"МУК 4.1.2459-09. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств дикамбы в кукурузном масле методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 02.02.2009)

1. Разработаны сотрудниками Всероссийского НИИ защиты растений.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 25 декабря 2008 г. N 3).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 2 февраля 2009 г.

4. Введены в действие с 29 апреля 2009 г.

5. Введены впервые.

Настоящие Методические указания устанавливают метод капиллярной газожидкостной хроматографии для определения остаточных количеств дикамбы в масле кукурузы в диапазоне концентраций 0,005 - 0,04 мг/кг.

Название по номенклатуре ICO: дикамба.

Название по номенклатуре IUPAC: 3,6-dichloro-o-anisic acid.

Структурная формула (не приводится).

Мол. масса: 221,0.

Химически чистое вещество: кристаллы белого цвета.

Температура плавления: 114 - 116 °С.

Растворимость (г/кг) при 25 °С: в воде - 6,5, этаноле - 922, ацетоне - 810, дихлорметане - 260, толуоле - 130.

В обычных условиях дикамба и ее препараты устойчивы, с основаниями дикамба образует хорошо растворимые в воде соли.

Краткая токсикологическая характеристика

Гигиенические нормативы: ПДК в воде водоемов - 0,02 мг/куб. дм, ПДК в почве - 0,25 мг/кг, МДУ в зерне хлебных злаков, кукурузе, просе - не допускается.

Область применения препарата

Гербицид для борьбы с однолетними и некоторыми многолетними двудольными сорными растениями на посевах зерновых культур.

Метод основан на извлечении остаточных количеств дикамбы из анализируемого объекта органическими растворителями, проведении очистки экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и метилировании дикамбы диазометаном. Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки с применением капиллярной газожидкостной хроматографии и использованием детектора электронного захвата (ДЭЗ).

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.

Метод специфичен в присутствии других применяемых пестицидов. Проведение очистки экстрактов, а также использование капиллярной колонки и селективного детектора позволяет устранять влияние коэкстрактивных веществ на результаты анализа.

1.6.1. Подготовка и очистка растворителей. Перед началом работы рекомендуется проверить чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 куб. см растворителя упаривают в ротационном вакуумном испарителе при температуре +40 °С до объема 1,0 см и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку растворителей производят в соответствии с общепринятыми методиками.

1.6.2. Приготовление стандартных растворов. Основной раствор дикамбы с содержанием 100 мкг/куб. см готовят растворением в ацетоне 0,01 г аналитического стандарта дикамбы в мерной колбе емкостью 100 куб. см. Раствор хранят в холодильнике при температуре +4 - 6 °С не более трех месяцев.

Рабочие стандартные растворы с концентрациями 0,8; 0,4; 0,2 и 0,1 мкг/куб. см готовят из основного стандартного раствора дикамбы последовательным разбавлением ацетоном. Рабочие растворы хранят в холодильнике при температуре +4 - 6 °С не более месяца. В модельных опытах при изучении полноты извлечения дикамбы используют ацетоновые растворы стандартного вещества.

Для приготовления калибровочных растворов в мерные пробирки со шлифом емкостью 5,0 куб. см вносят по 1,0 куб. см рабочих растворов дикамбы с концентрациями 0,1; 0,2; 0,4 и 0,8 мкг/куб. см. Растворитель в пробирках упаривают в токе азота досуха и проводят метилирование дикамбы по п. 1.6.3.

1.6.3. Метилирование дикамбы. В пробирки с сухим остатком добавляют по 2,0 куб. см свежеприготовленного по п. 1.6.5 эфирного раствора диазометана. Пробирки закрывают пробками и ставят на 12 - 14 ч (на ночь) в холодильник с температурой +4 - 6 °С. После этого этиловый эфир в пробирках упаривают в токе азота досуха и сухой остаток растворяют в 1,0 куб. см изооктана.

1.6.4. Построение калибровочного графика. Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа (п. 1.8.3) вводят по 1 мкл приготовленных по п. 1.6.3 растворов, содержащих дикамбу (в виде производного) в концентрациях 0,1; 0,2; 0,4 и 0,8 мкг/куб. см. Осуществляют не менее трех параллельных измерений и находят среднее значение высоты (площади) хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости высоты (площади) хроматографического пика в мм (кв. мм) от концентрации дикамбы в рабочем растворе в мкг/куб. см.

1.6.5. Приготовление эфирного раствора диазометана (из расчета метилирования экстрактов 2-х проб). N-Нитрозометилмочевину массой 0,5 г помещают во флакон емкостью 2,0 - 3,0 куб. см и герметизируют резиновой пробкой и колпачком с помощью приспособления для обжима колпачков на флаконах. Этиловый эфир объемом 4,0 куб. см вносят в другой флакон емкостью 5,0 куб. см, герметизируют резиновой пробкой и колпачком и охлаждают в морозильной камере холодильника в течение 30 мин.

После этого флаконы через предварительно проколотые пробки соединяют гибкой тефлоновой трубкой (внутр. диам. ~ 1,5 - 2,0 мм), одним концом погружая ее в этиловый эфир на всю глубину (флакон с охлажденным этиловым эфиром обязательно должен еще иметь свободный выход в атмосферу). Во флакон с нитрозометилмочевиной, используя шприц с тонкой иглой и прокалывая пробку, добавляют по каплям по стенке 50%-ный водный раствор гидроокиси калия (~ 0,3 куб. см) до прекращения реакции. Этиловый эфир при насыщении диазометаном окрашивается в ярко-желтый цвет.

Внимание! Приготовление эфирного раствора диазометана и процедуру метилирования необходимо проводить в работающем вытяжном шкафу.

Отбор проб для анализа проводят в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" N 2051-79 от 21.08.1979, а также в соответствии с ГОСТ 8808-91 "Масло кукурузное, ТУ".

Для исследовательских целей допускается получение масла в лаборатории из проб измельченного зерна методом экстракции органическим растворителем при температуре не выше +40 °С. Пробы масла хранят при +4 - 6 °С в закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре не более 30 суток.

1.8.1. Экстракция дикамбы. Аналитическую пробу масла массой 10,0 +/- 0,1 г растворяют в 50 куб. см н-гексана (насыщенного ацетонитрилом) в плоскодонной колбе емкостью 100 куб. см и после этого гексановый раствор масла переносят в делительную воронку емкостью 250 куб. см. Колбу промывают 50 куб. см ацетонитрила (насыщенного н-гексаном) и переносят его в воронку. Содержимое воронки встряхивают в течение 2 мин. После 5-минутного отстаивания нижний ацетонитрильный слой сливают в колбу-концентратор емкостью 250 куб. см. Плоскодонную колбу промывают 25 куб. см ацетонитрила (насыщенного н-гексаном) и также переносят в воронку (250 куб. см). Содержимое воронки встряхивают в течение 2 мин., отстаивают 5 мин. и нижний ацетонитрильный слой объединяют с предыдущим. Верхний гексановый слой отбрасывают.

Колбу-концентратор с объединенным ацетонитрильным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворитель досуха при температуре 50 °С. Сухой остаток растворяют в 20 куб. см ацетона. К раствору добавляют 200 куб. см дистиллированной воды, 2,0 куб. см 5,0%-ного водного раствора серной кислоты и содержимое колбы перемешивают встряхиванием. Колбу-концентратор помещают в холодильник и выдерживают при температуре +4 - 6 °С в течение 4 - 5 ч. После этого содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр белая лента в делительную воронку емкостью 500 куб. см. В воронку добавляют 10%-ный водный раствор гидроокиси калия до pH 9 - 10, 10 куб. см насыщенного водного раствора хлористого натрия и, после перемешивания, 75 куб. см дихлорметана. Содержимое воронки энергично встряхивают в течение 2 мин. После 15-минутного отстаивания нижний дихлорметановый слой сливают и отбрасывают. Процедуру очистки экстракта с использованием 50 куб. см дихлорметана повторяют. Далее в воронку добавляют 40 куб. см насыщенного водного раствора хлористого натрия и после перемешивания 75 куб. см н-гексана. Содержимое воронки энергично встряхивают в течение 2 мин. После 5-минутного отстаивания нижний ацетоно-водный слой сливают в химический стакан емкостью 500 куб. см, а верхний гексановый слой сливают и отбрасывают.

Водный раствор пробы, находящийся в химическом стакане, подкисляют концентрированной серной кислотой до pH 2,0 и переносят в чистую делительную воронку емкостью 500 куб. см. В воронку добавляют 75 куб. см смеси гексан - этиловый эфир (50:50) и встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения слоев нижний водный слой сливают в химический стакан, а верхний гексано-эфирный слой фильтруют через фильтр синяя лента со слоем безводного сульфата натрия (толщина слоя ~1,0 - 1,5 см) в колбу-концентратор емкостью 250 куб. см. Экстрагирование и фильтрование повторяют с использованием 50 куб. см смеси гексан - этиловый эфир (50:50). Нижний водный слой отбрасывают.

Колбу-концентратор с объединенным гексано-эфирным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворители при температуре +40 °С до объема 3 - 5 куб. см. Остаток экстракта количественно переносят в мерную пробирку со шлифом емкостью 5,0 куб. см и упаривают растворители в токе азота досуха при температуре +40 °С.

1.8.2. Метилирование дикамбы. В пробирку с сухим остатком добавляют 2,0 куб. см свежеприготовленного по п. 1.6.5 эфирного раствора диазометана. Пробирку закрывают пробкой и ставят на 12 - 14 ч (на ночь) в холодильник с температурой +4 - 6 °С. После этого этиловый эфир в пробирках упаривают в токе азота досуха и сухой остаток растворяют в 0,5 куб. см изооктана.

Газохроматографический анализ на содержание дикамбы проводят по п. 1.8.3.

1.8.3. Условия хроматографирования. Газовый хроматограф с ДЭЗ.

Колонка хроматографическая кварцевая капиллярная длиной 30 м, внутренним диаметром 0,32 мм, с неподвижной фазой ВР-50 (типа OV-17), толщина слоя 0,5 мкм.

Температура колонки: программирование от 80 °С (1 мин.) до 280 °С (25 мин.) со скоростью 8,0 °С/мин.

Температура испарителя: 240 °С.

Температура детектора: 300 °С.

Расход газов: газа-носителя (азот в/ч) - 2,0 куб. см/мин., дополнительного газа (азот в/ч) к ДЭЗ - 40 куб. см/мин.

Количество вводимой в хроматограф аликвоты: 1 мкл.

Время удерживания дикамбы (в виде производного): 14,75 +/- 0,05 мин.

Предел детектирования: 0,05 нг.

Линейный диапазон детектирования: 0,1 - 0,8 нг.

1.8.4. Обработка результатов анализа. Содержание дикамбы рассчитывают методом внешнего стандарта по формуле:

где дельта - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание вещества в пробе менее 0,005 мг/кг".

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

При проведении работы необходимо соблюдать требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами, ГОСТ 12.1.005-88.

При выполнении измерений с использованием хроматографа и работе с электроустановками соблюдать правила электробезопасности в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.019-79 и инструкциями по эксплуатации приборов.

Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91.

Необходимо соблюдать общепринятые правила техники безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами, а также требования, изложенные в документации к приборам.

Измерения в соответствии с настоящей Методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом газожидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 5.

ГНУ ВНИИ защиты растений.