Описание
Источник публикации
М., Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2011
Сборник методических указаний по методам контроля "Определение остаточных количеств пестицидов в сельскохозяйственном сырье, пищевых продуктах и объектах окружающей среды" (МУК 4.1.2907-11; 4.1.2923 - 4.1.2925-11; 4.1.2938-11)
Примечание к документу
Документ включен в
Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (
Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299).
Документ
введен в действие с 12 июля 2011 года.
Название документа
"МУК 4.1.2924-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств изопротурона и дифлюфеникана в воде, почве, зерне и соломе зерновых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 12.07.2011)
"МУК 4.1.2924-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств изопротурона и дифлюфеникана в воде, почве, зерне и соломе зерновых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 12.07.2011)
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
12 июля 2011 года
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ИЗОПРОТУРОНА
И ДИФЛЮФЕНИКАНА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ЗЕРНЕ И СОЛОМЕ ЗЕРНОВЫХ
КУЛЬТУР МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУК 4.1.2924-11
Дата введения:
с момента утверждения
1. Разработаны сотрудниками ГНУ Всероссийского НИИ защиты растений Россельхозакадемии.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 02.06.2011 N 1).
3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 12 июля 2011 г.
4. Введены в действие с момента утверждения.
5. Введены впервые.
Настоящий документ устанавливает методику измерения массовых концентраций изопротурона в воде водоемов в диапазоне концентраций 0,001 - 0,01 мг/куб. дм, в зерне в диапазоне 0,005 - 0,1 мг/кг, в почве - 0,01 - 0,1 мг/кг, дифлюфеникана в воде водоемов в диапазоне концентраций 0,001 - 0,01 мг/куб. дм, в зерне и почве в диапазоне 0,01 - 0,1 мг/кг, изопротурона и дифлюфеникана в соломе зерновых в диапазоне 0,02 - 0,2 мг/кг.
Действующее вещество 1: изопротурон.
Структурная формула (не приводится).
3-(4-изопропил)-1,1-диметилмочевина (IUPAC).
Брутто формула: C H N O.
12 18 2
Молекулярная масса: 206,3.
Химически чистое вещество представляет собой белый кристаллический
порошок.
Температура плавления: 158 °C.
-<...>
Давление пара: 3,15 x 10 мРа (20 °C).
Коэффициент распределения в системе н-октанол-вода: K lg P = 2,5
ow
(20 °C).
Растворимость в воде (мг/куб. дм, 22 °C): 65.
Растворимость в органических растворителях (г/куб. дм, 20 °C): в
метаноле - 75, дихлорметане - 63, ацетоне - 38, бензоле - 5, ксилоле - 4,
н-гексане - 0,2.
Очень стабилен к воздействию света, кислот и щелочей. Гидролизуется при
нагревании в концентрированной щелочи.
Краткая токсикологическая характеристика: острая оральная токсичность
LD - 1826 - 2417 мг/кг (крысы), 3350 мг/кг (мыши). При подкожном введении
50
LD для крыс более 2000 мг/кг. Ингаляционная токсичность для крыс LC
50 50
превышает 1,95 мг/куб. дм (период наблюдения 4 ч). Не раздражает кожу и
слизистую глаз у кроликов.
Область применения: селективный системный гербицид, адсорбируемый корнями и листьями растений. Используется для контроля до и после появления однолетних трав и многолетних широколиственных сорняков на озимых и яровых посевах пшеницы, ржи и ячменя с нормой расхода 1,0 - 1,5 кг/га.
В России для изопротурона установлены следующие гигиенические нормативы: ДСД - 0,006 мг/кг/сут.; ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 0,8 мг/куб. м; ОДК в воде водоемов - 0,09 мг/куб. дм; ОДК в почве - 0,05 мг/кг; МДУ в зерне хлебных злаков - 0,01 мг/кг.
Действующее вещество 2: дифлюфеникан.
Структурная формула (не приводится).
2',4'-дифтор-2(альфа,альфа,альфа-трифтор-м-толилокси)никотинанилид (IUPAC).
Брутто формула: C H F N O .
19 11 5 2 2
Молекулярная масса: 394,3.
Химически чистое вещество представляет собой белый кристаллический
порошок.
Температура плавления: 159 - 161 °C.
-3
Давление пара: 4,25 x 10 мРа (25 °C).
Коэффициент распределения в системе н-октанол-вода: K lg P = 4,9
ow
(20 °C).
Растворимость в воде (мг/куб. дм, 25 °C): < 0,05.
Растворимость в органических растворителях (г/куб. дм, 20 °C) в ацетоне
и диметилформамиде - 100, ацетофеноне и циклогексаноне - 50, изофороне -
35, ксилоле - 20, циклогексане - 2, керосине - менее 10.
На воздухе стабилен вплоть до температуры плавления. При 22 °C очень
стабилен в водных растворах при pH 5, 7 и 9. Достаточно устойчив к
фотолизу.
Краткая токсикологическая характеристика: острая оральная токсичность
LD более 2000 мг/кг (крысы), более 1000 мг/кг (мыши), более 5000 мг/кг
50
(кролики). Ингаляционная токсичность для крыс LC более 2,34 мг/куб. дм
50
(период наблюдения 4 ч). Не раздражает кожу и слизистую глаз у кроликов.
Область применения: гербицид, используемый для постобработки осенних посевов с целью контроля трав и широколистных сорняков. Обычно применяется в комбинации с изопротуроном или другими гербицидами хлебных злаков. Норма расхода 125 - 250 г/га.
В России для дифлюфеникана установлены следующие гигиенические нормативы: ДСД - 0,01 мг/кг/сут.; ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 0,6 мг/куб. м; ОДУ в воде водоемов - 0,15 мг/куб. дм; ОДК в почве - 0,05 мг/кг; МДУ в зерне хлебных злаков - 0,05 мг/кг.
1. Метрологическая характеристика метода
При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих диапазонов концентраций.
Таблица 1
МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ
???????????????????????????????????????????????????????????????????????????
? Диапазон измерений, ?Показатель?Показатель ?Показатель?Показатель ?
?массовая концентрация ?повто- ?промежуточной ?воспроиз- ?точности
<*>?
? ?ряемости ?прецизионности ?водимости ?(границы ?
? ?(относи- ?(относительное ?(относи- ?относитель- ?
? ?тельное ?среднеквадрати-?тельное ?ной погреш- ?
? ?средне- ?ческое отклоне-?средне- ?ности при ?
? ?квадрати- ?ние в условиях ?квадрати- ?вероятности ?
? ?ческое ?вариации факто-?ческое ?P = 0,95), ?
? ?отклонение?ров "время", ?отклонение?+/- дельта, ?
? ?повто- ?"оператор" в ?воспроиз- ?% ?
? ?ряемости),?одной лабора- ?води- ? ?
? ?сигма , % ?тории), ?мости), ? ?
? ? r ?сигма , % ?сигма , % ? ?
? ? ? Rл ? R ? ?
???????????????????????????????????????????????????????????????????????????
? Изопротурон ?
???????????????????????????????????????????????????????????????????????????
?Вода, мг/куб. дм ?7 ?8 ?10 ?19 ?
?от 0,001 до 0,01 вкл. ? ? ? ? ?
???????????????????????????????????????????????????????????????????????????
?Почва, мг/кг ?9 ?11 ?13 ?25 ?
?от 0,01 до 0,1 вкл. ? ? ? ? ?
???????????????????????????????????????????????????????????????????????????
?Зерно, мг/кг ? ? ? ? ?
?от 0,005 до 0,05 вкл. ?8 ?9 ?11 ?22 ?
?св. 0,05 до 0,1 вкл. ?6,5 ?7 ?9 ?18 ?
???????????????????????????????????????????????????????????????????????????
?Солома, мг/кг ? ? ? ? ?
?от 0,02 до 0,1 вкл. ?6,5 ?7 ?9 ?18 ?
?св. 0,1 до 0,2 вкл. ?5 ?6 ?7 ?14 ?
???????????????????????????????????????????????????????????????????????????
? Дифлюфеникан ?
???????????????????????????????????????????????????????????????????????????
?Вода, мг/куб. дм ?6 ?7 ?8 ?16 ?
?от 0,001 до 0,01 вкл. ? ? ? ? ?
???????????????????????????????????????????????????????????????????????????
?Почва, мг/кг ?7,5 ?9 ?11 ?21 ?
?от 0,01 до 0,1 вкл. ? ? ? ? ?
???????????????????????????????????????????????????????????????????????????
?Зерно, мг/кг ?7,5 ?9 ?11 ?21 ?
?от 0,01 до 0,1 вкл. ? ? ? ? ?
???????????????????????????????????????????????????????????????????????????
?Солома, мг/кг ? ? ? ? ?
?от 0,02 до 0,1 вкл. ?7,2 ?8 ?10 ?20 ?
?св. 0,1 до 0,2 вкл. ?6 ?7 ?8 ?16 ?
???????????????????????????????????????????????????????????????????????????
? <*> Соответствует расширенной неопределенности U при коэффициенте?
? отн. ?
?охвата k = 2. ?
???????????????????????????????????????????????????????????????????????????
Методика основана на определении изопротурона и дифлюфеникана методом ВЭЖХ с использованием УФ-детектора после их экстракции из образцов смесью ацетона с водой и очистки экстракта методом последовательной твердофазной экстракции на патронах Диапак С16 и Силикагель 60.
Идентификация изопротурона и дифлуфеникана проводится по времени удерживания, количественное определение - методом абсолютной калибровки.
Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.
3. Средства измерений, реактивы,
вспомогательные устройства и материалы
Жидкостный хроматограф "ACQUITY" фирмы "Waters"
с быстросканирующим УФ-детектором, снабженный
дегазатором, автоматическим пробоотборником
и термостатом колонки
Микродозаторы Ленпипет переменного объема
от 200 до 1000 куб. мм и от 1 до 5 куб. см,
Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.
Ацетонитрил для ВЭЖХ, "В-230НМ" или х.ч. ТУ 6-09-3534-87
ИС NORMPROD: примечание.
В официальном тексте документа, видимо, допущена опечатка: стандарт
имеет номер ГОСТ 6709-72, а не ГОСТ 6709-79.
Гексан, х.ч. ТУ 2631-003-05807999-98
Дифлюфеникан с содержанием основного
вещества 99,5% (Sigma-Aldrich)
Изопротурон с содержанием основного
вещества 99,0% (Sigma-Aldrich)
Допускается использование реактивов квалификацией не ниже указанных.
3.3. Вспомогательные устройства и материалы
Аналитическая колонка ACQUITY UPLC BEH C18
(100 x 2,1) мм, 1,7 мкм (Waters)
Бидистиллятор
ИС NORMPROD: примечание.
Взамен ГОСТ Р МЭК 60335-2-15-98 Приказом Ростехрегулирования от 13.11.2006
N 251-ст с 01.01.2008 введен в действие ГОСТ Р 52161.2.15-2006.
ГОСТ Р 52161.2.15-2006 утратил силу с 01.01.2014 в связи с введением
в действие ГОСТ IEC 60335-2-15-2012 (Приказ Росстандарта от 17.10.2012
N 524-ст). ГОСТ IEC 60335-2-15-2012 утратил силу с 01.01.2017 в связи
от 23.10.2014 N 1404-ст).
Баня ультразвуковая "Сапфир", УЗВ-1,3 ГОСТ Р МЭК 60335-2-15-98
Вакуумный манипулятор для работы
с патронами для твердофазной экстракции
(Waters, кат. N WAT 200677)
Воронка Бюхнера ГОСТ 0147
Колба Бунзена ГОСТ 5614-75
Колбы круглодонные на шлифах КШ 50 14/23 ТС ГОСТ 10384-72
Колбы круглодонные на шлифах КШ 250 29/32 ТС ГОСТ 10384-72
Мельница ножевая РМ-120 и лабораторная
зерновая ЛМЗ ТУ 1-01-0593-79
Патроны Диапак С16 (БиоХимМак), 0,4 г ТУ 4215-002-05451931-94
Патроны, заполненные силикагелем 60
(Merck), 0,5 г
Ротационный вакуумный испаритель фирмы BUCHI,
мод. R 205 (Швейцария)
Фильтры бумажные "красная лента" ТУ 6.091678-86
Допускается использование другого вспомогательного оборудования с техническими характеристиками не хуже указанных.
4. Требования безопасности
4.1. При проведении работы необходимо соблюдать требования техники безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (
ГОСТ 12.1.005,
12.1.007). Организация обучения работников безопасности труда по
ГОСТ 12.0.004.
При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа и работе с электроустановками соблюдать правила электробезопасности в соответствии с
ГОСТ 12.1.019-79 и инструкциями по эксплуатации приборов.
4.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по
ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по
ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных
ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны".
5. Требования к квалификации операторов
Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по
п. 13.
При выполнении измерений выполняют следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
7. Подготовка к определению
7.1. Кондиционирование колонки
Перед началом анализа колонку (Acquity BEH C18) кондиционируют в потоке подвижной фазы (0,1 - 0,2 куб. см/мин.) до стабилизации нулевой линии.
7.2. Приготовление растворов
7.2.1. 0,005 М раствор ортофосфорной кислоты: (0,5 +/- 0,01) г 98% ортофосфорной кислоты помещают в мерную колбу объемом 1 куб. дм, растворяют в бидистиллированной воде и доводят объем до метки.
7.2.2. Для приготовления подвижной фазы 1 смешивают ацетонитрил с 0,005 М раствором ортофосфорной кислоты в соотношении 40:60 по объему, используя мерные цилиндры.
7.2.3. Для приготовления подвижной фазы 2 смешивают ацетонитрил с 0,005 М раствором ортофосфорной кислоты в соотношении 65:35 по объему, используя мерные цилиндры.
7.2.4. Приготовление элюентов для твердофазной экстракции.
Элюент 1. В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 5 куб. см этилацетата и доводят объем до метки гексаном. Перемешивают. Элюент хранят в вытяжном шкафу и используют свежеприготовленным.
Элюент 2. В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 20 куб. см этилацетата и доводят объем до метки гексаном. Перемешивают. Элюент хранят в вытяжном шкафу и используют свежеприготовленным.
Элюент 3. В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 50 куб. см этилацетата и доводят объем до метки гексаном. Перемешивают. Элюент хранят в вытяжном шкафу и используют свежеприготовленным.
7.3. Приготовление основных и градуировочных растворов
7.3.1. Основные растворы 1 и 2 с концентрацией 0,5 мг/куб. см: точные навески изопротурона и дифлуфеникана (50 +/- 0,5) мг помещают в мерные колбы вместимостью 100 куб. см, растворяют в ацетонитриле и доводят объемы до метки тем же растворителем.
Градуировочные растворы изопротурона и дифлуфеникана с концентрациями 0,05, 0,1, 0,2, 0,5, 0,75 и 1,0 мкг/куб. см готовят методом последовательного разбавления основных растворов 1 и 2 по объему, используя соответственно подвижные фазы 1 и 2.
7.3.2. Раствор N 1 с концентрацией изопротурона 1,0 мкг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 100 куб. см вносят 0,2 куб. см основного раствора 1 и доводят объем до метки подвижной фазой 1.
7.3.3. Раствор N 2 с концентрацией изопротурона 0,75 мкг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 10 куб. см вносят 7,5 куб. см раствора N 1 и доводят объем до метки подвижной фазой 1.
7.3.4. Раствор N 3 с концентрацией изопротурона 0,5 мкг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 5 куб. см раствора N 1 и доводят объем до метки подвижной фазой 1.
7.3.5. Раствор N 4 с концентрацией изопротурона 0,2 мкг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 2,0 куб. см раствора N 1 и доводят объем до метки подвижной фазой 1.
7.3.6. Раствор N 5 с концентрацией изопротурона 0,1 мкг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 1 куб. см раствора N 1 и доводят объем до метки подвижной фазой 1.
7.3.7. Раствор N 6 с концентрацией изопротурона 0,05 мкг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 0,5 куб. см раствора N 1 и доводят объем до метки подвижной фазой 1.
7.3.8. Раствор N 7 с концентрацией дифлюфеникана 1,0 мкг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 100 куб. см вносят 0,2 куб. см основного раствора 2 и доводят объем до метки подвижной фазой 2.
7.3.9. Раствор N 8 с концентрацией дифлюфеникана 0,75 мкг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 10 куб. см вносят 7,5 куб. см раствора 6 и доводят объем до метки подвижной фазой 2.
7.3.10. Раствор N 9 с концентрацией дифлюфеникана 0,5 мкг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 10 куб. см вносят 5,0 куб. см раствора 6 и доводят объем до метки подвижной фазой 2.
7.3.11. Раствор N 10 с концентрацией дифлюфеникана 0,2 мкг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 10 куб. см вносят 2,0 куб. см раствора 6 и доводят объем до метки подвижной фазой 2.
7.3.12. Раствор N 11 с концентрацией дифлюфеникана 0,1 мкг/куб. см: в мерную колбу вместимостью 10 куб. см вносят 1,0 куб. см раствора 6 и доводят объем до метки подвижной фазой 2.
Основные растворы 1 и 2 можно хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °C в течение 1 месяца, градуировочные растворы - в течение суток.
При изучении полноты определения изопротурона и дифлуфеникана в почве, зерне и соломе зерновых используют ацетонитрильные растворы веществ. Растворы с концентрациями аналитов 1,0 и 10,0 мкг/куб. см готовят из основных растворов 1 и 2 с концентрациями изопротурона и дифлюфеникана 0,5 мг/куб. см методом последовательного разбавления по объему ацетонитрилом.
7.4. Построение градуировочного графика
Для установления градуировочных характеристик (площадь пика - концентрация изопротурона или дифлуфеникана в растворах) в хроматограф вводят по 10 куб. мм градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций). Затем измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации изопротурона или дифлуфеникана в градуировочных растворах.
Методом наименьших квадратов рассчитывают градуировочные коэффициенты (K) в уравнении линейной регрессии:
C = KS,
где S - площадь пика градуировочного раствора.
Градуировку признают удовлетворительной, если значение коэффициента линейной корреляции оказывается не ниже 0,99.
Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.
Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:
|C - C |
к
-------- x 100 <= лямбда ,
C контр.
где:
C - аттестованное значение массовой концентрации изопротурона или
дифлуфеникана в градуировочном растворе в мг/куб. см;
C - результат контрольного измерения массовой концентрации
к
изопротурона или дифлуфеникана в градуировочном растворе в мг/куб. см;
лямбда - норматив контроля градуировочного коэффициента, %
контр.
(лямбда = 10% при P = 0,95).
контр.
7.5. Подготовка патронов для твердофазной экстракции
Диапак С16: Непосредственно перед употреблением в два последовательно соединенных патрона вносят сначала 1 куб. см ацетонитрила, а затем 1 куб. см воды.
Патрон Силикагель 60: Непосредственно перед употреблением через патрон пропускают 2 куб. см гексана.
Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными
правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79), а также в соответствии с
ГОСТ Р 51592-2000 "Вода. Общие требования к отбору проб";
ГОСТ Р 50436-92 (ИСО 950-79) "Зерновые. Отбор проб зерна";
ГОСТ 28168-89 "Почвы. Отбор проб". Пробы зерна и соломы для определения остатков в урожае хранят в бумажной или тканевой упаковке при комнатной температуре. Для длительного хранения пробы почвы подсушиваются при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение года. Перед анализом сухую почву доводят до стандартной влажности, просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм, зерно и солому измельчают на лабораторных мельницах.
9. Проведение определения
9.1. Определение изопротурона и дифлюфеникана
в воде водоемов
Две аликвоты воды по 50 куб. см пропускают отдельно через патроны Диапак С16. Фильтраты отбрасывают. Через каждый патрон пропускают 3 куб. см ацетонитрила. Элюаты 1 и 2 собирают по отдельности и упаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани не выше 40 °C. Сухой остаток 1 растворяют в 0,5 куб. см подвижной фазы 1, а сухой остаток 2 - в 0,5 куб. см подвижной фазы 2. Первый раствор (10 куб. мм) вводят в жидкостный хроматограф для определения изопротурона в соответствующих условиях хроматографирования (см.
п. 9.3). Второй раствор хроматографируют в условиях соответствующих анализу дифлюфеникана.
9.2. Определение изопротурона и дифлюфеникана
в почве, зерне и соломе зерновых
По (20 +/- 0,1) г почвы или измельченного на лабораторной мельнице зерна или (5 +/- 0,1) г нарезанной ножом соломы помещают в коническую колбу вместимостью 250 куб. см, прибавляют 10 куб. см воды и, спустя 2 - 3 мин., 40 куб. см ацетона. Экстрагируют на ультразвуковой бане в течение 10 мин. Массу фильтруют через бумажный фильтр "красная лента" на воронке Бюхнера. Экстракцию повторяют, используя в качестве экстрагента 50 куб. см смеси ацетона и воды в соотношении 4:1. Объединенный экстракт упаривают на вакуумном ротационном испарителе при температуре водяной бани не выше 40 °C до полного удаления ацетона. Водный остаток (около 20 куб. см) фильтруют через бумажный фильтр "красная лента" и пропускают через два соединенных последовательно и откондиционированных по
п. 7.5 патрона Диапак С16. Фильтрат отбрасывают. Изопротурон и дифлюфеникан элюируют 4 куб. см ацетона. Элюат упаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре водяной бани не выше 40 °C, сухой остаток растворяют в 2,0 куб. см гексана и количественно переносят в патрон Силикагель 60, откондиционированный гексаном по п. 7.5. Фильтрат отбрасывают. Патрон промывают двумя порциями по 2 куб. см гексана и 2 куб. см элюента 1. Промывки отбрасывают. Дифлюфеникан элюируют 5 куб. см элюента 2 и собирают элюат 1 в отдельную колбу. Патрон промывают 2 куб. см элюента 3. Промывку отбрасывают. Изопротурон элюируют 5 куб. см элюента 3, собирая отдельно элюат 2. Элюаты 1 и 2 упаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре водяной бани не выше 40 °C. Сухие остатки изопротурона в зерне и соломе растворяют в 1 куб. см подвижной фазы 1, а в почве - в 2 куб. см подвижной фазы 1. Сухие остатки дифлюфеникана в почве и зерне растворяют в 2 куб. см подвижной фазы 2, а остаток дифлюфеникана в соломе - в 1 куб. см подвижной фазы 2.
9.3. Условия хроматографирования
Ультраэффективный жидкостный хроматограф "ACQUITY" фирмы Waters с быстросканирующим УФ-детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки. Аналитическая колонка ACQUITY UPLC BEH C18 (2,1 x 100) мм, 1,7 мкм (Waters). Температура колонки (30 +/- 1) °C.
Изопротурон: Подвижная фаза 1: смесь ацетонитрила и 0,005 М ортофосфорной кислоты в соотношении 40:60. Скорость потока элюента: 0,2 куб. см/мин. Рабочая длина волны УФ-детектора 240 нм. Объем вводимой пробы 10 куб. мм. Время удерживания изопротурона (4,2 +/- 0,1) мин.
Дифлюфеникан: Подвижная фаза 2: смесь ацетонитрила и 0,005 М ортофосфорной кислоты в соотношении 65:35. Скорость потока элюента: 0,2 куб. см/мин. Рабочая длина волны УФ-детектора 285 нм. Объем вводимой пробы 10 куб. мм. Время удерживания дифлюфеникана (4,7 +/- 0,1) мин.
Линейные диапазоны детектирования изопротурона и дифлюфеникана сохраняются в интервале концентраций 0,01 - 1,0 мкг/куб. см.
10. Обработка результатов анализа
Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки. Содержание изопротурона и дифлюфеникана в воде (X, мг/куб. дм), в почве, зерне и соломе (X, мг/кг) вычисляют по формуле:
S x K x V 100
х
X = ---------- x ---,
P f
где:
S - площадь пика изопротурона и дифлюфеникана на хроматограмме
х
испытуемого образца, AU x сек. (AU);
K - градуировочный коэффициент, найденный на стадии построения
соответствующей градуировочной зависимости;
V - объем пробы, подготовленной для хроматографического анализа,
куб. см;
P - навеска анализируемого образца, г (воды, куб. см);
f - полнота извлечения изопротурона и дифлюфеникана, приведенная в
табл. 2 (%).
Таблица 2
ПОЛНОТА ИЗВЛЕЧЕНИЯ ИЗОПРОТУРОНА И ДИФЛЮФЕНИКАНА,
СТАНДАРТНОЕ ОТКЛОНЕНИЕ, ДОВЕРИТЕЛЬНЫЙ ИНТЕРВАЛ
СРЕДНЕГО РЕЗУЛЬТАТА ДЛЯ n = 20, P = 0,95
Аналит | Анали- зируе- мый объект | Предел обнаружения, мг/кг (мг/куб. дм) | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/куб. дм) | Среднее значение опреде- ления, % | Стан- дартное откло- нение, S | Доверительный интервал среднего результата, +/- % |
Изопро- турон | Вода | 0,001 | 0,001 - 0,01 | 91,8 | 8,2 | 3,8 |
Почва | 0,01 | 0,01 - 0,1 | 89,2 | 13,0 | 6,1 |
Зерно | 0,005 | 0,005 - 0,1 | 90,5 | 10,5 | 4,9 |
Солома | 0,02 | 0,02 - 0,2 | 95,9 | 6,8 | 3,2 |
Дифлю- феникан | Вода | 0,001 | 0,001 - 0,01 | 89,1 | 2,3 | 1,1 |
Почва | 0,01 | 0,01 - 0,1 | 84,9 | 9,9 | 4,7 |
Зерно | 0,01 | 0,01 - 0,1 | 88,5 | 9,4 | 4,4 |
Солома | 0,02 | 0,02 - 0,2 | 82,1 | 8,3 | 3,9 |
Содержание остаточных количеств изопротурона или дифлюфеникана в образце вычисляют как среднее из двух параллельных определений.
Пробы, дающие пики большие, чем стандартный раствор изопротурона или дифлюфеникана с концентрацией 1,0 мкг/куб. см разбавляют подвижной фазой 1 или 2, соответственно.
11. Проверка приемлемости результатов
параллельных определений
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):
2 x |X - X | x 100
1 2
------------------- <= r,
(X + X )
1 2
где:
X и X - результаты параллельных определений, мг/кг;
1 2
r - значение предела повторяемости (r = 2,8 сигма ).
r
При невыполнении
условия (1) выясняют причины превышения предела
повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.
12. Оформление результатов
Результат анализа представляют в виде:
(X +/- ДЕЛЬТА) мг/кг при вероятности P = 0,95,
где:
X - среднее арифметическое результатов определений, признанных
приемлемыми, мг/кг;
ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг.
дельта x X
ДЕЛЬТА = ----------,
100
где дельта - граница относительной погрешности методики (показатель
точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
В случае если содержание аналита менее нижней границы диапазона
определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:
содержание изопротурона в зерне менее 0,005 мг/кг, в почве - менее 0,01
мг/кг, дифлюфеникана в пробах почвы и зерна менее 0,01 мг/кг, содержание
изопротурона и дифлюфеникана в пробах воды менее 0,001 мг/куб. дм, а в
пробах соломы менее 0,02 мг/кг <*>.
--------------------------------
<*> 0,005 мг/кг - предел обнаружения изопротурона в зерне, 0,01 мг/кг -
предел обнаружения дифлюфеникана в пробах почвы и зерна, изопротурона в
пробах почвы; 0,001 мг/куб. дм - предел обнаружения изопротурона и
дифлюфеникана в воде, а 0,02 мг/кг - предел обнаружения в пробах соломы.
13. Контроль качества результатов измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений
осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность
(правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".
13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением
измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры
выполнения анализа проводится с применением метода добавок.
Величина добавки C должна удовлетворять условию:
д
C = ДЕЛЬТА + ДЕЛЬТА ,
д л,X л,X'
где +/- ДЕЛЬТА (+/- ДЕЛЬТА ) - характеристика погрешности
л,X л,X'
(абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию
компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента
в образце с добавкой, соответственно), мг/кг; при этом:
ДЕЛЬТА = +/- 0,84 ДЕЛЬТА,
л
где ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг:
дельта x X
ДЕЛЬТА = ----------,
100
где дельта - граница относительной погрешности методики (показатель
точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
Результат контроля процедуры K рассчитывают по формуле:
к
K = X' - X - C ,
к д
где X', X, C - среднее арифметическое результатов параллельных
д
определений (признанных приемлемыми по
п. 11) содержания компонента в
образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки,
соответственно, мг/кг.
Норматив контроля K рассчитывают по формуле:
_____________________
/ 2 2
K = \/ДЕЛЬТА + ДЕЛЬТА . (1)
л,X' л,X
Проводят сопоставление результата контроля процедуры (K ) с нормативом
к
контроля (K).
Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:
к
процедуру анализа признают удовлетворительной.
При невыполнении
условия (2) процедуру контроля повторяют. При
повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к
неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.
13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в
условиях воспроизводимости.
Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных
лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):
2 x |X - X | x 100
1 2
------------------- <= R, (3)
(X - X )
1 2
где:
X и X - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
1 2
R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном
концентраций), %.
ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений, Санкт-Петербург.
Методика прошла метрологическую экспертизу (Свидетельство об аттестации N 01.5.04.679) и внесена в Федеральный реестр (ФР.1.31.2011.10036).
