"МУК 4.1.2247-07. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение массовых концентраций N-[[(гексагидроциклопента[с]пиррол-2(1Н)-ил)амино]карбонил]-4-метилбензенсульфонамида (ГЛИКЛАЗИД) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 17.08.2007)

1. Подготовлены: ГУ НИИ медицины труда РАМН.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол N 2 от 21.06.2007).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко.

4. Введены впервые.

Сборник методических указаний "Измерение концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны" (выпуск 49) разработан с целью обеспечения контроля соответствия фактических концентраций вредных веществ их предельно допустимым концентрациям (ПДК) и ориентировочным безопасным уровням воздействия (ОБУВ) и являются обязательными при осуществлении санитарного контроля.

Включенные в данный сборник методические указания по контролю вредных веществ в воздухе рабочей зоны разработаны и подготовлены в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 ССБТ "Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования", ГОСТ Р 8.563-96 "Государственная система обеспечения единства измерений. Методики выполнения измерений", ГОСТ Р ИСО 5725 (части 1 - 6) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

Методики выполнены с использованием современных методов исследования, метрологически аттестованы и дают возможность контролировать концентрации химических веществ на уровне и ниже их ПДК и ОБУВ в воздухе рабочей зоны, установленных в гигиенических нормативах ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны" и ГН 2.2.5.1314-03 "Ориентировочные безопасные уровни воздействия (ОБУВ) вредных веществ в воздухе рабочей зоны" и дополнениях к ним.

Методические указания по измерению массовых концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны предназначены для центров Госсанэпиднадзора, санитарных лабораторий промышленных предприятий при осуществлении контроля за содержанием вредных веществ в воздухе рабочей зоны, а также научно-исследовательских институтов и других заинтересованных министерств и ведомств.

Настоящие Методические указания устанавливают методику количественного химического анализа воздуха рабочей зоны для определения в нем гликлазида методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в диапазоне массовых концентраций 0,1 - 1,0 мг/куб. м.

2.1. Структурная формула (не приводится).

2.3. Молекулярная масса: 323,4.

2.4. Регистрационный номер CAS: 21187-98-4.

2.5. Физико-химические свойства

Гликлазид - порошок белого цвета без запаха, температура плавления 168 °С, нерастворим в воде, этиловом спирте 96%, хорошо растворим в ацетонитриле, ацетоне, хлористом метилене.

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

2.6. Токсикологическая характеристика

Гликлазид - малоопасное вещество, при поступлении внутрь не оказывает раздражающего действия на слизистые оболочки глаза и кожу, не проявляет способности к резорбции через кожу, обладает слабыми кумулятивными свойствами, оказывает специфическое влияние на углеводный обмен.

Ориентировочный безопасный уровень воздействия (ОБУВ) гликлазида в воздухе рабочей зоны 0,2 мг/куб. м.

При соблюдении всех регламентных условий и проведении анализа в точном соответствии с прописью методика обеспечивает выполнение измерений массовых концентраций гликлазида с метрологическими характеристиками, не превышающими значений, представленных в табл. 1 (при доверительной вероятности P = 0,95).

Измерение массовой концентрации гликлазида выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с УФ-детектированием при длине волны 230 нм.

Отбор проб проводят с концентрированием на бумажный обеззоленный фильтр "синяя лента".

Нижний предел измерения содержания гликлазида в анализируемом объеме раствора пробы - 0,02 мкг.

Нижний предел измерения массовой концентрации гликлазида в воздухе 0,1 мг/куб. м (при отборе 100 куб. дм воздуха).

Метод специфичен в условиях приготовления препаративных форм на основе гликлазида. Измерению не мешают сопутствующие вещества: мальтодекстрин, магния стеарат, крахмал, аэросил, гидрофосфат кальция, гидроксипропилметилцеллюлоза.

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы, растворы.

Допускается применение других средств измерения, вспомогательных устройств, реактивов и материалов с техническими и метрологическими характеристиками не хуже приведенных в разделе.

6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.

6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ должны соблюдаться требования противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и необходимо иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-90.

6.3. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица, имеющие высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой хроматографического анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы оперативного контроля при проведении процедур контроля погрешности анализа.

8.1. Приготовление растворов и подготовку проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С, атмосферном давлении 84 - 106 кПа и относительной влажности воздуха не более 80%.

8.2. Выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: подготовку посуды, приготовление растворов, подготовку жидкостного хроматографа, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

Подготовка посуды проводится общепринятым методом с использованием хромовой смеси.

9.1.1. Основной стандартный раствор гликлазида с массовой концентрацией 1000 мкг/куб. см готовят растворением 0,0250 г гликлазида в ацетонитриле в мерной колбе вместимостью 25 куб. см. Раствор устойчив в течение недели при хранении в холодильнике.

9.1.2. Рабочий стандартный раствор гликлазида N 1 с массовой концентрацией 100 мкг/куб. см готовят соответствующим разведением основного стандартного раствора гликлазида ацетонитрилом.

Для этого берут 2,5 куб. см основного стандартного раствора гликлазида, помещают в мерную колбу вместимостью 25 куб. см и доводят до метки ацетонитрилом. Раствор устойчив в течение недели при хранении в холодильнике.

9.1.3. Приготовление элюента:

В мерной колбе вместимостью 100 куб. см смешивают 40 куб. см ацетонитрила и 60 куб. см бидистиллированной воды.

Элюент хранят в герметичной стеклянной посуде в холодильнике в течение месяца.

Подготовку жидкостного хроматографа проводят в соответствии с руководством по его эксплуатации.

Контроль качества разделительной колонки проводится не реже 1 раза в квартал по стандартному раствору антрацена в ацетонитриле с концентрацией 0,01 мкг/куб. см путем его анализа при длине волны 250 нм с элюентом ацетонитрил:бидистиллированная вода в соотношении 70:30 (об.). Скорость потока элюента 0,8 куб. см/мин. Эффективность колонки, рассчитанная при этих условиях, должна быть не менее 4000 теоретических тарелок.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пиков (приборные единицы) от содержания гликлазида в градуировочном объеме раствора, устанавливают по методу абсолютной калибровки по пяти сериям растворов. Каждую серию, состоящую из шести градуировочных растворов и холостой пробы, готовят в мерных колбах вместимостью 25 куб. см. Для этого в соответствии с таблицей N 2 в каждую колбу вносят соответствующий объем рабочего стандартного раствора гликлазида N 1 с концентрацией 100 мкг/куб. см и доводят объем раствора до метки ацетонитрилом.

Градуировочные растворы устойчивы в течение трех суток.

Инжектируют в хроматограф по 0,02 куб. см каждого из градуировочных растворов.

По полученным данным строят градуировочную характеристику зависимости площади пика (приборные единицы) от содержания гликлазида в хроматографируемом объеме (мкг).

Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб.

За время удерживания гликлазида принимается время удерживания пика стандарта гликлазида, полученного при анализе стандартного раствора, с погрешностью +/- 5%.

Градуировку во всем диапазоне измеряемых концентраций проводят не реже 1 раза в квартал, а также при смене колонки и/или реактивов; после проведения ремонта или поверки прибора; после длительного простоя хроматографа (2 недели и более); при изменении эффективности хроматографической системы и/или чувствительности детектора.

Отбор проб следует проводить с учетом требований ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны" и Руководства Р 2.2.2006-05 (прилож. 9, обязательное) "Общие методические требования к организации и проведению контроля содержания вредных веществ в воздухе рабочей зоны", п. 2 контроль соответствия максимальным ПДК.

Воздух с объемным расходом 10 куб. дм/мин. аспирируют через фильтр "синяя лента", помещенный в фильтродержатель.

Для измерения 1/2 ОБУВ гликлазида необходимо отобрать 100 куб. дм воздуха. Отобранные пробы можно хранить в бюксах в холодильнике в течение недели.

После отбора пробы фильтр помещают в химический бюкс и экстрагируют 5,0 куб. см ацетонитрила, помешивая при этом стеклянной палочкой в течение 5 - 7 минут, затем фильтр тщательно отжимают, раствор сливают в другой бюкс. Фильтр повторно экстрагируют 5,0 куб. см ацетонитрила, снова тщательно отжимают и удаляют. Экстракты последовательно фильтруют на химической воронке через бумажный фильтр "белая лента". Хроматографический анализ выполняют в тех же условиях, что и хроматографирование градуировочных растворов.

Регистрируют не менее двух хроматограмм для каждой пробы, соблюдая все условия, требуемые для градуировки хроматографической системы. Степень десорбции гликлазида с фильтра 97%.

Количественное определение содержания гликлазида (в мкг) в анализируемом объеме раствора пробы проводят по предварительно построенной градуировочной характеристике.

Результат количественного химического анализа представляют в виде:

где:

С - значение результатов измерения массовой концентрации гликлазида, мг/куб. м;

+/- U - границы расширенной неопределенности (точности) результата измерения по таблице 1, мг/куб. м.

В случае если полученный результат анализа ниже нижней (выше верхней) границы диапазона измерения, то результат следует указать: массовая концентрация гликлазида менее 0,1 мг/куб. м (более 1,0 мг/куб. м).

При проведении контроля правильности следует использовать концентрации стандартных растворов, которые входят в серию растворов, используемых при построении градуировочной характеристики.

При отрицательном результате контроля правильности выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и устраняют их.

Контроль повторяемости проводят при каждом измерении.

Образцом для контроля повторяемости служит экстракт реальной пробы воздуха рабочей зоны, полученный при обработке фильтра.

Выполняют два единичных измерения в условиях повторяемости (измерение идентичных образцов выполняет один и тот же оператор на одном экземпляре прибора практически в одно и то же время и т.д.).

При превышении предела повторяемости для трех измерений в качестве результата измерения фиксируется медиана трех измерений, т.е. выбирается второе по значению измерение в ряду расположенных по возрастанию значений.

Образцом для контроля прецизионности служит экстракт реальной пробы воздуха рабочей зоны, полученный при обработке фильтра.

Выполняют два измерения в условиях промежуточной прецизионности с участием одной лаборатории. Пробы анализируют в точном соответствии с прописью методики, максимально варьируя условия проведения анализа (время между измерениями, оборудование и его калибровка, партии реактивов, оператор и др.) при соблюдении вышеуказанных условий.

При отрицательном результате контроля прецизионности выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и устраняют их.

Для проведения серии анализов из 6 проб требуется 2 ч 30 мин.

Методические указания разработаны ОАО "Всероссийский научный центр по безопасности биологически активных веществ" ("ВНЦ БАВ").