"МУК 4.1.2860-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Хлорантранилипрола в плодах томата, томатном соке, ягодах винограда и виноградном соке методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 31.03.2011)

1. Разработаны Российским государственным аграрным университетом - МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научным консультационным центром "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов" Минсельхоза России.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 28.12.2010 N 3).

3. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 31 марта 2011 г.

4. Введены в действие с момента утверждения.

5. Введены впервые.

Свидетельство об аттестации методики от 01.12.2010 N 0061.30.11.10.

Настоящие методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения уровня остаточных количеств Хлорантранилипрола в плодах томата, ягодах винограда, а также в томатном и виноградном соке в диапазоне 0,02 - 0,2 мг/кг.

Структурная формула (не приводится).

Название по ИЮПАК: 3-бром-4'-хлор-1-(3-хлор-2-пиридил)-2'-метил-6'(метилкарбамоил)пиразол-5-карбоксанилид.

Молекулярная масса: 483,15.

Агрегатное состояние: мелкий порошок.

Цвет, запах: белого цвета без запаха.

Растворимость в воде (мг/куб. дм): при pH 4 - 0,972; при pH 7 - 0,88; при pH 9 - 0,971.

Растворимость в органических растворителях (мг/куб. дм): в ацетоне - 3446, в метаноле - 1714, в этилацетате - 1144, в ацетонитриле - 710.

Область применения: Хлорантранилипрол - инсектицид кишечного действия, нарушающий баланс кальция в миофибриллах мускулов насекомых. Он эффективно подавляет развитие вредителей из отрядов чешуекрылых, жесткокрылых (колорадский жук), двукрылых (минеры).

Применяется для борьбы с грызущими насекомыми с нормой расхода 0,01 - 0,06 кг д.в./га в зависимости от культуры в посадках картофеля, винограда, яблоневых садах.

В России установлены следующие гигиенические нормативы: ПДК в воде - 0,2 мг/куб. дм; ОДК в почве - 0,5 мг/кг; МДУ (мг/кг): в яблоках - 0,5, клубнях картофеля - 0,1, в плодах томата - 0,6, в ягодах винограда - 1,0.

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.

Метод основан на определении Хлорантранилипрола методом капиллярной газожидкостной хроматографии с использованием детектора по захвату электронов после экстракции его из плодов томата и ягод винограда этилацетатом, очистки экстракта путем перераспределения между двумя несмешивающимися фазами и дальнейшей дериватизации Хлорантранилипрола в его основной метаболит IN-EQW78.

Идентификация проводится по времени удерживания IN-EQW78, а количественное определение - методом абсолютной калибровки в пересчете на Хлорантранилипрол.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Избирательность обеспечивается путем подбора капиллярной колонки и условий программирования температуры.

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С, относительной влажности не более 80% и нормальном атмосферном давлении;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики.

7.1.1. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/куб. дм. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 ч. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей.

Ацетонитрил перегоняют при температуре 81,5 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81,5 °С, отбрасывают.

7.1.2. Очистка ацетона

Ацетон помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцовокислый калий из расчета 1 г/куб. дм.

Ацетон перегоняют при температуре 56,2 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 56,2 °С, отбрасывают.

7.1.3. Приготовление бидистиллированной воды

Дистиллят помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцовокислый калий из расчета 1 г/куб. дм и кипятят в течение 6 ч.

Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °С, отбрасывают.

7.2.1. Приготовление рабочих растворов

7.2.1.1. Приготовление 1,0%-го водного раствора аммиака для дериватизации.

Мерной пипеткой отбирают 1 куб. см 25%-го раствора аммиака и переносят в мерную колбу на 25 куб. см, куда предварительно наливают около 10 куб. см очищенной воды. Затем раствор перемешивают и доводят объем в колбе до метки очищенной водой (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой). Полученный раствор хранят под тягой в течение одного месяца.

7.2.1.5. Приготовление 4 н раствора серной кислоты.

Мерным цилиндром отбирают 112 куб. см концентрированной серной кислоты и осторожно переносят в мерную колбу на 1000 куб. см, куда предварительно наливают около 300 куб. см дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).

7.2.2. Приготовление градуировочных растворов

7.2.2.1. Стандартный раствор N 1 с концентрацией Хлорантранилипрола 1,0 мг/куб. см.

Взвешивают 50 мг Хлорантранилипрола в мерной колбе объемом 50 куб. см. Навеску растворяют в ацетоне, помещая колбу в ультразвуковую ванну, и доводят объем до метки ацетоном. Полученный стандартный раствор N 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор N 1 хранится в холодильнике не более 5 месяцев.

7.2.2.2. Стандартный раствор N 2 с концентрацией Хлорантранилипрола 10,0 мкг/куб. см.

Из стандартного раствора N 1 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 100 куб. см и доводят объем до метки ацетоном.

Стандартный раствор N 2 используется для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор N 2 хранится в холодильнике не более 3 месяцев.

7.2.2.3. Стандартный раствор N 3 с концентрацией Хлорантранилипрола 1,0 мкг/куб. см.

Из стандартного раствора N 2 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 3 используется для внесения в контрольные образцы и для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики после его дериватизации. Стандартный раствор N 4 хранится в холодильнике не более 3 месяцев.

7.2.2.4. Стандартный раствор N 4 с концентрацией Хлорантранилипрола 0,2 мкг/куб. см.

Из стандартного раствора N 3 отбирают пипеткой 2 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 4 используется для внесения в контрольные образцы и для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики после его дериватизации. Стандартный раствор N 4 хранится в холодильнике не более 3 месяцев.

К сухому остатку в виале добавляют 0,4 куб. см ацетонитрила и растворяют, помещая виалу в ультразвуковую ванну на 2 мин. В виалу добавляют 1 куб. см 1,0%-го водного раствора аммиака и помещают виалу в ультразвуковую ванну еще на 2 мин. Плотно (!) закрывают виалу крышкой и помещают в нагревательный блок для виал на 2 ч при 75 °С. Далее виалу охлаждают до комнатной температуры, добавляют в нее 10 куб. см этилацетата и интенсивно встряхивают смесь. После полного разделения фаз из верхнего этилацетатного слоя аликвоту 5 куб. см переносят в концентратор и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °С.

Сухой остаток растворяют в 10 куб. см ацетона и 1 куб. мм пробы вводят в хроматограф.

7.3.1. Дериватизация стандартных растворов

В четыре виалы объемом 40 куб. см помещают по 1 куб. см и 2 куб. см каждого стандартного раствора Хлорантранилипрола в ацетоне (N 3 и N 4 соответственно), удаляют растворитель током теплого воздуха и проводят превращение Хлорантранилипрола в IN-EQW78, как указано в разделе 7.3.

Получают 4 раствора для градуировки с концентрациями: 0,1; 0,05; 0,02; 0,01 мкг/куб. см в пересчете на Хлорантранилипрол.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации Хлорантранилипрола в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 0,01; 0,02; 0,05 и 0,10 мкг/куб. см.

В испаритель хроматографа вводят по 1 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.3. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" от 21.08.1979 N 2051-79, а также в соответствии с ГОСТ Р 51810-2001 "Томаты свежие, реализуемые в розничной торговой сети" и ГОСТ Р 52183-2003 "Консервы. Соки овощные. Сок томатный. ТУ", ГОСТ 25896-83 "Виноград свежий столовый. ТУ", ГОСТ 25892-83Е "Сок виноградный натуральный. ТУ".

Пробы плодов томата и ягод винограда хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре 0 - 4 °С не более суток.

Для длительного хранения пробы плодов томата и ягод винограда замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильной камере при температуре -18 °С до 2 лет.

Пробы соков хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре 4 °С не более 10 суток.

9.1.1. Экстракция

Образец измельченных томатов или ягод винограда массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 куб. см, добавляют 50 куб. см этилацетата и помещают на 45 мин. на аппарат для встряхивания проб. Экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 куб. см через фильтр "красная лента". Экстракцию повторяют еще два раза, используя каждый раз по 30 куб. см этилацетата и помещая каждый раз на 30 мин. на аппарат для встряхивания проб. Экстракты объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.

9.1.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

К сухому остатку в концентраторе, полученному в п. 9.1.1, двумя порциями добавляют 100 куб. см воды, тщательно ополаскивают стенки концентратора и переносят водную фазу в делительную воронку объемом 250 куб. см. Подкисляют до pH 2 с помощью 4 н серной кислоты (около 2 куб. см), добавляют 50 куб. см диэтилового эфира, перемешивают, дегазируют и интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения фаз нижний водный слой собирают в плоскодонную колбу объемом 250 куб. см, а верхний эфирный собирают в концентратор объемом 250 куб. см через слой безводного сульфата натрия. Водную фракцию возвращают в делительную воронку и повторяют экстракцию еще два раза, используя каждый раз по 30 куб. см диэтилового эфира и встряхивая воронку в течение 2 мин. Экстракты эфира объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °С.

9.1.3. Дериватизация

Сухой остаток, полученный в п. 9.1.2, растворяют в 2 куб. см ацетона, тщательно обмывая стенки концентратора, переносят в виалу. Процедуру повторяют еще два раза, используя по 2 куб. см ацетона, удаляют растворитель током теплого воздуха и проводят дериватизацию, как указано в п. 7.3.

После дериватизации из верхнего слоя (этилацетата) отбирают аликвоту 5 куб. см, переносят в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °С.

Сухой остаток в концентраторе растворяют в 10 куб. см ацетона и 1 куб. мм пробы вводят в хроматограф.

9.2.1. Экстракция

Навеску томатного или виноградного сока массой 10 г помешают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 куб. см, добавляют 20 куб. см насыщенного раствора хлористого натрия и 40 куб. см ацетонитрила и помещают на 20 мин. на аппарат для встряхивания проб. Затем смесь переносят в делительную воронку и после полного разделения слоев нижний водный слой возвращают в банку, а верхний ацетонитрильный собирают в концентратор объемом 250 куб. см через слой безводного сульфата натрия. Повторяют экстракцию еще два раза, используя по 40 куб. см ацетонитрила и помещая каждый раз на 20 мин. на аппарат для встряхивания проб. Объединенный ацетонитрильный экстракт выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °С.

Далее проводят очистку экстракта по п. 9.1.2 "Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей", а затем проводят дериватизацию, как указано в п. 9.1.3.

После дериватизации из верхнего слоя (этилацетата) отбирают аликвоту 5 куб. см, переносят в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °С.

Сухой остаток в концентраторе растворяют в 10 куб. см ацетона и 1 куб. мм пробы вводят в хроматограф.

Хроматограф газовый HP6890 Series GC System с детектором по захвату электронов (ЭЗД) в модификации с электронным управлением пневмонической системой (ЭУПС).

Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая Rtx-1 (100% диметилполисилоксана), длина 30 м, внутренний диаметр 0,25 мм, толщина пленки 0,25 мкм.

Температура детектора - 320 °С, поток обдува анода (азот) - 6,0 куб. см/мин., поток поддува - 58,5 куб. см/мин.

Температура испарителя - 300 °С, тип газа гелий, режим Split, давление 24,5 psi, деление потока 20:1, split поток 30,0 куб. см/мин.

Программированный нагрев колонки со 180 °С (выдержка 1 мин.) по 25 град./мин. до 270 °С, с 270 °С по 5 град./мин. до 300 °С (выдержка 10 мин.), режим постоянный поток, поток колонки 1,5 куб. см/мин., средняя скорость 40 см/с.

Абсолютное время удерживания IN-EQW78: 11,451 мин. +/- 3%.

Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,01 - 0,1 нг.

Для обработки результатов хроматографического анализа используется программное обеспечение химического анализа HP GC ChemStation Rev. A.06.03RUS.

Альтернативная обработка результатов.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание вещества в пробе менее 0,05 мг/кг" <*>.

--------------------------------

<*> 0,02 мг/кг - предел обнаружения.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

Российский государственный аграрный университет - МСХА им. К.А. Тимирязева.

Учебно-научный консультационный центр "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов". 127550, Москва, Тимирязевская ул., д. 53/1. Телефон: (495) 976-37-68, факс: (495) 976-43-26.