"МУК 4.1.2780-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств флуазинама в яблоках, винограде, яблочном и виноградном соках методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 24.11.2010)

1. Разработаны сотрудниками ГНУ Всероссийского НИИ защиты растений.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 14.10.2010 N 2).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 24 ноября 2010 г.

4. Введены в действие с момента утверждения.

5. Введены впервые.

Свидетельство об аттестации методики N 01.5.04.682 от 25.06.2010.

Настоящие Методические указания устанавливают метод капиллярной газожидкостной хроматографии для определения в яблоках, винограде, яблочном и виноградном соке массовой концентрации флуазинама в диапазоне концентраций 0,01 - 0,1 мг/кг.

Название действующего вещества по ICO: флуазинам.

Название по IUPAC: 3-хлор-N-(2-пиридил-5-трифторметил-3-хлор) - альфа, альфа, альфа-трифтор-2,6-динитро-n-толуидин.

Структурная формула: (не приводится).

Мол. масса: 465.1.

Растворимость: в воде 0,135 мг/куб. дм (pH 7, 20 °С); н-гексан - 12, ацетон - 470, толуол - 410, диэтиловый эфир - 320, дихлорметан - 330, этанол - 150, все в г/куб. дм (20 °С).

Область применения: фунгицид защитного действия, проявляет куративную и системную активность, обладает длительным остаточным эффектом. Используется против серой гнили на винограде и яблонях. Обладает акарицидной активностью, применяется для борьбы с клещами на яблоне.

Гигиенические нормативы для флуазинама в яблоках и винограде в России не установлены.

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Методика основана на определении флуазинама методом капиллярной газожидкостной хроматографии с использованием электронозахватного детектора после его извлечения из образцов органическим растворителем, очистке путем перераспределения между двумя жидкими фазами и дополнительной очистке на патроне с силикагелем. Идентификация флуазинама проводится по времени удерживания, количественное определение - методом абсолютной калибровки.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Метрологическая характеристика метода представлена в табл. 1 и 2.

2.1.3. Избирательность метода

Избирательность метода определения флуазинама достигается условиями подготовки проб и хроматографического анализа.

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Допускается использование реактивов квалификацией не ниже указанных.

Допускается использование другого вспомогательного оборудования с техническими характеристиками не хуже указанных.

4.1. При проведении работы необходимо соблюдать правила техники безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1.005, ГОСТ 12.1.007). Организация обучения работников безопасности труда (ГОСТ 12.0.004).

При выполнении измерений с использованием газового хроматографа и работе с электроустановками соблюдать правила электробезопасности в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.019 и инструкциями по эксплуатации приборов.

4.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности (ГОСТ 12.1.004) и иметь средства пожаротушения (ГОСТ 12.4.009). Содержание вредных веществ в воздухе лабораторного помещения не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны".

Измерения может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом капиллярной газожидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации газового хроматографа, освоивший данный метод и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.

При выполнении измерения выполняют следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха лабораторного помещения (20 +/- 5) °С и относительной влажности воздуха не более 80%;

- выполнение измерения на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Капиллярную колонку перед анализом кондиционируют в токе азота при температуре 250 °С до установления нулевой линии.

1 М раствор HCl.

К 500 куб. см дистиллированной воды в мерной колбе на 1 куб. дм добавляют 100 куб. см концентрированной соляной кислоты и доводят до метки водой.

0,2 М раствор HCl.

К 500 куб. см дистиллированной воды в мерной колбе на 1 куб. дм добавляют 20 куб. см концентрированной соляной кислоты и доводят до метки водой.

Точную навеску флуазинама (0,010 г) помещают в мерную колбу объемом 100 куб. см, растворяют в гексане, доводят до метки и получают основной раствор с концентрацией 100 мкм/мл.

Градуировочные растворы с концентрациями 1,0; 0,5; 0,25; 0,1; 0,05 мкг/куб. см готовят из стандартного раствора методом последовательного разбавления гексаном по объему. Для приготовления раствора с концентрацией 1,0 мкг/куб. см в мерную колбу на 100 куб. см вносят 1 куб. см основного раствора и доводят до метки гексаном. Для получения градуировочных растворов с концентрациями 0,5; 0,25; 0,1; 0,05 мкг/куб. см разбавляют предыдущий раствор (1 мкг/куб. см) в 2, 4, 10 и 20 раз. Градуировочные растворы хранят в холодильнике не больше одной недели.

При определении полноты извлечения для внесения в образцы используют растворы флуазинама в ацетоне.

Для построения градуировочного графика в хроматограф вводят по 1 куб. мм каждого из градуировочных растворов (3 параллельных определения для каждой концентрации, не менее 4-х точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют высоты или площади пиков и строят график зависимости среднего значения высоты или площади пика от концентрации флуазинама в градуировочном растворе (мкг/куб. см).

Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.

Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:

Отбор проб винограда производят в соответствии с ГОСТ 25896-83 "Виноград свежий столовый. Технические условия". Пробы ягод винограда хранят до анализа в герметично закрытом двойном полиэтиленовом пакете в морозильной камере при температуре не выше -18 °С в течение 6 месяцев. Отбор проб яблок производят в соответствии с ГОСТ 27572-87 "Яблоки свежие для промышленной переработки". Пробы виноградного и яблочного сока хранят до анализа в морозильной камере при температуре не выше -18 °С в течение месяца, в холодильнике при температуре 0 - 4 °С в стеклянной таре с притертой пробкой в течение недели.

9.1.1. Определение флуазинама в яблоках и ягодах винограда

Навеску измельченных яблок или ягод винограда 20 г помещают в коническую колбу, заливают 50 куб. см смеси ацетон/соляная кислота 1 М (3:1) и экстрагируют флуазинам в ультразвуковой ванне в течение 10 мин. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр "красная лента", остаток с фильтра переносят обратно в колбу и экстракцию повторяют еще два раза, используя каждый раз по 30 куб. см 75%-ного водного ацетона. От объединенного фильтрата берут аликвоту 1/4, соответствующую 5 г навески, и упаривают ее на ротационном испарителе до водного остатка при температуре не выше 40 °С. К остатку добавляют 100 куб. см 0,2 М раствора соляной кислоты и переносят в делительную воронку. Флуазинам трижды экстрагируют гексаном по 30 куб. см. После разделения фаз органический слой собирают в круглодонную колбу, фильтруя через слой безводного сульфата натрия (10 г). Гексан упаривают на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °С. Сухой остаток очищают на патроне с силикагелем (п. 9.2).

9.1.2. Определение флуазинама в яблочном и виноградном соках

К 5 г сока добавляют 100 куб. см 0,2 М раствора соляной кислоты и переносят в делительную воронку. Флуазинам трижды экстрагируют гексаном по 30 куб. см. После разделения фаз органический слой собирают в круглодонную колбу, фильтруя через слой безводного сульфата натрия (10 г). Гексан упаривают на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °С. Сухой остаток очищают на патроне с силикагелем (п. 9.2).

9.2. Очистка проб на патронах с силикагелем

Очистку проводят на концентрирующем патроне ДИАПАК СИЛИКАГЕЛЬ. Патрон промывают 3 куб. см гексана.

Сухой остаток, полученный при упаривании очищенных по п. 9.1 экстрактов, количественно переносят тремя порциями по 1 куб. см гексана в патрон. Патрон промывают 3 куб. см гексана. Фильтрат отбрасывают. Флуазинам элюируют 5 куб. см элюента N 1 (гексан - этилацетат, 9:1), собирают элюат в грушевидную колбу и упаривают на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 1 куб. см гексана и 1 куб. мм вводят в испаритель хроматографа.

9.3. Условия хроматографирования

Газовый хроматограф "Кристалл 2000М" с ДЭЗ; колонка кварцевая капиллярная, длина 30 м, диаметр 0,32 мм с неподвижной фазой НР-1 (0,25 мкм); температура термостата колонки 180 °С; температура испарителя 260 °С, температура детектора 300 °С; газ-носитель - азот, расход газа-носителя - 52,5 куб. см/мин. (давление 90 кПа), сброс пробы - 50 куб. см/мин., поддув в ДЭЗ - 30 куб. см/мин., деление потока 1:20; хроматографируемый объем - 1 куб. мм, анализируемый объем - 1 куб. см.

Время удерживания флуазинама 8 мин. (45 +/- 5) с.

Количественное определение флуазинама проводят методом абсолютной калибровки, содержание в пробе вычисляют по формуле:

Содержание остаточных количеств флуазинама в анализируемом образце вычисляют как среднее из двух параллельных определений. При получении зашкаленных пиков анализируемый экстракт разбавляют гексаном.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

дельта - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: "содержание вещества в пробе менее 0,01 мг/кг" <*>.

--------------------------------

<*> 0,01 мг/кг - предел обнаружения флуазинама в анализируемых объектах.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.

где ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

дельта - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:

процедуру анализа признают удовлетворительной. При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):