"МУК 4.1.2674-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств бифентрина в семенах и масле рапса методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 02.08.2010)

1. Разработаны Всероссийским НИИ защиты растений.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 10.06.2010 г. N 1).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 2 августа 2010 г.

4. Введены в действие с 1 октября 2010 г.

5. Введены впервые.

Настоящие методические указания устанавливают метод капиллярной газожидкостной хроматографии для определения в семенах и масле рапса массовой концентрации бифентрина в диапазоне концентраций 0,01 - 0,1 мг/кг.

Бифентрин (ISO).

Структурная формула (не приводится).

Мол. масса: 422,9.

СА: (2-метил[1,1'-дифенил]-3-ил)метил 3-(2-хлор-3,3,3-трифтор-1-пропенил)-2,2-диметилциклопропанкарбоксилат.

Химически чистый препарат - очень вязкая маслообразная жидкость, имеющая тенденцию к затвердеванию.

Температура плавления: 68 - 70,6 °C.

Давление паров при 25 °C 0,024 mPa.

Растворимость в воде < 1 мг/л;

хорошо растворим в ацетоне (125 г/100 мл), хлороформе, дихлорметане, диэтиловом эфире и толуоле; слабо растворим в гептане и метаноле.

Устойчив в водном растворе при pH 5 - 9 (21 °C) в течение 21 дня.

Гигиенические нормативы, МДУ бифентрина в семенах и масле рапса не установлены.

Область применения: инсектицид широкого спектра действия для борьбы с тлями, клещом, щитовкой, белокрылкой и др. на фруктовых, овощных, бахчевых, бобовых и зерновых культурах.

2.1.1. Принцип метода

Метод определения бифентрина в растительных объектах основан на экстракции пестицида органическим растворителем и очистке перераспределением между двумя несмешивающимися растворителями и, при необходимости, на колонке с силикагелем. Количественное определение проводят методом газожидкостной хроматофафии с использованием электронозахватного детектора (ДПР).

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Метрологическая характеристика метода представлена в табл. 1 и 2.

2.1.3. Избирательность метода

Избирательность метода обеспечивается очисткой экстрактов анализируемых проб и сочетанием условий хроматографирования.

Допускается использование реактивов квалификацией не ниже указанных.

Допускается использование приборов и посуды с метрологическими характеристиками не ниже указанных.

Отбор проб семян рапса для анализа проводят в соответствии с ГОСТ 10852-86 "Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб".

Пробы семян просушивают до стандартной влажности и хранят в закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре. Перед анализом пробы семян рапса рассыпают на бумаге или кальке и пинцетом удаляют включения. Семена измельчают на лабораторной мельнице и после перемешивания измельченной массы отбирают усредненную аналитическую пробу.

Пробы растительного масла хранят в холодильнике при температуре +4 - 6 °C в закрытой стеклянной таре не более 2 месяцев.

2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей

Перед началом работы рекомендуется проверить чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 куб. см растворителя упаривают в ротационном вакуумном испарителе при температуре +40 °C до объема 1,0 куб. см и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку растворителей производят в соответствии с общепринятыми методиками.

2.5.2. Кондиционирование колонки

Перед началом анализа капиллярную колонку, не присоединяя к детектору, кондиционируют в токе инертного газа (азот) при температуре 250 °C до установления нулевой линии.

2.5.3. Приготовление стандартного и градуировочных растворов

Основной раствор готовят количественно перенося 10 мг бифентрина в мерную колбу на 100 куб. см, растворяют навеску в 1 куб. см ацетона, содержимое колбы тщательно перемешивают до полного растворения препарата. Объем в колбе доводят до метки гексаном. Из полученного раствора бифентрина с концентрацией 100 мкг/куб. см готовят рабочие растворы с концентрациями 1 мкг/куб. см, 0,5 мкг/куб. см, 0,25 мкг/куб. см, 0,05 мкг/куб. см методом последовательного разбавления.

Для внесения в образец при определении полноты извлечения используют стандартный раствор бифентрина 0,01 мг/куб. см, разбавленный гексаном до соответствующей концентрации.

2.5.4. Построение градуировочного графика

Для построения градуировочного графика (площадь пика - концентрация бифентрина в растворе) в хроматограф вводят по 1 куб. мм градуировочных растворов (не менее 3-х параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4-х точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют высоты или площади пиков и строят график зависимости среднего значения высоты (площади) пика от концентрации бифентрина в градуировочном растворе (мкг/куб. см).

Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.

Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:

2.5.5. Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта

В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1 см помещают тампон из стекловаты, вносят суспензию 8 г силикагеля в 40 куб. см гексана и насыпают 2,5 г безводного сернокислого натрия, дают растворителю стечь до верхнего края сорбента. Колонку промывают 40 куб. см гексана со скоростью 1 - 2 капли в секунду, после чего она готова к работе.

2.5.6. Проверка хроматографического поведения бифентрина на колонке с силикагелем

В подготовленную колонку вносят 1 куб. см стандартного раствора бифентрина с концентрацией 0,1 мкг/куб. см, раствору дают впитаться, после чего через колонку пропускают 20 куб. см гексана, элюат отбрасывают. Затем пропускают 80 куб. см смеси гексан:этилацетат (95:5), отбирая фракции по 10 куб. см каждая, упаривают досуха, остаток растворяют в 1 куб. см гексана и анализируют на содержание бифентрина по п. 2.6.8. Фракции, содержащие бифентрин, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 1 куб. см гексана и анализируют по п. 2.6.8. Рассчитывают содержание бифентрина в элюате, определяя полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для этого объем элюента.

Примечание: профиль вымывания бифентрина может меняться при использовании новой партии сорбента.

2.5.7. Подготовка приборов и средств измерения

Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями технической документации.

2.6.1. Экстракция бифентрина из семян рапса

Берут навеску семян рапса 10 г, измельчают их в фарфоровой ступке и количественно переносят в коническую колбу на 300 куб. см, добавляют 100 куб. см 80%-ного водного ацетонитрила и экстрагируют бифентрин на ультразвуковой бане в течение 5 минут. Экстракцию повторяют дважды порциями по 50 куб. см. Объединенный экстракт фильтруют через бумажный фильтр "красная лента" в чистую колбу на 250 куб. см, фильтр обмывают дважды 20 куб. см водного ацетонитрила. Фильтрат переносят в делительную воронку на 500 куб. см, добавляют 30 куб. см гексана и встряхивают воронку в течение 2 - 3 мин. После разделения фаз гексан отбрасывают, ацетонитрильный слой возвращают в делительную воронку и повторяют промывку гексаном дважды порциями по 30 куб. см. Водно-ацетонитрильный экстракт переносят в колбу-концентратор объемом 250 мл и упаривают на роторном испарителе при температуре 50 - 60 °C до водного остатка. Водный остаток переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см, колбу обмывают 30 куб. см 10%-ного хлористого натрия и смыв добавляют к водному остатку. Затем в делительную воронку добавляют 50 куб. см дихлорметана, встряхивают 2 - 3 мин. и оставляют до полного разделения фаз. Органическую фазу фильтруют в колбу-концентратор через фильтр "красная лента" со слоем безводного сернокислого натрия. Экстракцию бифентрина из водной фазы повторяют дважды порциями дихлорметана по 30 куб. см. Объединенный экстракт упаривают на роторном испарителе при температуре не выше 40 °C до сухого остатка. Сухой остаток растворяют в 1 куб. см гексана и 1 куб. мм вводят в испаритель хроматографа. При наличии на хроматограмме пиков коэкстрактивных веществ, мешающих определению бифентрина, проводят очистку по пункту 2.6.3.

2.6.2. Экстракция бифентрина из масла рапса

Навеску масла 10 г растворяют в 100 куб. см гексана в плоскодонной колбе объемом 250 куб. см в ультразвуковой ванне в течение 5 мин. и оставляют на час. Затем экстракт количественно переносят в делительную воронку объемом 250 куб. см, добавляют 100 куб. см ацетонитрила и встряхивают воронку в течение 2 - 3 мин. После разделения фаз ацетонитрильный слой собирают, пропуская через фильтр "красная лента" со слоем безводного сульфата натрия в мерный цилиндр на 250 куб. см. Экстракцию ацетонитрилом повторяют дважды порциями по 50 куб. см. Объединенный экстракт переносят в чистую делительную воронку на 250 куб. см и ацетонитрильный слой трижды промывают гексаном порциями по 15 - 20 куб. см. Гексановый слой отбрасывают, а промытый ацетонитрильный экстракт упаривают до сухого остатка на роторном испарителе при температуре не выше 50 - 60 °C.

Сухой остаток растворяют в 1 куб. см гексана и хроматографируют. При наличии мешающих примесей дополнительную очистку проводят на колонке с силикагелем по п. 2.6.3.

2.6.3. Очистка экстрактов на колонке с силикагелем

1 куб. см полученного по п. п. 2.6.1 - 2.6.2 экстракта количественно переносят в кондиционированную хроматографическую колонку (п. 2.5.5), дают впитаться, после чего через колонку пропускают 20 куб. см гексана, элюат отбрасывают. Затем колонку промывают 30 куб. см смеси гексан:этилацетат (95:5). Первые 20 куб. см элюата отбрасывают, следующие 10 куб. см собирают в колбу-концентратор на 50 куб. см, выпаривают досуха на роторном испарителе, растворяют в 1 куб. см гексана и хроматографируют.

2.6.4. Условия хроматографирования

Хроматограф газовый "Кристалл 2000М" с ДЭЗ.

Колонка капиллярная кварцевая длиной 20 м, внутренним диаметром 0,53 мм с неподвижной фазой НР-1, толщина слоя 1,25 мкм.

Температура колонки программируется от 200 °C (10 сек.) до 250 °C со скоростью 10 °C/мин., температура испарителя 250 °C, детектора 300 °C.

Объем вводимой пробы 1 мкл. Время удерживания бифентрина 4 мин. 50 с +/- 5 с.

Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки, содержание бифентрина в пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;

P - навеска анализируемого образца, г;

C - концентрация бифентрина в стандартном растворе, мкг/куб. см.

Содержание остаточных количеств бифентрина в анализируемом образце вычисляют как среднее из 2-х параллельных определений.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор бифентрина 1 мкг/куб. см, разбавляют.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

дельта - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание вещества в пробе "менее нижней границы определения" (например: менее 0,01 <*>).

--------------------------------

<*> 0,01 мг/кг - предел обнаружения в семенах и масле рапса.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

5.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

5.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.

5.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

При проведении работы необходимо соблюдать требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1.005-88).

При выполнении измерений с использованием газового хроматографа и работе с электроустановками соблюдать правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкциями по эксплуатации приборов.

Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91.

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом газожидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 5.

ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений, Санкт-Петербург.