"МУК 4.1.2852-11. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Квинмерака в воде, почве, семенах и масле рапса методом газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором РФ 31.03.2011)

1. Разработаны Российским государственным аграрным университетом - МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов" Минсельхоза России.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 28.12.2010 N 3).

3. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 31.03.2011.

4. Введены в действие с момента утверждения.

5. Введены впервые.

Свидетельство об аттестации методики от 06.10.2010 N 0048.27.09.10.

Настоящие методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения массовой концентрации Квинмерака в воде в диапазоне 0,0005 - 0,005 мг/куб. дм, в почве - 0,01 - 0,1 мг/кг, а также уровня остаточных количеств в семенах и масле рапса в диапазоне 0,05 - 0,5 мг/кг.

Название по ИЮПАК: 7-хлор-3-метилхинолинил-8-карбоновая кислота.

Структурная формула (не приводится).

Молекулярная масса: 221,63.

Агрегатное состояние: кристаллы.

Цвет, запах: бесцветный, без запаха.

Давление паров: < 0,01 мПа при 20 °C.

Растворимость в воде г/куб. дм (при 20 °C): 240.

Растворимость в органических растворителях (г/куб. дм, 20 °C): в ацетоне, хлористом метилене - 2,0, этаноле - 1,0, n-гексане, этилацетате - < 1,0.

Стабилен при нагревании и на свету и в водной среде при pH 3 - 9.

Квинмерак - слабая кислота: pKa - 4,32 (при 20 °C).

Область применения: Квинмерак - синтетический ауксин (аналог индолилуксусной кислоты), индуцирующий образование в растениях этилена и абцизовой кислоты, избыток которых приводит к нарушению водного баланса и последующей гибели растений. Хорошо проникает в растение через корни и листья. Эффективно подавляет двудольные однолетние сорняки в посевах сахарной свеклы и рапса при норме расхода до 1,5 г д.в./га.

В России для Квинмерака установлены следующие гигиенические нормативы: МДУ в семенах рапса - 0,1 мг/кг.

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.

Метод основан на определении Квинмерака в виде метилового эфира методом газожидкостной хроматографии с использованием детектора по захвату электронов после его экстракции из образцов ацетонитрилом (ацетоном), очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами, метилирования и дополнительной очистки полученного метилового эфира Квинмерака на колонках с Флоризилом.

Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Избирательность обеспечивается путем подбора колонки и изменения температуры колонки.

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C, относительной влажности не более 80% и нормальном атмосферном давлении;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка колонок с Флоризилом для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на колонке с Флоризилом, построение калибровочной кривой.

Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/куб. дм. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 ч. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см аппарата для перегонки растворителей.

Ацетонитрил перегоняют при температуре 81,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81,5 °C, отбрасывают.

Ацетон помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцовокислый калий из расчета 1 г/куб. дм.

Ацетон перегоняют при температуре 56,2 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 56,2 °C, отбрасывают.

Дистиллят помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 куб. см от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцовокислый калий из расчета 1 г/куб. дм и кипятят в течение 6 ч.

Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °C, отбрасывают.

7.2.1.1. Приготовление 0,05 М раствора двузамещенного фосфорнокислого калия.

7.2.1.2. Приготовление 1 М раствора гидроокиси натрия.

20 г гидроксида натрия переносят в мерную колбу на 500 куб. см, добавляют 200 - 300 куб. см дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).

7.2.1.3. Приготовление 6 М раствора соляной кислоты.

Мерным цилиндром отбирают 246 куб. см концентрированной соляной кислоты и осторожно переносят в мерную колбу на 500 куб. см, куда предварительно наливают около 100 куб. см дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).

7.2.1.4. Приготовление подкисленного ацетонитрила.

К ацетонитрилу пипеткой добавляют концентрированную соляную кислоту до pH ~ 1. При приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой.

7.2.1.5. Приготовление 4 Н раствора серной кислоты.

Мерным цилиндром отбирают 112 куб. см концентрированной серной кислоты и осторожно переносят в мерную колбу на 1000 куб. см, куда предварительно наливают около 300 куб. см дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).

7.2.1.6. Приготовление 5%-го раствора гидрокарбоната натрия.

50 г гидрокарбоната натрия переносят в мерную колбу на 1000 куб. см, добавляют 200 - 300 куб. см дистиллированной воды, перемешивают до полного растворения и доводят водой объем в колбе до метки.

7.2.1.7. Приготовление 40%-го раствора гидроокиси калия.

40 г гидроокиси калия переносят в мерную колбу на 100 куб. см, куда предварительно наливают около 40 куб. см дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).

7.2.1.8. Получение N-нитрозо-N-метилмочевины.

При отсутствии коммерческого препарата нитрозометилмочевины осуществляют его синтез.

При получении нитрозометилмочевины соблюдать осторожность и обязательно работать под тягой.

В круглодонную колбу на шлифе вместимостью 1000 куб. см, снабженную обратным холодильником, помещают 80 г метиламина гидрохлорида и 300 г мочевины, растворяют содержимое в 400 куб. см воды и нагревают 3 ч с обратным холодильником. После этого добавляют в раствор 110 г нитрита натрия, охлаждают в бане со льдом до -10 °C и медленно при перемешивании вливают в смесь 600 г льда и 60 куб. см концентрированной серной кислоты, помещенную в стакан вместимостью 2000 куб. см, охлаждаемый снаружи смесью льда с поваренной солью. Выпавшее нитрозосоединение немедленно отфильтровывают на воронке Бюхнера, хорошо отсасывают под вакуумом и промывают на фильтре ледяной водой.

ВНИМАНИЕ! Нитрозометилмочевину хранят в темной склянке в холодильнике, т.к. под действием света и тепла она может взорваться.

Продукт без дальнейшей очистки может быть использован для получения диазометана.

7.2.1.9. Получение раствора диазометана (метилирующей смеси).

ВНИМАНИЕ! Диазометан взрывоопасен и очень ядовит. При получении раствора диазометана, а также при работе с этим раствором необходимо соблюдать осторожность и обязательно работать под тягой.

В коническую колбу на 100 куб. см вносят 20 куб. см 40%-го раствора гидроокиси калия и 50 куб. см диэтилового эфира, колбу помещают в баню со льдом и охлаждают до температуры 2 - 5 °C. Затем, постоянно встряхивая колбу, небольшими порциями прибавляют 5 г нитрозометилмочевины. Через 10 мин. после внесения последней порции сливают эфирный раствор диазометана и сушат его 3 ч над небольшим количеством твердого едкого калия.

Полученный раствор диазометана годен в течение 1 - 2 суток при хранении в холодильнике в неплотно закрытом сосуде.

7.2.2.1. Стандартный раствор N 1 с концентрацией Квинмерака 1,0 мг/куб. см.

Взвешивают 50 мг Квинмерака в мерной колбе объемом 50 куб. см. Навеску растворяют в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном. Полученный стандартный раствор N 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и построения калибровочной кривой.

7.2.2.2. Стандартный раствор N 2 с концентрацией Квинмерака 10,0 мкг/куб. см.

Из стандартного раствора N 1 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 100 куб. см и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 2 используется для приготовления стандартных растворов для построения калибровочной кривой.

7.2.2.3. Стандартный раствор N 3 с концентрацией метилового эфира Квинмерака 1,0 мкг/куб. см.

Из стандартного раствора N 2 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в концентратор объемом 10 куб. см, удаляют растворитель током теплого воздуха и проводят метилирование, как указано в п. 7.3. Сухой остаток после метилирования растворяют в 10 куб. см гексана. Стандартный раствор N 3 используется для построения калибровочной кривой.

7.2.2.4. Стандартный раствор N 4 с концентрацией метилового эфира Квинмерака 0,5 мкг/куб. см.

Из стандартного раствора N 3 отбирают пипеткой 5 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки гексаном. Стандартный раствор N 4 используется для построения калибровочной кривой.

7.2.2.5. Стандартный раствор N 5 с концентрацией метилового эфира Квинмерака 0,2 мкг/куб. см.

Из стандартного раствора N 3 отбирают пипеткой 2 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки гексаном. Стандартный раствор N 5 используется для построения калибровочной кривой.

7.2.2.6. Стандартный раствор N 6 с концентрацией метилового эфира Квинмерака 0,1 мкг/куб. см.

Из стандартного раствора N 3 отбирают пипеткой 1 куб. см, помещают в мерную колбу объемом 10 куб. см и доводят объем до метки гексаном. Стандартный раствор N 6 используется для построения калибровочной кривой.

7.2.2.7. Стандартные растворы Квинмерака с концентрацией 5,0; 2,5; 2,0; 1,0; 0,5; 0,4 и 0,2 мкг/куб. см для внесения в образцы.

Методом последовательного разведения ацетоном стандартного раствора N 2 готовят растворы, содержащие по 5,0; 2,5; 2,0; 1,0; 0,5; 0,4 и 0,2 мкг/куб. см, и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы.

К сухому остатку в концентраторе прибавляют 2 куб. см раствора диазометана (метилирующей смеси), полученного по п. 7.2.1.9. Концентратор плотно закрывают крышкой и оставляют при комнатной температуре на 1 ч. По истечении этого времени концентратор высушивают током прохладного воздуха (под тягой!).

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации Квинмерака в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/куб. см.

В испаритель хроматографа вводят по 1 куб. мм (для капиллярной колонки) или 5 куб. мм (для набивной колонки) каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.5. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.

В пластиковую или стеклянную колонку диаметром 15 мм помещают 4 г Флоризила с зернением 60/100 меш и, аккуратно постукивая по стенкам колонки, формируют слой адсорбента. На слой Флоризила наносят слой безводного сернокислого натрия толщиной 1 см.

Непосредственно перед использованием колонку промывают 20 куб. см смеси гексана с этилацетатом в соотношении 1:1, затем 10 куб. см гексана и высушивают при комнатной температуре.

В концентратор объемом 100 куб. см вносят 1 куб. см стандартного раствора метилового эфира Квинмерака в гексане с концентрацией 1,0 мкг/см и выпаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 5 куб. см гексана, тщательно обмывают стенки концентратора и наносят на подготовленную колонку. Элюат собирают в концентратор объемом по 100 куб. см и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °C.

Исходную колбу обмывают сначала 10 куб. см гексана, затем 10 куб. см смеси гексана с этилацетатом в соотношении 2:1, а затем еще двумя порциями смеси гексана с этилацетатом в соотношении 1:1 объемом 10 куб. см каждая и последовательно вносят их на колонку. Каждую порцию собирают отдельно в концентраторы объемом по 100 куб. см и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

Сухой остаток каждой фракции растворяют в 2 куб. см гексана и 1 куб. мм пробы вводят в хроматограф.

Определяют фракции, содержащие Квинмерак, полноту смывания с колонки и необходимый объем элюента.

Изучение поведения Квинмерака на колонке проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии Флоризила.

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" от 21.08.1979 N 2051-79, а также ГОСТ Р 51592-2000 "Вода. Общие требования к отбору проб", ГОСТ 17.4.3.01-83 "Почвы. Общие требования к отбору проб", ГОСТ 28168-89 "Почвы. Отбор проб", ГОСТ 10852-86 "Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб", ГОСТ 8988-2002 "Масло рапсовое. ТУ".

Пробы воды хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре 4 °C; пробы почвы - в полиэтиленовой таре в морозильнике при температуре -18 °C.

Отобранные пробы семян рапса подсушивают до стандартной влажности и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.

Пробы масла рапса хранят в плотно закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре 0 - 4 °C.

Пробу воды объемом 400 куб. см помещают в делительную воронку объемом 500 куб. см, прибавляют туда 1 куб. см муравьиной кислоты и перемешивают. Квинмерак экстрагируют тремя порциями хлористого метилена объемом по 70, 50 и 50 куб. см, встряхивая каждый раз делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см, собирая его через слой безводного сульфата натрия. Экстракт выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Отдувают муравьиную кислоту током теплого воздуха.

К сухому остатку в концентраторе, полученному в п. 9.1.1, добавляют 2 куб. см метилирующей смеси и подвергают метилированию, как указано в п. 7.3. После метилирования растворитель отдувают током прохладного воздуха (под тягой!).

Сухой остаток растворяют в 5 куб. см гексана и 5 куб. мм пробы вводят в хроматограф.

Пробу почвы весом 50 г помещают в коническую колбу объемом 250 куб. см, прибавляют туда 20 куб. см 5%-го водного раствора гидрокарбоната натрия. Квинмерак экстрагируют 70 куб. см этанола в течение 1 ч на аппарат для встряхивания проб. Экстракт фильтруют методом декантации в концентратор объемом 250 куб. см через фильтр "красная лента". Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 куб. см этанола и помещая каждый раз на 1 ч на аппарат для встряхивания проб. Экстракты объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см. Объединенный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

К сухому остатку в концентраторе, полученному в п. 9.2.1, прибавляют 5 куб. см ацетона, 50 куб. см дистиллированной воды и 2,5 куб. см муравьиной кислоты, перемешивают и переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см. Туда же прибавляют 10 г сухого хлорида натрия и интенсивно перемешивают до полного растворения соли. Полученную водную фракцию промывают 20 куб. см гексана, встряхивая делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (гексан) отбрасывают, а водную фракцию переносят в делительную воронку.

Квинмерак экстрагируют тремя порциями хлористого метилена объемом по 20, 20 и 10 куб. см, каждый раз интенсивно встряхивая воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой хлористого метилена объединяют в химическом стакане объемом 100 куб. см, верхний (водный) слой отбрасывают. Хлористый метилен возвращают в делительную воронку и экстрагируют Квинмерак тремя порциями 5%-го раствора гидрокарбоната натрия объемом по 20, 20 и 10 куб. см, интенсивно встряхивая делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) отбрасывают. Объединенную водную фракцию переносят в делительную воронку, добавляют 3 куб. см муравьиной кислоты (до pH 3 - 3,5) и дегазируют. Полученную водную фракцию промывают 20 куб. см гексана, встряхивая делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (гексан) отбрасывают, а водную фракцию переносят в чистую делительную воронку.

Квинмерак экстрагируют тремя порциями хлористого метилена объемом по 20, 20 и 10 куб. см, каждый раз интенсивно встряхивая делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой хлористого метилена объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см, пропуская его через слой безводного сульфата натрия, и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

К сухому остатку в концентраторе, полученному в п. 9.2.2, добавляют 2 куб. см метилирующей смеси и подвергают метилированию, как указано в п. 7.3. После метилирования растворитель отдувают током прохладного воздуха (под тягой!).

Сухой остаток, полученный в п. 9.2.3, растворяют в 5 куб. см гексана, тщательно обмывают стенки концентратора и вносят на заранее подготовленную колонку с Флоризилом, элюат отбрасывают. Исходную колбу обмывают сначала 10 куб. см гексана, затем 10 куб. см смеси гексана с этилацетатом в соотношении 2:1, элюаты отбрасывают. Квинмерак элюируют 15 куб. см смеси гексана с этилацетатом в соотношении 1:1. Элюат собирают в концентратор объемом 100 куб. см и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

Сухой остаток растворяют в 5 куб. см гексана и 5 куб. мм пробы вводят в хроматограф.

Образец измельченных семян рапса массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования объемом 200 куб. см, прибавляют 50 куб. см ацетона и помещают на 30 мин. на аппарат для встряхивания проб, а затем на 10 мин. в ультразвуковую ванну. Пробу центрифугируют в течение 10 мин. при скорости 4000 об./мин. и экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 куб. см через фильтр "красная лента". Экстракцию повторяют еще два раза, используя каждый раз по 50 куб. см ацетона и помещая на 30 мин. на аппарат для встряхивания проб, а затем на 10 мин. в ультразвуковую ванну. Пробы центрифугируют в течение 10 мин. при скорости 4000 об./мин., супернатант фильтруют. Экстракты объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см. Экстракт упаривают до маслянистого остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

К масляному остатку в концентраторе, полученному в п. 9.3.1, прибавляют 5 куб. см ацетона, тщательно обмывают стенки концентратора и помещают на 5 мин. в ультразвуковую ванну. В концентратор двумя порциями добавляют 100 куб. см гексана, ополаскивая стенки концентратора, и переносят в делительную воронку.

Квинмерак экстрагируют тремя порциями щелочного буфера pH 9 объемом по 30 куб. см каждая, осторожно встряхивая воронку в течение 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний (водный) слой с эмульсией собирают в коническую колбу объемом 250 куб. см, куда предварительно насыпают около 5 г хлорида натрия. Гексановый слой отбрасывают. Водную фракцию переносят в делительную воронку и промывают двумя порциями гексана по 50 куб. см каждая, встряхивая делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (гексан) отбрасывают, а водную фракцию собирают в коническую колбу объемом 250 куб. см. Затем содержимое колбы подщелачивают 1 М раствором гидроокиси натрия до pH 9. Водную фракцию возвращают в делительную воронку и промывают двумя порциями хлороформа объемом по 50 куб. см каждая и 50 куб. см эфира, встряхивая делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке хлороформ и эфир отбрасывают, а водную фракцию собирают в коническую колбу объемом 250 куб. см, подкисляют 6 М соляной кислотой до pH 3, дегазируют и переносят в чистую делительную воронку.

Квинмерак экстрагируют тремя порциями эфира объемом по 50, 30, 30 куб. см, каждый раз интенсивно встряхивая делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (эфир) объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см, пропуская его через слой безводного сульфата натрия, и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

После упаривания сухой остаток растворяют в 5 куб. см диэтилового эфира и, тщательно обмывая стенки концентратора, переносят в виалу. Процедуру повторяют дважды, используя по 5 куб. см диэтилового эфира. Эфир высушивают под током теплого воздуха (под тягой!) и проводят метилирование, как указано в п. 9.2.3 "Метилирование".

Сухой остаток в виале растворяют в 10 куб. см гексана и 1 куб. мм пробы вводят в хроматограф.

Из пробы рапсового масла отбирают в стакан навеску массой 10 г и переносят ее в делительную воронку объемом 250 куб. см двумя порциями гексана объемом по 25 куб. см. Квинмерак экстрагируют тремя порциями подкисленного ацетонитрила объемом по 50, 30 и 30 куб. см, встряхивая делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний ацетонитрильный слой объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см, пропуская его через слой безводного сульфата натрия, и выпаривают до маслянистого остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Верхний слой (гексан) отбрасывают.

К масляному остатку в концентраторе, полученному в п. 9.4.1, прибавляют 5 куб. см ацетона, тщательно обмывают стенки концентратора и помещают на 5 мин. в ультразвуковую ванну. В концентратор двумя порциями добавляют 60 куб. см 5%-го раствора гидрокарбоната натрия, ополаскивая стенки концентратора, и переносят в делительную воронку. Водную фракцию промывают тремя порциями диэтилового эфира объемом по 30 куб. см каждая, встряхивая делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (эфир) отбрасывают, а водную фракцию собирают в коническую колбу объемом 250 куб. см, подкисляют 4 Н серной кислотой до pH 1, дегазируют и переносят в чистую делительную воронку.

Квинмерак экстрагируют тремя порциями эфира объемом по 30 куб. см каждая, каждый раз интенсивно встряхивая делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (диэтиловый эфир) объединяют в концентраторе объемом 250 куб. см, пропуская его через слой безводного сульфата натрия, и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

После упаривания сухой остаток растворяют в 5 куб. см диэтилового эфира и, тщательно обмывая стенки концентратора, переносят в виалу. Процедуру повторяют дважды, используя по 5 куб. см диэтилового эфира. Эфир высушивают под током теплого воздуха (под тягой!) и проводят метилирование, как указано в п. 9.2.3 "Метилирование".

Сухой остаток в виале растворяют в 10 куб. см гексана, и 1 куб. мм пробы вводят в хроматограф.

Колонка стеклянная спиральная, длина 3 м, внутренний диаметр 3 мм, заполненная 5% OV-17 на Хроматоне-супер (0,16 - 0,20 мм).

Температура: испарителя - 250 °C, термостата колонки - 240 °C, детектора - 340 °C.

Газовый режим: азот - 35 мл/мин.

Абсолютное время удерживания Квинмерака - 7 мин. 55 с.

Объем вводимой пробы - 5 куб. мм.

Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,4 - 10,0 нг.

Альтернативная фаза: 5% XE-60 на Хроматоне N-AW (0,20 - 0,25 мм), длина колонки 3 м.

Температура: термостата колонки - 210 °C, детектора - 340 °C, испарителя - 240 °C.

Газовый режим: азот - 30 мл/мин.

Абсолютное время удерживания Квинмерака - 2 мин. 34 с.

Объем вводимой пробы - 5 куб. мм.

Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,4 - 10,0 нг.

Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая НР-5, (Crosslinked 5% фенилсилоксана и 95% метилсилоксана), длина 30 м, внутренний диаметр 0,25 мм, толщина пленки 0,25 мкм, фирмы "HP".

Температура термостата колонки программированная. Начальная температура - 140 °C, выдержка 2 мин.; нагрев колонки по 10 град./мин. до температуры 200 °C.

Температура: детектора - 320 °C, испарителя - 250 °C.

Газ 1: тип регулятора расхода газа РРГ-11, режим нормальный, скорость 26 см/с, давление 110,92 кПа.

Газ 2 (гелий) - 5 мл/мин.: расход 0,5 мл/мин., сброс 1:10.

Газ 3 (азот, поддув детектора) - 45 мл/мин.

Продувка: температура колонки 230 °C, Газ 2 - 60 мл/мин., Газ 3 - 60 мл/мин., время 3 мин.

Абсолютное время удерживания Квинмерака - 10 мин. 40 с +/- 2%.

Линейность детектирования сохраняется в пределах - 0,05 - 0,5 нг.

Для обработки результатов хроматографического анализа используется программное обеспечение химического анализа "Хроматэк Аналитик", версия 1.20.

Альтернативная обработка результатов.

Содержание Квинмерака рассчитывают по формуле:

A - концентрация стандартного раствора, мкг/куб. см;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;

m - масса анализируемого образца, г;

P - содержание Квинмерака в аналитическом стандарте, %.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

где дельта - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание вещества в пробе менее 0,01 мг/кг" <*>.

--------------------------------

<*> 0,01 мг/кг - предел обнаружения.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Российский государственный аграрный университет - МСХА им. К.А. Тимирязева.

Учебно-научный консультационный центр "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов".