"МУК 4.1.2857-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Тербутилазина в зеленой массе, зерне и масле кукурузы методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 31.03.2011)

1. Разработаны Российским государственным аграрным университетом - МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов" Минсельхоза России.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 28.12.2010 N 3).

3. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 31.03.2011.

4. Введены в действие с момента утверждения.

5. Введены впервые.

Свидетельство об аттестации методики от 08.12.2010 N 0069.06.12.10.

Настоящие методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения уровня остаточных количеств Тербутилазина в зеленой массе, зерне и масле кукурузы в диапазоне 0,05 - 0,5 мг/кг.

Название по ИЮПАК: N2-трет-бутил-6-хлоро-N4-этил-1,3,5-триазин-2,4-диамин.

Структурная формула: (не приводится).

Молекулярная масса: 229,7.

Агрегатное состояние: кристаллическое, порошок.

Цвет, запах: вещество белого цвета без ощутимого запаха.

Температура плавления: 177 - 179 °C.

Давление паров: 0,15 мПа (при 25 °C).

Растворимость в воде (при 25 °C и pH 7,0): 8,5 мг/куб. дм.

Растворимость в органических растворителях (г/куб. дм, при 25 °C): ацетон - 41,0; этанол - 14,0; н-октанол - 12,0; гексан - 0,36.

Область применения: Тербутилазин применяется для борьбы с сорными растениями в посевах кукурузы, сорго, гороха, бобов, на картофеле, на виноградниках, на плантациях фруктовых деревьев, цитрусовых, олив, кофе, сахарного тростника при нормах расхода 0,6 - 3 кг/га. В Европе используется на кукурузе и сорго при норме расхода 1,5 кг/га обычно в смеси с другими гербицидами.

В России установлены следующие гигиенические нормативы: ДСД - 0,003 мг/кг массы человека; ПДК в воде - 0,005 мг/куб. дм; ПДК в почве - 0,04 мг/кг; ПДК в воздухе рабочей зоны - 1,0 мг/куб. м; ОБУВ в воздухе атмосферы - 0,002 мг/куб. м; МДУ: в плодовых семечковых, винограде, цитрусовых (мякоть) - 0,1 мг/кг; в картофеле - 0,05 мг/кг.

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.

Метод основан на определении Тербутилазина методом капиллярной ГЖХ с использованием капиллярной колонки и термоионного детектора после его экстракции из образцов органическим растворителем, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами и на концентрирующих патронах Диапак С16.

Идентификация проводится по времени удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором капиллярной колонки и условий программирования температуры.

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C, относительной влажности не более 80% и нормальном атмосферном давлении;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики.

Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/куб. дм. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 ч. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см аппарата для перегонки растворителей.

Ацетонитрил перегоняют при температуре 81,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81,5 °C, отбрасывают.

Ацетон помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцовокислый калий из расчета 1 г/куб. дм.

Ацетон перегоняют при температуре 56,2 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 56,2 °C, отбрасывают.

Дистиллят помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцовокислый калий из расчета 1 г/куб. дм и кипятят в течение 6 ч.

Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °C, отбрасывают.

7.2.1.1. Стандартный раствор N 1 с концентрацией Тербутилазина 1,0 мг/куб. см.

Взвешивают 50 мг Тербутилазина в мерной колбе объемом 50 куб. см. Навеску растворяют в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном. Полученный стандартный раствор N 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор N 1 хранится в холодильнике в течение 12 месяцев.

7.2.1.2. Стандартный раствор N 2 с концентрацией Тербутилазина 10,0 мкг/куб. см.

Из стандартного раствора N 1 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 100 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 2 используется для приготовления стандартных растворов и для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор N 2 хранится в холодильнике в течение 6 месяцев.

7.2.1.3. Стандартный раствор N 3 с концентрацией Тербутилазина 5,0 мкг/куб. см.

Из стандартного раствора N 2 отбирают пипеткой 5 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 3 используется для приготовления стандартных растворов, для установления градуировочной характеристики и для внесения в контрольные образцы. Стандартный раствор N 3 хранится в холодильнике в течение 3 месяцев.

7.2.1.4. Стандартный раствор N 4 с концентрацией Тербутилазина 2,5 мкг/куб. см.

Из стандартного раствора N 3 отбирают пипеткой 5 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 4 используется для установления градуировочной характеристики и для внесения в контрольные образцы. Стандартный раствор N 4 хранится в холодильнике в течение 3 месяцев.

7.2.1.5. Стандартный раствор N 5 с концентрацией Тербутилазина 1,0 мкг/куб. см.

Из стандартного раствора N 2 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 5 используется для установления градуировочной характеристики и для внесения в контрольные образцы. Стандартный раствор N 5 хранится в холодильнике в течение 3 месяцев.

7.2.1.6. Стандартный раствор N 6 с концентрацией Тербутилазина 0,5 мкг/куб. см.

Из стандартного раствора N 3 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 6 используется для установления градуировочной характеристики и для внесения в контрольные образцы. Стандартный раствор N 6 хранится в холодильнике в течение 3 месяцев.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации Тербутилазина в растворе (мкг/куб.см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 0,5, 1,0, 2,5 и 5,0 мкг/куб. см.

В испаритель хроматографа вводят по 1 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования, указанных в п. 9.3. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 куб. см/мин. (1 - 2 кап./с).

Патрон Диапак С16 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 куб. см (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 10 куб. см, затем 10 куб. см воды. Элюаты отбрасывают.

Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

Из стандартного раствора Тербутилазина в ацетоне, содержащего 5 мкг/куб. см, отбирают 1 куб. см, помещают в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 1 куб. см ацетонитрила, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 4 куб. см воды, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

Исходный концентратор обмывают последовательно 10 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:4, затем двумя порциями по 10 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1, полученные растворы последовательно вносят на патрон. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 куб. см, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

Сухой остаток каждой фракции растворяют в 1 куб. см ацетона и 1 куб. мм пробы вводят в испаритель хроматографа.

Определяют фракции, содержащие Тербутилазин, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюата.

Изучение поведения Тербутилазина на концентрирующих патронах Диапак С16 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии патронов.

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" от 21.08.1979 N 2051-79, а также в соответствии с ГОСТ 13586.3-83 "Зерно. Правила приемки и методы отбора проб", ГОСТ 27262-87 "Корма растительного происхождения. Методы отбора проб", ГОСТ 8808-2000 "Масло кукурузы, ТУ", ГОСТ 5471-83 "Масла растительные. Правила приемки и методы отбора проб",

Пробы зеленой массы кукурузы хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре 0 - 4 °C не более суток. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильнике при температуре -18 °C до 2 лет.

Отобранные пробы зерна кукурузы подсушивают до стандартной влажности и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.

Пробы кукурузного масла хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре 4 °C не более 10 суток.

Образец измельченной зеленой массы кукурузы (или зерна) массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 куб. см, прибавляют 50 куб. см ацетонитрила (зерно кукурузы дополнительно смачивают 5 куб. см воды) и помещают на 30 мин. на аппарат для встряхивания проб. Экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 куб. см через фильтр "красная лента". Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 40 куб. см ацетонитрила и помещая на 15 мин. на аппарат для встряхивания проб. Экстракты объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °C.

К сухому остатку в концентраторе, полученному по п. 9.1.1, прибавляют 2 куб. см ацетонитрила, тщательно обмывают стенки концентратора, добавляют 50 куб. см дистиллированной воды, перемешивают и фильтруют в делительную воронку объемом 250 куб. см через фильтр "красная лента". Добавляют в делительную воронку 5 г хлористого натрия, перемешивают. Тербутилазин экстрагируют тремя порциями гексана объемом по 30 куб. см, встряхивая делительную воронку каждый раз по 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (гексан) собирают в концентратор объемом 250 куб. см. Гексан выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре 30 °C.

Сухой остаток, полученный в п. 9.1.2, растворяют в 1 куб. см ацетонитрила, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 4 куб. см воды, перемешивают и вносят на патрон. Элюат отбрасывают. Исходный концентратор обмывают 10 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:4, вносят на патрон и элюат отбрасывают. Тербутилазин элюируют 10 куб. см смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1. Элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

Сухой остаток в концентраторе растворяют в 1 куб. см ацетона и вводят 1 куб. мм пробы в хроматограф.

Из пробы кукурузного (или соевого) масла отбирают в стакан навеску массой 10 г и переносят ее в делительную воронку объемом 250 куб. см тремя порциями гексана объемом по 30 куб. см. Тербутилазин экстрагируют тремя порциями ацетонитрила объемом по 50 куб. см, встряхивая делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой сливают в концентратор объемом 250 куб. см. Верхний слой (гексан) отбрасывают.

Далее проводят очистку экстракта по п. 9.1.2 "Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей" и по п. 9.1.3 "Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак С16".

Сухой остаток в концентраторе растворяют в 1 куб. см ацетона и вводят 1 куб. мм пробы в хроматограф.

Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая НР-5, длина 10 м, внутренний диаметр 0,53 мм, толщина пленки 2,6 мкм, фирма "Hewlett Packerd".

Температура термостата колонки программированная: начальная температура - 160 °C, выдержка - 1 мин., нагрев колонки - по 25 °C в минуту до 260 °C.

Температура испарителя - 250 °C, детектора - 300 °C.

Газ 1 - гелий (газ-носитель), давление на входе - 10 кПа, линейная скорость - 34,426 см/с, давление на выходе - 101,3 кПа; поток через колонку - 3,294 куб. см/мин.; мертвое время - 0,48 мин.

Газ 2 - гелий (сброс пробы), режим - Splitless, деление потока - 1:30, начало сброса - 30 с, длительность сброса - 2 мин., расход во время анализа - 10,0 куб. см/мин.; регулятор давления гелия - РРГ-10; регулятор расхода гелия - РРГ-11.

Газ 4 - азот (поддув в детектор), расход во время анализа - 30 куб. см/мин.

Газ 5 - водород, расход во время анализа - 11,5 куб. см/мин.;

Газ 6 - воздух, расход - 200 куб. см/мин.

Продувка детектора азотом после анализа - 50 куб. см/мин. в течение 3 мин. при температуре колонки 270 °C.

Абсолютное время удерживания Тербутилазина: 4 мин. 56 с - 4 мин. 59 с + 2% мин.

Объем вводимой пробы: 1 куб. мм.

Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 0,25 - 2,0 нг.

Для обработки результатов хроматографического анализа используется программное обеспечение химического анализа "Хроматэк Аналитик", версия 1.20.

Содержание Тербутилазина в пробах рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

A - концентрация стандартного раствора, мкг/куб. см;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;

m - масса анализируемого образца, г;

P - содержание Тербутилазина в аналитическом стандарте, %.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

где дельта - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание вещества в пробе менее 0,05 мг/кг" <*>.

--------------------------------

<*> 0,05 мг/кг - предел обнаружения.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Российский государственный аграрный университет - МСХА им. К.А. Тимирязева.

Учебно-научный консультационный центр "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов".

Методика прошла метрологическую экспертизу (Свидетельство об аттестации N 0030.28.05.10 от 31.05.2010) и внесена в Федеральный реестр (ФР.1.31.2010.07439).