"МУК 4.1.2682-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств тетраконазола в ботве и корнеплодах сахарной свеклы методом газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 02.08.2010)

1. Разработаны сотрудниками ГНУ Всероссийского НИИ защиты растений, Санкт-Петербург.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 10.06.2010 N 1).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 2 августа 2010 г.

4. Введены в действие с 1 октября 2010 г.

5. Введены впервые.

Настоящие методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения в корнеплодах сахарной свеклы массовой концентрации тетраконазола в диапазоне концентраций 0,025 - 0,25 мг/кг, в ботве свеклы - 0,05 - 0,5 мг/кг.

Название действующего вещества по ICO: Тетраконазол.

Название по IUPAC: (RS)2-(2,4-дихлорфенил)-3-(1H-1,2,4-триазол-1-ил) пропил-1,1,2,2-тетрафторэтиловый эфир.

Структурная формула: (не приводится).

Мол. масса: 372,1.

Химически чистый тетраконазол представляет собой бесцветную вязкую жидкость, разлагается при 240 °C до кипения, давление паров 0,18 мРа, показатель преломления 1,432 (20 °C).

Растворимость: в воде 156 мг/л (pH 7, 20 °C); хорошо растворим в 1,2-дихлорэтане, ацетоне, метаноле.

Стабилен в разбавленных водных растворах с pH 5 - 9.

Область применения: фунгицид широкого спектра действия, применяется для борьбы против септориоза, разного вида ржавчины, пиреноспороза, мучнистой росы, окаймленной пятнистости листьев в виде 12,5% водной эмульсии.

Гигиенические нормативы для тетраконазола в сахарной свекле не установлены.

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 1, для соответствующих диапазонов концентраций.

Метрологическая характеристика метода представлена в табл. 1 и 2.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в таблице 2.

Методика основана на определении тетраконазола методом газожидкостной хроматографии с использованием электронозахватного детектора (ДЭЗ или ДПР) после его извлечения из образцов органическим растворителем, очистке путем перераспределения между двумя жидкими фазами и при необходимости на патронах с силикагелем 60. Идентификация тетраконазола проводится по времени удерживания, количественное определение - методом абсолютной калибровки.

Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Допускается использование реактивов квалификацией не ниже указанных.

Допускается использование другого вспомогательного оборудования с техническими характеристиками не ниже указанных.

4.1. При проведении работы необходимо соблюдать требования техники безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1.005, ГОСТ 12.1.007). Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.

При выполнении измерений с использованием газового хроматографа и работе с электроустановками соблюдать правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкциями по эксплуатации приборов.

4.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны".

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом газожидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 14.

При выполнении измерений выполняют следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха 20 +/- 5 °C и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Отбор образцов свеклы для анализа проводят в соответствии с ГОСТ 1722-85 "Свекла столовая свежая, заготовляемая и поставляемая". Для длительного хранения образцы свеклы (ботва и корнеплоды) помещают в герметично закрытый двойной полиэтиленовый пакет и хранят в морозильной камере с температурой -18 °C.

Готовую насадку (5% XE-60 на хроматоне N-Super) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и кондиционируют в токе азота при температуре 250 °C в течение 8 - 10 часов.

Капиллярную колонку перед анализом кондиционируют в токе азота при температуре 250 °C до установления нулевой линии.

8.2.1. Приготовление насыщенного раствора хлористого натрия

В коническую колбу на 250 куб. см наливают 150 куб. см дистиллированной воды и насыпают в нее хлористый натрий при постоянном помешивании до тех пор, пока не образуется нерастворимый остаток хлористого натрия. Колбу выдерживают в течение 30 мин., периодически помешивая раствор. Если осадок растворился, добавляют еще хлористого натрия до образования нерастворимого остатка.

8.2.2. Приготовление градуировочных растворов

8.2.2.1. Основной раствор с концентрацией 0,5 мг/куб. см

Точную навеску тетраконазола (50 +/- 0,5 мг) помещают в мерную колбу объемом 100 куб. см, растворяют в ацетоне и доводят до метки. Основной раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °C в течение 6 месяцев.

Градуировочные растворы с концентрациями 0,5, 0,25, 0,1 и 0,05 мкг/куб. см готовят из основного раствора методом последовательного разбавления гексаном по объему.

8.2.2.2. Раствор N 1 с концентрацией 0,5 мкг/куб. см: в мерную колбу на 100 куб. см пипеткой вносят 1 куб. см основного раствора и доводят до метки гексаном. Затем 10 куб. см полученного раствора пипеткой переносят в мерную колбу на 100 куб. см и вновь доводят до метки гексаном.

8.2.2.3. Раствор N 2 с концентрацией 0,25 мкг/куб. см: в мерную колбу на 100 куб. см вносят пипеткой 50 куб. см раствора N 1 и доводят до метки гексаном.

8.2.2.4. Раствор N 3 с концентрацией 0,1 мкг/куб. см: в мерную колбу на 100 куб. см вносят пипеткой 20 куб. см раствора N 1 и доводят до метки гексаном.

8.2.2.5. Раствор N 4 с концентрацией 0,05 мкг/куб. см: в мерную колбу на 100 куб. см вносят пипеткой 10 куб. см раствора N 1 и доводят до метки гексаном.

Градуировочные растворы хранятся в холодильнике в течение 1 месяца.

При определении полноты извлечения для внесения в образец корнеплодов используют растворы тетраконазола в ацетоне.

Для построения градуировочного графика в хроматограф вводят по 1 куб. мм каждого из градуировочных растворов (3 параллельных определения для каждой концентрации, не менее 4-х точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют высоты или площади пиков и строят график зависимости среднего значения высоты или площади пика от концентрации тетраконазола в градуировочном растворе (мкг/куб. см).

Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.

Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:

Отбор образцов свеклы для анализа проводят в соответствии с ГОСТ 1722-85 "Свекла столовая свежая, заготовляемая и поставляемая". Для длительного хранения (до 12 мес.) образцы свеклы (ботва и корнеплоды) упаковывают в двойной полиэтиленовый пакет, герметично заклеивают и помещают в морозильную камеру с температурой -18 °C.

Навеску ботвы 10 +/- 0,1 г или корнеплодов 20 +/- 0,1 г измельчают, помещают в коническую колбу и заливают 50 - 100 куб. см ацетона, таким образом, чтобы проба была полностью покрыта раствором, и экстрагируют тетраконазол в ультразвуковой ванне в течение 15 мин. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр "красная лента". Остаток на фильтре промывают дважды ацетоном порциями по 25 куб. см. Объединенный фильтрат упаривают на ротационном испарителе до водного остатка при температуре не выше 40 °C. Остаток переносят в делительную воронку, добавляют 80 куб. см дистиллированной воды и 25 куб. см насыщенного раствора хлористого натрия. Тетраконазол переэкстрагируют в 1,2-дихлорэтан.

Для этого в воронку добавляют 100 куб. см 1,2-дихлорэтана и встряхивают воронку в течение 1 - 2 мин. После разделения фаз органическую фазу отбирают в круглодонную колбу через слой безводного сульфата натрия (20 г). 1,2-дихлорэтан выпаривают на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °C. Сухой остаток растворяют в 10 куб. см гексана (на УЗ-бане в течение 2 мин.) и хроматографируют.

При обнаружении на хроматограмме мешающих определению тетраконазола примесей проводят дополнительную очистку на патронах с силикагелем 60 (п. 10.2).

Твердофазную экстракцию проводят на концентрирующем патроне, заполненном 0,5 г силикагеля 60 с размером частиц 0,040 - 0,063 мм. Патрон промывают 1 куб. см ацетона и 2,5 куб. см гексана.

Сухой остаток, полученный при упаривании очищенных по п. 10.1 экстрактов, количественно переносят двумя порциями по 1 куб. см гексана в патрон. Промывают патрон последовательно двумя порциями по 2,5 куб. см гексана и 4 куб. см элюента 1 (гексан:ацетон 80:20). Фильтрат и промывки отбрасывают. Тетраконазол элюируют 3 куб. см элюента 2 (гексан:ацетон 60:40). Элюат собирают в грушевидную колбу и упаривают на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °C. Сухой остаток растворяют в 10 куб. см гексана и 1 куб. мм вводят в испаритель хроматографа.

Время удерживания тетраконазола 11 мин. 17 сек. +/- 5 сек.

Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки, содержание тетраконазола в образце ботвы или корнеплодов свеклы (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

V - объем пробы, подготовленной для хроматографического анализа, куб. см;

P - навеска анализируемого образца, г;

C - концентрация стандартного раствора тетраконазола, мкг/куб. см.

Содержание остаточных количеств тетраконазола в анализируемом образце вычисляют как среднее из 2-х параллельных определений.

При получении зашкаленных пиков анализируемый экстракт разбавляют гексаном.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

дельта - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание вещества в пробе "менее нижней границы определения" (например: менее 0,025 или 0,05 мг/кг <*>).

--------------------------------

<*> 0,025 и 0,05 мг/кг - пределы обнаружения в корнеплодах и ботве свеклы, соответственно.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

14.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

14.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.

где ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

дельта - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.

14.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений, Санкт-Петербург.

Методика прошла апробацию в ФГУ "Санкт-Петербургский НИИ лесного хозяйства".

Методика прошла метрологическую экспертизу (Свидетельство об аттестации N 01.5.04.637) и внесена в Федеральный реестр (ФР.1.31.2010.06930).