"МУК 4.1.2919-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Аминопиралида в зеленой массе, зерне и масле кукурузы, семенах и масле рапса методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 12.07.2011)

1. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 02.06.2011 N 1).

2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 12 июля 2011 г.

3. Введены в действие с момента утверждения.

4. Введены впервые.

Свидетельство о метрологической аттестации N 0065.03.12.10 от 08.12.2010.

Настоящие Методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения уровня остаточных количеств Аминопиралида в зеленой массе в диапазоне 0,05 - 0,5 мг/кг, в зерне и масле кукурузы, в семенах и масле рапса в диапазоне 0,01 - 0,2 мг/кг.

Название действующего вещества по ИЮПАК: 4-амино-3,6-ди-хлорпиридино-2-карбоновая кислота.

Структурная формула (не приводится).

Аминопиралид - сильная кислота: рКа = 2,56 (при 20 °С).

Температура плавления: 163,5 - 165,2 °С, разлагается в точке плавления.

Растворимость в воде (г/куб. дм, при 20 °С): 2,48 при рН 2,35; 212 при рН 5; 205 - 203 при рН 7 и 9.

Растворимость в органических растворителях (г/куб. дм, при 20 °С): в гептане < 10; в ксилоле - 0,05; в дихлорэтане - 0,15; в этилацетате - 4,37; в ацетоне - 37,0; в метаноле - 66,4.

Стабилен к гидролизу при рН 5, 7 и 9 при температуре от 20 до 50 °С.

Фотолитически малостоек, разрушается на свету с периодом полураспада - 0,6 дня.

Область применения: Аминопиралид - гербицид системного ауксиноподобного действия из группы гетерилкарбоновых кислот. Рекомендуется для послевсходовой обработки зерновых культур и пастбищ против широкого спектра широколистных сорняков в смеси с Флорасуламом с нормой расхода препарата 33 - 66 г/га.

В России установлены следующие гигиенические нормативы: ДСД - 0,5 мг/кг массы человека; ПДК в воде водоемов - 0,1 мг/куб. дм; ОДК в почве - 0,2 мг/кг; МДУ в зерне хлебных злаков - 0,1 мг/кг.

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.

Метод основан на определении Аминопиралида методом капиллярной газожидкостной хроматографии с использованием детектора по захвату электронов после его экстракции из зеленой массы кукурузы и масел подкисленным ацетонитрилом и водно-спиртовым раствором щелочи из зерна кукурузы и семян рапса, очистки экстракта концентрированной серной кислотой, на концентрирующих патронах Диапак С16 и Диапак П, бутилирования и дополнительной очистки полученного бутилового эфира Аминопиралида на колонках с Флоризилом.

Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором капиллярной колонки и условий программирования температуры.

Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С, относительной влажности не более 80% и нормальном атмосферном давлении;

- выполнение измерений на газожидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка концентрирующих патронов Диапак С16, Диапак П и колонок с Флоризилом для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на концентрирующих патронах Диапак С16, Диапак П и на колонках с Флоризилом, установление градуировочной характеристики.

7.1.1. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/куб. дм. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 ч. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см аппарата для перегонки растворителей.

Ацетонитрил перегоняют при температуре 81,5 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81,5 °С, отбрасывают.

7.1.2. Очистка ацетона

Ацетон помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцово-кислый калий из расчета 1 г/куб. дм.

Ацетон перегоняют при температуре 56,2 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 56,2 °С, отбрасывают.

7.1.3. Приготовление бидистиллированной воды

Дистиллят помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцово-кислый калий из расчета 1 г/куб. дм и кипятят в течение 6 ч.

Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °С, отбрасывают.

7.2.1. Приготовление рабочих растворов

7.2.1.1. Приготовление 10%-ного водного раствора гидроокиси натрия.

В мерную колбу на 500 куб. см переносят 50 г гидроокиси натрия, добавляют 500 - 600 куб. см дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).

7.2.1.2. Приготовление водно-спиртового раствора щелочи.

Водно-спиртовой раствор щелочи готовят путем смешивания 950 куб. см этилового спирта и 50 куб. см 10%-ного водного раствора гидроокиси натрия.

7.2.1.3. Приготовление подкисленного ацетонитрила.

К необходимому объему ацетонитрила пипеткой добавляют концентрированную соляную кислоту до рН ~ 1. При приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой.

7.2.1.4. Приготовление 2%-ного раствора серной кислоты в бутаноле (бутилирующей смеси).

Мерным цилиндром отбирают 2 куб. см концентрированной серной кислоты и осторожно переносят в мерную колбу на 100 куб. см, куда предварительно наливают около 60 куб. см бутанола. Затем раствор перемешивают и доводят бутанолом объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).

7.2.1.5. Приготовление 1 М раствора соляной кислоты.

Мерным цилиндром отбирают 82 куб. см концентрированной соляной кислоты и осторожно переносят в мерную колбу на 1000 куб. см, куда предварительно наливают около 400 куб. см дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).

7.2.1.6. Приготовление 2 М раствора соляной кислоты.

Мерным цилиндром отбирают 164 куб. см концентрированной соляной кислоты и осторожно переносят в мерную колбу на 1000 куб. см, куда предварительно наливают около 400 куб. см дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).

7.2.1.7. Приготовление 10 М раствора гидроокиси натрия.

В мерную колбу на 500 куб. см переносят 200 г гидроокиси натрия, добавляют 200 - 300 куб. см дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).

7.2.2. Приготовление градуировочных растворов

7.2.2.1. Стандартный раствор N 1 с концентрацией Аминопиралида 1,0 мг/куб. см.

Взвешивают 50 мг Аминопиралида в мерной колбе объемом 50 куб. см. Навеску растворяют в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном. Полученный стандартный раствор N 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и построения калибровочной кривой. Стандартный раствор N 1 хранится в холодильнике в течение 6 месяцев.

7.2.2.2. Стандартный раствор N 2 с концентрацией Аминопиралида 100,0 мкг/куб. см.

Из стандартного раствора N 1 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 2 используется для приготовления стандартных растворов для построения калибровочной кривой. Стандартный раствор N 2 хранится в холодильнике в течение 6 месяцев.

7.2.2.3. Стандартный раствор N 3 с концентрацией Аминопиралида 1,0 мкг/куб. см.

Из стандартного раствора N 2 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 100 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 3 используется для приготовления стандартных растворов для построения калибровочной кривой и для внесения в контрольные образцы. Стандартный раствор N 3 хранится в холодильнике в течение 6 месяцев.

7.2.2.4. Стандартный раствор N 4 с концентрацией Аминопиралида 0,5 мкг/куб. см.

Из стандартного раствора N 3 отбирают пипеткой 5 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 4 используется для построения калибровочной кривой и для внесения в контрольные образцы. Стандартный раствор N 4 хранится в холодильнике в течение 6 месяцев.

7.2.2.5. Стандартный раствор N 5 с концентрацией Аминопиралида 0,2 мкг/куб. см.

Из стандартного раствора N 3 отбирают пипеткой 2 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 5 используется для построения калибровочной кривой и для внесения в контрольные образцы. Стандартный раствор N 5 хранится в холодильнике в течение 6 месяцев.

7.2.2.6. Стандартный раствор N 6 с концентрацией Аминопиралида 0,1 мкг/куб. см.

Из стандартного раствора N 3 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 6 используется для построения калибровочной кривой и для внесения в контрольные образцы. Стандартный раствор N 6 хранится в холодильнике в течение 6 месяцев.

7.2.2.7. Стандартный раствор N 7 с концентрацией Аминопиралида 0,01 мкг/куб. см.

Из стандартного раствора N 6 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетоном.

Стандартный раствор N 7 используется для построения калибровочной кривой и для внесения в контрольные образцы. Стандартный раствор N 7 хранится в холодильнике в течение 6 месяцев.

7.3.1. Бутилирование экстракта

К сухому остатку в концентраторе прибавляют 4 куб. см 2%-ного раствора концентрированной серной кислоты в бутаноле (бутилирующей смеси), полученной по п. 7.2.1.4, тщательно обмывают стенки концентратора и выдерживают 1 - 2 мин. в ультразвуковой ванне. Отбирают пипеткой 2 куб. см раствора из концентратора и переносят его в виалу. Виалу плотно закрывают крышкой, помещают в блок для виал, нагретый до 100 °С, и оставляют на 30 мин. По истечении этого времени виалу вынимают из блока, охлаждают до комнатной температуры, добавляют 10 куб. см гексана и 25 - 30 куб. см очищенной воды. Смесь интенсивно встряхивают и после разделения фаз в виале из верхнего (гексанового) слоя 1 куб. мм вводят в хроматограф.

7.3.2. Бутилирование стандартных растворов

В виалы объемом 40 куб. см помещают по 1 куб. см каждого стандартного раствора Аминопиралида в ацетоне (N 3, 4, 5, 6), удаляют растворитель током теплого воздуха и проводят бутилирование, как указано выше.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации Аминопиралида в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 0,01; 0,02; 0,05 и 0,10 мкг/куб. см.

В испаритель хроматографа вводят по 1 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.5. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.

7.5.1. Подготовка концентрирующих патронов Диапак С16 для очистки экстракта

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 куб. см/мин. (1 - 2 кап./с).

Патрон Диапак С16 устанавливают на аллонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 куб. см (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 5 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1, затем 10 куб. см воды. Элюаты отбрасывают.

7.5.2. Проверка хроматографического поведения Аминопиралида на концентрирующих патронах Диапак С16

Из стандартного раствора Аминопиралида в ацетоне, содержащего 1 мкг/куб. см, отбирают 1 куб. см, помещают в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 2 куб. см ацетонитрила, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 8 куб. см воды, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор объемом по 100 куб. см, выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °С.

Исходный концентратор обмывают 2 куб. см ацетонитрила, прибавляют 8 куб. см воды, перемешивают, вносят на патрон. Процедуру повторяют еще раз, используя тот же объем и состав элюентов. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 куб. см, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

Сухой остаток каждой фракции растворяют в 4 куб. см бутилирующей смеси и проводят бутилирование, как указано в п. 7.3.1.

Определяют фракции, содержащие Аминопиралид, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.

Изучение поведения Аминопиралида на концентрирующих патронах Диапак С16 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии концентрирующих патронов.

7.6.1. Подготовка концентрирующих патронов Диапак П для очистки экстракта

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 куб. см/мин. (1 - 2 кап./с).

Патрон Диапак П устанавливают на аллонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 куб. см (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 20 куб. см очищенной воды, затем 10 куб. см 1%-ного водного раствора уксусной кислоты. Элюаты отбрасывают.

7.6.2. Проверка хроматографического поведения Аминопиралида на концентрирующих патронах Диапак П

Из стандартного раствора Аминопиралида в ацетоне, содержащего 1 мкг/куб. см, отбирают 1 куб. см, помещают в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 2 куб. см 1 М водного раствора соляной кислоты, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 5 куб. см воды, перемешивают, помещают на 10 с в ультразвуковую ванну и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор объемом по 100 куб. см, выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °С.

Исходный концентратор обмывают последовательно 20 куб. см очищенной воды, затем 20 куб. см 1%-ного водного раствора уксусной кислоты и тремя порциями по 10 куб. см каждая 1%-ного раствора уксусной кислоты в метаноле. Полученные растворы последовательно вносят на патрон. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 куб. см, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

Сухой остаток каждой фракции растворяют в 4 куб. см бутилирующей смеси и проводят бутилирование, как указано в п. 7.3.1.

Определяют фракции, содержащие Аминопиралид, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюента.

Изучение поведения Аминопиралида на концентрирующих патронах Диапак П проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии концентрирующих патронов.

7.7.1. Подготовка колонки с Флоризилом для очистки экстракта

В пластиковую или стеклянную колонку диаметром 15 мм помешают 4 г Флоризила с зернением 60/100 меш. и, аккуратно постукивая по стенкам колонки, формируют слой адсорбента. На слой Флоризила наносят слой безводного серно-кислого натрия толщиной 1 см.

За день до использования колонку промывают 20 куб. см ацетона, затем 10 куб. см гексана и высушивают при комнатной температуре.

7.7.2. Проверка хроматографического поведения бутилового эфира Аминопиралида на колонке с Флоризилом

В концентратор объемом 100 куб. см вносят 1 куб. см стандартного раствора бутилового эфира Аминопиралида в гексане с концентрацией 1,0 мкг/куб. см и выпаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 2 куб. см гексана, тщательно обмывают стенки концентратора и наносят на подготовленную колонку. Элюат собирают в концентратор объемом по 100 куб. см и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °С.

Исходную колбу обмывают сначала 10 куб. см гексана, затем 10 куб. см смеси гексана с ацетоном в соотношении 9:1, а затем еще двумя порциями смеси гексана с ацетоном в соотношении 1:1 объемом 10 куб. см каждая и последовательно вносят их на колонку. Каждую порцию собирают отдельно в концентраторы объемом по 100 куб. см и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

Сухой остаток каждой фракции растворяют в 10 куб. см гексана и 1 куб. мм пробы вводят в хроматограф.

Определяют фракции, содержащие Аминопиралид, полноту смывания с колонки и необходимый объем элюента.

Изучение поведения Аминопиралида на колонке проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии Флоризила.

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" N 2051-79 от 21.08.79, а также по ГОСТ 13586.3-83 "Зерно. Правила приемки и методы отбора проб", ГОСТ Р 50436-92 (ИСО 950:79) "Зерновые. Отбор проб зерна", ГОСТ 8808-2000 "Масло кукурузное, ТУ", ГОСТ 5471-83 "Масла растительные. Правила приемки и методы отбора проб", ГОСТ 27262 "Корма растительного происхождения. Методы отбора проб", ГОСТ 10852-86 "Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб" и ГОСТ 8988-2002 "Масло рапсовое. ТУ".

Пробы зеленой массы хранятся в полиэтиленовых пакетах в холодильнике при температуре 0 - 4 °С в течение суток. Для длительного хранения пробы замораживаются и хранятся в морозильной камере при температуре -18 °С.

Пробы зерна кукурузы и семян рапса подсушивают до стандартной влажности и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.

Пробы масла кукурузы и рапса хранят в плотно закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре 0 - 4 °С не более 2 недель.

9.1.1. Экстракция и очистка полученного экстракта

Образец измельченной зеленой массы кукурузы массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции, прибавляют 50 куб. см подкисленного ацетонитрила и помещают на механический встряхиватель на 30 мин. Экстракт фильтруют в делительную воронку объемом 250 куб. см через фильтр "красная лента". Экстракцию повторяют еще два раза, используя каждый раз по 40 куб. см подкисленного ацетонитрила и помещая на 15 мин. на механический встряхиватель. Экстракты объединяют в делительной воронке объемом 250 куб. см.

К полученному экстракту добавляют 30 куб. см гексана и интенсивно встряхивают воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (гексан) отбрасывают, а ацетонитрил собирают в концентратор объемом 250 куб. см через слой безводного сульфата натрия и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

9.1.2. Очистка экстракта концентрированной серной кислотой

(Внимание! Последующий этап анализа следует проводить только в вытяжном шкафу!)

К сухому остатку в концентраторе, полученному в п. 9.1.1, прибавляют 4 куб. см концентрированной серной кислоты и тщательно обмывают стенки концентратора. Концентратор оставляют при комнатной температуре на 20 мин. По истечении этого времени в концентратор осторожно прибавляют 20 куб. см дистиллированной воды, перемешивают и охлаждают полученную смесь до комнатной температуры. Затем в концентратор добавляют 10 М раствор щелочи до рН 3, перемешивают и охлаждают до комнатной температуры. Помещают концентратор в ультразвуковую ванну на 1 - 2 мин., а затем содержимое фильтруют в чистый концентратор объемом 250 куб. см через фильтр "красная лента". Исходный концентратор обмывают 10 куб. см дистиллированной воды, выдерживают в ультразвуковой ванне 1 - 2 мин. и фильтруют в тот же концентратор. Объединенный раствор выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

К сухому остатку в концентраторе добавляют 10 куб. см метанола, тщательно обмывают стенки концентратора и помещают на 1 мин. в ультразвуковую ванну. Содержимое концентратора фильтруют в чистый концентратор объемом 250 куб. см через слой безводного сульфата натрия. Во избежание потерь исходный концентратор тщательно обмывают еще двумя порциями по 10 куб. см каждая 1%-ным раствором уксусной кислоты в метаноле и 10 куб. см метанола, каждый раз помещая концентратор в ультразвуковую ванну. Все порции фильтруют через слой безводного сульфата натрия в концентратор, а затем выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

9.1.3. Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак С16

К остатку в концентраторе, полученному по п. 9.1.2, добавляют 2 куб. см ацетонитрила, обмывая стенки концентратора, затем в концентратор прибавляют 8 куб. см очищенной воды, тщательно перемешивают, выдерживают концентратор в ультразвуковой ванне 1 - 2 мин. и отфильтровывают содержимое через фильтр "красная лента" в емкость для элюента. Элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см.

Исходный концентратор обмывают 2 куб. см ацетонитрила, прибавляют 8 куб. см воды, перемешивают, вносят на патрон. Элюаты объединяют в концентраторе объемом 100 куб. см и выпаривают до объема 1 - 2 куб. см на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

К остатку после упаривания добавляют 5 куб. см очищенной воды, перемешивают содержимое концентратора и помещают на 1 - 2 мин. в ультразвуковую ванну.

Далее проводят очистку экстракта на концентрирующих патронах Диапак П.

9.1.4. Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак П

Раствор, полученный по п. 9.1.3, наносят на заранее подготовленный патрон Диапак П, элюат отбрасывают. Исходный концентратор обмывают последовательно 20 куб. см очищенной воды, затем 20 куб. см 1%-ного водного раствора уксусной кислоты. Полученные растворы последовательно вносят на патрон, элюаты отбрасывают.

Аминопиралид элюируют с патрона 20 куб. см 1%-ного раствора уксусной кислоты в метаноле. Элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

9.1.5. Бутилирование экстракта

К сухому остатку в концентраторе, полученному по п. 9.1.2, добавляют 4 куб. см бутилирующей смеси, проводят бутилирование, как указано в п. 7.3.1 "Бутилирование экстракта".

Полученный бутиловый эфир Аминопиралида подвергают дополнительной очистке на колонках с Флоризилом.

9.1.6. Очистка бутилированного экстракта на колонках с Флоризилом

Из верхнего (гексанового) слоя в виале, полученного в п. 9.1.5, отбирают 2 куб. см и наносят на заранее подготовленную колонку с Флоризилом.

Исходную колбу обмывают сначала 10 куб. см гексана, затем 10 куб. см смеси гексана с ацетоном в соотношении 9:1, последовательно наносят на колонку и элюаты отбрасывают.

Аминопиралид элюируют с колонки 15 куб. см смеси гексана с ацетоном в соотношении 1:1. Элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

Сухой остаток растворяют в 5 куб. см гексана и 1 куб. мм пробы вводят в хроматограф.

9.2.1. Экстракция

Образец измельченного зерна кукурузы массой 20 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования объемом 200 куб. см, прибавляют 75 куб. см водно-спиртового раствора щелочи и помещают на 30 мин. на механический встряхиватель. Пробу центрифугируют в течение 15 мин. при скорости 4000 об./мин. и экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 куб. см через фильтр "красная лента". Экстракцию повторяют еще два раза, используя каждый раз по 40 куб. см водно-спиртового раствора щелочи и помещая каждый раз на 30 мин. на механический встряхиватель. Пробы центрифугируют в течение 15 мин. при скорости 4000 об./мин., супернатант фильтруют. Экстракты объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см. К объединенному экстракту прибавляют 5 куб. см 2 М соляной кислоты и упаривают до водного остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

Далее проводят очистку экстракта по схеме, указанной в пунктах 9.1.2 - 9.1.6.

Сухой остаток после упаривания растворяют в 5 куб. см гексана и 1 куб. мм пробы вводят в хроматограф.

9.3.1. Экстракция

Образец измельченных семян рапса массой 20 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования объемом 200 куб. см, прибавляют 75 куб. см водно-спиртового раствора щелочи и помещают на 30 мин. на аппарат для встряхивания проб. Пробу центрифугируют в течение 15 мин. при скорости 4000 об./мин. и экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 куб. см через фильтр "красная лента". Экстракцию повторяют еще два раза, используя каждый раз по 40 куб. см водно-спиртового раствора щелочи и помещая на 30 мин. на аппарат для встряхивания проб. Пробы центрифугируют в течение 15 мин. при скорости 4000 об./мин., супернатант фильтруют. Экстракты объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см. К объединенному экстракту прибавляют 5 куб. см 2 М соляной кислоты и упаривают до маслянистого остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

9.3.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

К водному остатку в концентраторе, полученному в п. 9.3.1, прибавляют 25 куб. см ацетонитрила, обмывают стенки концентратора и добавляют 25 куб. см дистиллированной воды, переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см. Полученную водную фракцию промывают двумя порциями гексана по 30 куб. см каждая, встряхивая делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (гексан) отбрасывают, а водную фракцию переносят в чистый концентратор объемом 250 куб. см и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °С.

Далее проводят очистку экстракта по схеме, указанной в пунктах 9.1.2 - 9.1.6.

Сухой остаток после упаривания растворяют в 5 куб. см гексана и 1 куб. мм пробы вводят в хроматограф.

9.4.1. Экстракция

Из пробы кукурузного (или рапсового) масла отбирают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 куб. см навеску массой 20 г, добавляют 50 куб. см гексана и 75 куб. см подкисленного ацетонитрила и помещают на 30 мин. на механический встряхиватель, а затем на 10 мин. в ультразвуковую ванну. Содержимое банки переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см, после разделения слоев нижний слой (ацетонитрил) фильтруют через фильтр "красная лента" в концентратор объемом 250 куб. см, а верхний (гексановый) слой возвращают в банку для экстракции. Экстракцию повторяют еще два раза, используя каждый раз по 50 и 50 куб. см подкисленного ацетонитрила и помещая на 30 мин. на механический встряхиватель, а затем на 10 мин. в ультразвуковую ванну.

Объединенный ацетонитрильный экстракт выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °С.

Далее проводят очистку экстракта по схеме, указанной в пунктах 9.1.2 - 9.1.6.

Сухой остаток после упаривания растворяют в 5 куб. см гексана и 1 куб. мм пробы вводят в хроматограф.

Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая НР-1 (Crosslinked Methyl Siloxane), длина 30 м, внутренний диаметр 0,25 мм, толщина пленки 0,25 мкм.

Температура термостата программированная. Начальная температура - 180 °С, выдержка 2 мин.; нагрев колонки по 10 град./мин. до температуры 240 °С, выдержка 7 мин.

Температура: детектора - 340 °С; испарителя - 260 °С.

Газовый режим - Splitless.

Газ-носитель - гелий (Г1): тип регулятора расхода газа - РРГ 11, линейная скорость - 22 см/с, давление на входе 102,9 кПа.

Газ 2 (Г2) - гелий, расход 1 куб. см/мин., сброс 1:50, начало сброса - 20 с, длительность сброса - 2 мин.

Газ 3 (Г3) - азот (поддув в детектор), расход во время анализа - 45 куб. см/мин.

Продувка системы после анализа при температуре 260 °С в течение 4 мин.: продувка испарителя гелием - 50 куб. см/мин.; продувка детектора азотом - 65 куб. см/мин.

Абсолютное время удерживания Аминопиралида - 10 мин. 11 с +/- 2%.

Объем вводимой пробы: 1 куб. мм.

Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,01 - 0,1 нг.

Содержание Аминопиралида в образцах зеленой массы, зерна и масла кукурузы, семян и масла рапса рассчитывают по формуле:

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

Результат анализа представляют в виде:

где дельта - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание вещества в пробе менее 0,02 мг/кг" <*>.

--------------------------------

<*> 0,02 мг/кг - предел обнаружения.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

Российский государственный аграрный университет - МСХА имени К.А. Тимирязева.

Учебно-научный консультационный центр "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов".