"МУК 4.1.2863-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Пропизахлора в воде, почве, зеленой массе, зерне кукурузы, семенах подсолнечника, рапса и растительном масле методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 31.03.2011)

1. Разработаны Российским государственным аграрным университетом - МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научным консультационным центром "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов" Минсельхоза России.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 28.12.2010 N 3).

3. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 31 марта 2011 г.

4. Введены в действие с момента утверждения.

5. Введены впервые.

Свидетельство об аттестации методики от 25.06.2010 N 01.5.04.685.

Настоящий документ устанавливает методику определения остаточных количеств Пропизахлора в воде в диапазоне концентраций 0,002 - 0,02 мг/кг, в почве, зеленой массе и зерне кукурузы, семенах подсолнечника и рапса в диапазоне концентраций 0,025 - 0,25 мг/кг, в растительном масле 0,05 - 0,5 мг/кг.

Действующее вещество: Пропизахлор.

Структурная формула (не приводится).

Название действующего вещества по ИЮПАК: 2-хлор-6'-этил-N-изопропоксиметилацето-о-толуидин.

Молекулярная масса: 283,8.

Химически чистое вещество: маслянистая жидкость от светло-коричневого до пурпурного цвета с характерным запахом.

Температура плавления: 21,6 °С.

Давление пара при 20 °С: 4 мПа.

Растворимость в воде 184 мг/куб. дм. Растворим в большинстве органических растворителей. Гидролитически стабилен. Через 5 дней хранения при 50 °С (pH 4, 7, 9) степень разложения составляет менее 10%.

Область применения: Пропизахлор - селективный гербицид для регулирования роста однолетних трав и некоторых широколистных сорняков на почвах кукурузы, подсолнечника, сои, картофеля и гороха.

Механизм действия заключается в ингибировании деления клеток посредством блокирования белкового синтеза при адсорбции гербицида на корнях прорастающих растений.

Гигиенические нормативы для Пропизахлора в России не установлены.

2.1.1. Область применения и принцип метода

Настоящие Методические указания устанавливают метод определения остаточных количеств Пропизахлора в воде водоемов в диапазоне концентраций 0,002 - 0,01 мг/кг, в почве, зеленой массе, зерне кукурузы, семенах подсолнечника и рапса в диапазоне концентраций 0,025 - 0,25 мг/кг и в растительном масле - 0,05 - 0,5 мг/кг.

Методика основана на определении Пропизахлора методом ВЭЖХ с использованием УФ-детектора после его извлечения из образцов водным ацетоном или ацетонитрилом с последующей очисткой на концентрирующих патронах.

2.1.2. Метрологические характеристики

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.

2.1.3. Избирательность метода

Избирательность метода определения Пропизахлора достигается сочетанием условий подготовки проб и хроматографического анализа.

Допускается использование реактивов и материалов с характеристиками не хуже указанных.

Допускается использование средств измерения и вспомогательного оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

Отбор проб производится в соответствии с ГОСТ 29168-89 "Почвы. Отбор проб", ГОСТ Р 51592-2000 "Вода. Общие требования к отбору проб". Для длительного хранения пробы почвы подсушивают при комнатной температуре в отсутствии прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение года. Перед анализом сухую почву доводят до стандартной влажности, просеивают через сито с отверстиями 1 мм.

Зеленую массу замораживают при температуре -18 °С и хранят в морозильной камере в полиэтиленовой упаковке в течение года.

Отбор проб семян подсолнечника и рапса производится в соответствии с ГОСТ 10852-86 "Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб". Семена хранят при комнатной температуре в полотняных мешочках, перед анализом доводят до стандартной влажности и измельчают. Растительное масло хранят в холодильнике при температуре 0 - 4 °С в герметично закрытой стеклянной таре в течение 6 месяцев.

2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей

2.5.2. Кондиционирование колонки

Перед началом анализа аналитические колонки кондиционируют в потоке подвижной фазы (0,1 - 0,2 мл/мин.) до стабилизации нулевой линии в течение 1 ч.

2.5.3. Приготовление растворов

Для приготовления 0,005 М раствора ортофосфорной кислоты 0,5 г 98%-ной ортофосфорной кислоты помещают в мерную колбу объемом 1 куб. дм, растворяют в бидистиллированной воде и доводят объем до метки.

2.5.3.1. Приготовление стандартного и градуировочных растворов.

Точную навеску Пропизахлора (50 мг) помещают в мерную колбу объемом 100 куб. см, растворяют в ацетонитриле и доводят до метки (стандартный раствор с концентрацией 0,5 мг/куб. см). Градуировочные растворы с концентрациями 2,5; 5,0; 10,0; 20,0 и 25,0 мкг/куб. см готовят методом последовательного разбавления по объему, используя подвижную фазу.

Стандартный раствор можно хранить в холодильнике в силанизированном или тефлоновом флаконе при температуре 0 - 4 °С в течение 1 месяца, градуировочные растворы используют в течение рабочего дня.

При изучении полноты извлечения Пропизахлора используют ацетонитрильные растворы вещества.

2.5.4. Построение градуировочного графика

Для построения градуировочного графика (площадь пика - концентрация Пропизахлора в растворе) в хроматограф вводят по 10 куб. мм градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций). Затем измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации Пропизахлора в градуировочном растворе.

Методом наименьших квадратов рассчитывают градуировочный коэффициент (К) в уравнении линейной регрессии:

где S - площадь пика градуировочного раствора.

Градуировку признают удовлетворительной, если значение коэффициента линейной корреляции оказывается не ниже 0,99.

Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.

Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:

2.5.5. Подготовка приборов и средств измерения

Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями технической документации.

2.5.6. Подготовка концентрирующих патронов для очистки экстракта

2.5.6.1. Кондиционирование патронов, заполненных гексадецилсиликагелем, - Диапак С16 (0,4 г) осуществляют, пропуская через патрон последовательно по 1 куб. см ацетонитрила и воды. Элюат отбрасывают.

2.5.6.2. Кондиционирование патронов, заполненных силикагелем 60 (0,5 г), осуществляют пропусканием 2,5 куб. см гексана.

2.6.1. Определение Пропизахлора в пробах воды

Аликвоту предварительно отфильтрованной воды (50 куб. см) пропускают через откондиционированный патрон Диапак С16 (0,4 г). Фильтрат отбрасывают. Пропизахлор элюируют 5 куб. см ацетонитрила. Элюат упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре бани не выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 0,4 куб. см подвижной фазы. 10 куб. мм вводят в жидкостный хроматограф.

2.6.2. Определение Пропизахлора в пробах почвы

Образец просеянной через сито почвы массой 10 г помещают в коническую колбу вместимостью 100 куб. см с притертой пробкой, прибавляют 5 куб. см воды и 35 куб. см ацетона и экстрагируют в УЗ-бане в течение 15 мин. Суспензию фильтруют в вакууме через воронку Бюхнера (фильтр "красная лента"), осадок на фильтре промывают 5 куб. см ацетона. Экстракцию повторяют и объединенные фильтраты упаривают на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °С до полного удаления ацетона. Водный остаток пропускают через два соединенных последовательно и откондиционированных патрона Диапак С16, промывают двумя порциями воды по 2 куб. см. Фильтрат и промывки отбрасывают. Пропизахлор элюируют 4 куб. см ацетонитрила. Элюат упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 1 куб. см подвижной фазы и 10 куб. мм полученного раствора вводят в жидкостный хроматограф.

2.6.3. Определение Пропизахлора в зерне кукурузы, семенах подсолнечника и рапса, зеленой массе рапса и кукурузы

Навеску размолотых на лабораторной мельнице семян или измельченной зеленой массы (20 г) помещают в коническую колбу вместимостью 250 куб. см, прибавляют 50 куб. см 80%-ного водного ацетона <*> и экстрагируют в УЗ-бане в течение 15 мин. при температуре 30 °С. Экстракцию повторяют еще два раза. Экстракт упаривают на ротационном испарителе до полного удаления ацетона при температуре водяной бани 40 °С. Водный остаток фильтруют через бумажный фильтр и пропускают через два соединенных последовательно и откондиционированных патрона Диапак С16. Фильтрат и промывки отбрасывают. Пропизахлор элюируют 4 куб. см ацетонитрила. Элюат упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре 40 °С. Сухой остаток растворяют в 1 куб. см гексана и количественно вносят в откондиционированный патрон с силикагелем 60. Патрон промывают дважды 2,5 куб. см гексана. Фильтрат и промывки отбрасывают. Пропизахлор элюируют 3 куб. см смеси гексан - эфир в соотношении 7:3. Элюат упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 2 куб. см подвижной фазы и 10 куб. мм образца вводят в жидкостный хроматограф.

--------------------------------

<*> При определении Пропизахлора в зеленой массе прибавляют 50 куб. см ацетона, не содержащего воды.

2.6.4. Определение Пропизахлора в растительном масле

К 5 г масла прибавляют 40 куб. см ацетонитрила и экстрагируют в УЗ-бане в течение 15 мин. при 30 °С. Экстракцию повторяют с двумя свежими порциями ацетонитрила по 40 куб. см. Объединенный экстракт центрифугируют в течение 10 мин. при скорости 8000 об./мин. Супернатант промывают тремя порциями гексана по 20 куб. см. Гексановые промывки отбрасывают. Ацетонитрильный раствор упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре 40 °С. Сухой остаток растворяют в 1 куб. см гексана и далее пробу чистят на патроне с силикагелем 60 так, как это описано в п. 2.6.1. После очистки сухой остаток растворяют в 1 куб. см подвижной фазы и 10 куб. мм образца вводят в жидкостный хроматограф.

2.6.5. Условия хроматографирования

Ультраэффективный жидкостной хроматограф "ACQUITY" фирмы "Waters" с быстросканирующим УФ-детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки. Для анализа проб масла, зеленой массы и семян подсолнечника используют колонку 1. Пробы рапса и зерна кукурузы анализируют на колонке 2. Температура колонки (30 +/- 1) °С. Подвижная фаза: смесь ацетонитрила и 0,005 М ортофосфорной кислоты в соотношении 53:47 (колонка 1) и 60:40 (колонка 2). Скорость потока элюента 0,2 куб. см/мин. Рабочая длина волны УФ-детектора 220 нм. Объем вводимой пробы 10 куб. мм. Время удерживания Пропизахлора на колонках 1 и 2 составляет 5,1 +/- 0,2 мин.

Содержание Пропизахлора в воде, почве, зерне кукурузы, семенах подсолнечника и рапса, зеленой массе, растительном масле (Х, мг/кг) вычисляют по формуле:

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор Пропизахлора 1 мкг/куб. см, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание вещества в пробе менее нижней границы определения" (например: менее 0,025 мг/кг) <*>.

--------------------------------

<*> 0,025 мг/кг - предел обнаружения Пропизахлора в почве.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

6.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

6.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.

6.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

7.1. При проведении работы необходимо соблюдать требования техники безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1.005, ГОСТ 12.1.007). Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа и работе с электроустановками соблюдать правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкциями по эксплуатации приборов.

7.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны".

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 6.

ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений, г. Санкт-Петербург.

Методика прошла метрологическую экспертизу (Свидетельство об аттестации N 01.5.04.693 от 23.11.2010).