезона в ацетонитриле с концентрацией 1,0 мкг/куб. см. Доводят pH раствора до значения 1,4 при помощи 6 М раствора соляной кислоты и порционно наносят на подготовленный концентрирующий патрон Диапак Амин. Весь элюат собирают в чистый концентратор объемом 100 куб. см и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

Сухой остаток растворяют в 2 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 9:1 и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.

Определяют фракции, содержащие Топрамезон, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.

Изучение поведения Топрамезона на концентрирующих патронах Диапак Амин проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии концентрирующих патронов.

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 куб. см/мин. (1 - 2 кап./с).

Патрон Диапак П устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 куб. см (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 5 куб. см ацетонитрила, а затем 5 куб. см очищенной воды. Элюат отбрасывают.

Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

В концентратор объемом 100 куб. см помещают 1 куб. см стандартного раствора Топрамезона в ацетонитриле с концентрацией 1,0 мкг/куб. см и упаривают досуха. Сухой остаток в концентраторе растворяют в 20 куб. см очищенной воды и доводят pH раствора до значения 1,4 при помощи 6 М раствора соляной кислоты, наносят на патрон, элюат собирают в чистый концентратор объемом 100 куб. см и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

Исходный концентратор обмывают сначала 5 куб. см 0,1%-го водного раствора муравьиной кислоты, а затем пятью порциями по 10 куб. см каждая 0,1%-го раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле. Полученные растворы последовательно вносят на патрон. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 куб. см, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C, сухой остаток растворяют в 2 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 9:1 и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.

Определяют фракции, содержащие Топрамезон, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.

Изучение поведения Топрамезона на концентрирующих патронах Диапак П проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии концентрирующих патронов.

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 куб. см/мин. (1 - 2 кап./с).

Патрон Диапак Диол устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 куб. см (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 5 куб. см метилового спирта, а затем 5 куб. см смеси ацетона с гексаном в соотношении 1:1. Элюаты отбрасывают.

Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

В концентратор объемом 100 куб. см помещают 1 куб. см стандартного раствора Топрамезона в ацетонитриле с концентрацией 1,0 мкг/куб. см и упаривают досуха. Сухой остаток в концентраторе растворяют в 2 куб. см ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 2 куб. см гексана и полученный раствор наносят на предварительно кондиционированный патрон Диапак Диол. Элюат собирают в чистый концентратор объемом 100 куб. см и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

Исходный концентратор обмывают сначала 10 куб. см смеси ацетона с гексаном в соотношении 1:1, затем 10 куб. см смеси ацетона с гексаном в соотношении 3:7, затем тремя порциями по 10 куб. см каждая 0,1%-го раствора уксусной кислоты в метаноле, полученные растворы последовательно вносят на патрон. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 куб. см, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C, сухой остаток растворяют в 2 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 9:1 и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.

Определяют фракции, содержащие Топрамезон, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.

Изучение поведения Топрамезона на концентрирующих патронах Диапак П проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии концентрирующих патронов.

Хроматографическую колонку Symmetry Shield RP18 с предколонкой Simmetry C18 устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют при температуре 30 °C и скорости потока подвижной фазы 1 куб. см/мин. 3 - 4 ч.

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" от 21.08.1979 N 2051-79, а также в соответствии с ГОСТ Р 51592-2000 "Вода. Общие требования к отбору проб", ГОСТ 17.4.3.01-83 "Почвы. Общие требования к отбору проб", ГОСТ 28168-89 "Почвы. Отбор проб", ГОСТ 13586.3-83 "Зерно. Правила приемки и методы отбора проб", ГОСТ Р 50436-92 (ИСО 950-79) "Зерновые. Отбор проб зерна", ГОСТ 27262-87 "Корма растительного происхождения. Методы отбора проб", ГОСТ 8808-2000 "Масло кукурузное, ТУ", ГОСТ 5471-83 "Масла растительные. Правила приемки и методы отбора проб".

Пробы воды хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре 4 °C; пробы почвы - в полиэтиленовой таре в морозильнике при температуре -18 °C.

Для длительного хранения пробы почвы подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в темной таре в течение года. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.

Пробы зеленой массы кукурузы хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре 0 - 4 °C в течение суток. Для длительного хранения пробы замораживают и хранятся в морозильной камере при температуре -18 °C.

Отобранные пробы зерна подсушивают до стандартной влажности и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.

Пробы кукурузного масла хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре 4 °C; пробы почвы - в полиэтиленовой таре в морозильнике при температуре -18 °C.

Пробу воды объемом 100 куб. см помещают в коническую колбу объемом 250 куб. см, прибавляют туда 1 куб. см 1 М водного раствора соляной кислоты до значения pH 1,4 и перемешивают.

Раствор, полученный по п. 9.1.1, наносят на заранее подготовленный патрон Диапак П, элюат отбрасывают. Исходный концентратор обмывают 5 куб. см 0,1%-го водного раствора муравьиной кислоты и также наносят на патрон, элюат отбрасывают.

Топрамезон элюируют 40 куб. см 0,1%-го раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле, элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

Сухой остаток после упаривания растворяют в 5 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 9:1 и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.

Пробу почвы весом 20 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования объемом 200 куб. см, прибавляют туда 50 куб. см смеси метанола с фосфатным буфером (раствор C, п. 7.2.1.4) в соотношении 1:1. Пробу помещают на 5 мин. в ультразвуковую ванну, а затем на 30 мин. на аппарат для встряхивания проб. Затем пробу центрифугируют в течение 5 мин. при скорости 4000 об./мин. Супернатант фильтруют через фильтр "красная лента" в концентратор объемом 250 см. Экстракцию повторяют еще один раз, используя 50 куб. см смеси метанола с фосфатным буфером в соотношении 1:1 и помещая пробу сначала на 5 мин. в ультразвуковую ванну, а затем на 30 мин на аппарат для встряхивания. Экстракты объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см и упаривают до водного остатка (~ 50 куб. см) на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

Водный остаток из концентратора, полученный по п. 9.2.1, переносят в мерный цилиндр объемом 100 куб. см и доводят объем раствора до метки 50 куб. см очищенной водой. Доводят pH раствора до значения 1,4 при помощи 6 М раствора соляной кислоты и наносят на подготовленный патрон Диапак Амин. Элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см и подвергают дальнейшей очистке на концентрирующих патронах Диапак П, как указано в п. 9.1.2.

Сухой остаток в концентраторе, полученный после очистки экстракта на патронах Диапак П, растворяют в 2 куб. см ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора, добавляют 2 куб. см гексана и наносят на подготовленный патрон Диапак Диол, элюат отбрасывают. Исходный концентратор обмывают сначала 10 куб. см смеси ацетона с гексаном в соотношении 1:1, а затем 10 куб. см смеси ацетона с гексаном в соотношении 3:7, элюаты также отбрасывают.

Топрамезон элюируют 20 куб. см 1%-го раствора уксусной кислоты в метаноле, элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

Сухой остаток после упаривания растворяют в 2 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 9:1 и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.

Образец измельченного зерна кукурузы массой 20 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования объемом 200 куб. см, прибавляют 50 куб. см этилацетата и помещают на 5 мин. в ультразвуковую ванну, затем на 30 мин. на аппарат для встряхивания проб. Затем пробу центрифугируют в течение 5 мин. при скорости 4000 об./мин. Экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 куб. см через фильтр "красная лента". Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 куб. см этилацетата и помещая на 5 мин. в ультразвуковую ванну, а затем на 30 мин. на аппарат для встряхивания проб. Пробы центрифугируют, фильтруют, экстракты объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °C.

Далее проводят очистку экстракта на концентрирующих патронах Диапак Диол, как указано в п. 9.2.3.

Сухой остаток после очистки растворяют в 2 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 9:1 и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.

Из пробы кукурузного масла отбирают в стакан навеску массой 20 г и переносят ее в делительную воронку объемом 250 куб. см тремя порциями гексана объемом по 50 куб. см. Прибавляют 25 куб. см фосфатного буфера (раствор C, п. 7.2.1.4), который предварительно подщелачивают до pH 9 с помощью 1 М раствора гидроокиси натрия. Воронку осторожно встряхивают 2 мин. После разделения фаз в делительной воронке нижний водный слой помещают в плоскодонную колбу объемом 100 куб. см. Экстракцию повторяют еще два раза, используя каждый раз по 25 куб. см фосфатного буфера с pH 9. Далее гексан отбрасывают, а водный экстракт объединяют в плоскодонной колбе объемом 100 куб. см. Затем экстракт отфильтровывают через фильтр "красная лента" в делительную воронку и отделяют остатки гексана. Водный экстракт собирают в стакан объемом 100 куб. см.

Далее проводят очистку экстракта по п. 9.2.3 "Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак Диол" и по п. 9.1.2 "Очистка пробы воды на концентрирующих патронах Диапак П".

Сухой остаток после очистки растворяют в 2 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 9:1 и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.

Образец измельченной зеленой массы кукурузы массой 5 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 куб. см, прибавляют туда 50 куб. см смеси метанола с фосфатным буфером (раствор C, п. 7.2.1.4) в соотношении 1:1 и помещают на 30 мин. на аппарат для встряхивания проб. Экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 куб. см через фильтр "красная лента". Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 куб. см смеси метанола с фосфатным буфером и помещая на 30 мин. на аппарат для встряхивания проб. Экстракты объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка при температуре не выше 35 °C.

Полученный в п. 9.5.1 водный остаток подкисляют 6 Н соляной кислотой до pH 1 и переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см. Топрамезон экстрагируют четырьмя порциями хлороформа объемом по 40 куб. см, каждый раз встряхивая делительную воронку по 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой собирают в концентратор объемом 250 куб. см через слой безводного сульфата натрия и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка при температуре не выше 35 °C.

Далее проводят очистку экстракта по п. 9.2.3 "Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак Диол" и по п. 9.2.2 "Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак Амин".

Сухой остаток после очистки растворяют в 2 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 9:1 и 20 куб. мм пробы вводят в хроматограф.

Хроматограф жидкостной Waters 510 с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны и чувствительностью не ниже 0,005 единиц адсорбции на шкалу, номер госрегистрации 15311-02, или другой с аналогичными характеристиками.

Колонка стальная Symmetry Shield RP18, 250 мм x 4,6 мм, зернение 5 мкм, фирма "Waters".

Предколонка стальная Symmetry C18, 20 мм x 3,9 мм, зернение 5 мкм, фирма "Waters".

Температура колонки: 25 °C.

Температура колонки: 30 °C.

Подвижная фаза: ацетонитрил - 1%-й водный раствор ацетата аммония в соотношении 10:80.

Длина волны: 254 нм.

Время удерживания Топрамезона: 11,9 +/- 2%, мин.

Чувствительность: не менее 0,005 AUFS (единиц абсорбции на шкалу).

Объем вводимой пробы: 20 куб. мм.

Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 2 - 20 нг.

Для обработки результатов хроматографического анализа используется программное обеспечение химического анализа Millenium 3.05.01.

Альтернативная обработка результатов.

Содержание Топрамезона рассчитывают по формуле:

A - концентрация стандартного раствора, мкг/куб. см;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;

m - масса анализируемого образца, г (куб. см);

P - содержание Топрамезона в аналитическом стандарте, %.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

где дельта - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание вещества в пробе менее 0,01 мг/кг" <*>.

--------------------------------

<*> 0,01 мг/кг - предел обнаружения.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Российский государственный аграрный университет - МСХА им. К.А. Тимирязева.

Учебно-научный консультационный центр "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов".