"МУК 4.1.2480-09. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств дорамектина в пищевых продуктах. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 02.02.2009)

1. Разработаны ГУ НИИ питания РАМН.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 25 декабря 2008 г. N 3).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 2 февраля 2009 года.

4. Введены в действие с момента утверждения.

5. Введены впервые.

Настоящие методические указания устанавливают методику определения дорамектина в мясе сельскохозяйственных животных и продуктах его переработки методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

Предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов, находящихся в обращении на территории Российской Федерации, в т.ч. импортируемых в Российскую Федерацию.

Методические указания могут быть использованы другими лабораторными центрами, осуществляющими контроль качества и безопасности пищевых продуктов и аккредитованными в установленном порядке.

Общепринятое название: дорамектин, ветранал.

Название по номенклатуре ИЮПАК: 25-циклогексил-5-O-диметил-25-ди(1-метил-пропил)авермектин. CAS: 117704-25-3.

Структурная формула (не приводится).

Мол. масса: 899,11.

Физические свойства: белый порошок, без запаха. Хорошо растворим в ацетонитриле.

Торговая марка: эндектоцид "Дектомакс" ("Dectomax").

Фирма-производитель: "Pfizer".

Форма выпуска: 1% раствор дорамектина в растительном масле.

Область применения. "Дектомакс" используется в качестве противопаразитарного средства широкого спектра действия для лечения и профилактики заболеваний крупного рогатого скота, овец и свиней. Средство предназначено для парентерального введения крупному рогатому скоту.

2.1.2. Метрологические характеристики метода. При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Хроматографическая система, состоящая из жидкостного хроматографа высокого давления, дегазатора, спектрофлюориметрического детектора и системы для сбора и обработки хроматографических данных.

Допускается использование приборов и посуды с метрологическими характеристиками и реактивов квалификацией не ниже указанных в МУК.

Отбор проб производится в соответствии с ГОСТ Р 51447-99 "Мясо и мясные продукты. Методы отбора проб". Для длительного хранения образцы продуктов замораживаются и хранятся при -18 °C до анализа.

Перед анализом образцы тщательно измельчают в гомогенизаторе или блендере.

2.5.1. Приготовление подвижной фазы и кондиционирование хроматографической колонки. В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 530 куб. см ацетонитрила, 270 куб. см тетрагидрофурана, 200 куб. см дистиллированной воды, тщательно перемешивают и выдерживают до комнатной температуры. Раствор дегазируют. Хроматографическую колонку кондиционируют до минимального дрейфа базовой линии.

2.5.2. Приготовление стандартных растворов дорамектина. 0,050 +/- 0,001 г кристаллического дорамектина количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 куб. см, растворяют в 50 куб. см ацетонитрила, доводят ацетонитрилом до метки и тщательно перемешивают. Получают основной стандартный раствор в ацетонитриле с массовой долей дорамектина 0,5 мг/куб. см.

Для построения градуировочной кривой методом последовательного разбавления ацетонитрилом готовят рабочие стандартные растворы с содержанием дорамектина 0,100, 0,010, 0,001 и 0,0001 мг/куб. см. Отбирают аликвоты стандартных растворов, упаривают их на ротационном испарителе при температуре не более 40 - 45 °C. Дорамектин переводят во флюоресцирующее производное, хроматографируют в трех повторностях (объем пробы 10 куб. мм). Строят график зависимости средних площадей пиков от концентрации дорамектина в мг/куб. см.

Основной и рабочие стандартные растворы дорамектина хранят в стеклянной посуде (мерной колбе) с притертой пробкой в прохладном месте (при температуре около 4 °C). Сроки годности основного раствора 12 месяцев, рабочих - 2 месяца.

2.5.3. Подготовка образца. Измельченный образец, массой 2,5 г, помещают в 20 куб. см ацетонитрила, закрывают емкость пробкой или парафильмом, помещают в теплую (40 - 50 °C) ультразвуковую баню на 20 - 25 мин. Затем охлаждают, переносят в центрифужную пробирку и центрифугируют при 5 тыс. об./мин. в течение 5 мин. Супернатант декантируют в делительную воронку и обезжиривают двумя порциями гексана по 10 куб. см. Ацетонитрильный экстракт дорамектина собирают в круглодонную колбу и упаривают на ротационном испарителе при температуре не выше 40 - 45 °C.

2.5.4. Получение флуоресцирующего производного дорамектина

А) Приготовление раствора аммиака в метаноле.

В виалу (крышка герметичная с резиновой вкладкой, которую можно проколоть иглой) наливают 2 - 3 куб. см метанола, крышку завинчивают. На пластиковый шприц для инъекций надевают иглу, вынимают поршень. Внутрь шприца помещают 4 - 6 гранул сухого гидроксида натрия, наливают водный аммиак и вставляют поршень. Шприц переворачивают вверх иглой, выделяющийся газ вытесняет из иглы воду, на иглу надевают виалу так, чтобы аммиак барботировал через метанол. Поршень шприца придерживают, насыщение происходит в течение 0,5 - 1 мин. Перед каждым анализом рекомендуется готовить свежий раствор аммиака в метаноле.

Б) Получение флуоресцирующего производного дорамектина.

Условия хроматографического анализа.

Хроматографическая колонка: колонка для ВЭЖХ, заполненная октадецилсиликагелем (например Phenomenex Luna C18, 250 х 4,5 мм, 5 мкм).

Подвижная фаза: ацетонитрил - 53%, тетрагидрофуран - 27%, вода - 20% об.

Скорость подачи элюента: 1,0 куб. см/мин.

Объем вводимой пробы 5 - 20 куб. мм. Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,1 - 125 нг дорамектина.

Абсолютное время удерживания дорамектина в приведенных условиях - 14,5 +/- 0,1 мин.

Хроматограмма образца сала, добавка дорамектина составляет 10 мкг/кг.

Каждую анализируемую пробу вводят 3 раза, вычисляют среднюю площадь пика, соответствующего дорамектину.

2.7.1. Калибровка хроматографа и построение градуировочной кривой. Отбирают аликвоты стандартных растворов, упаривают их на ротационном испарителе при температуре не более 40 - 45 °C. Дорамектин переводят во флюоресцирующее производное, хроматографируют в трех повторностях (объем пробы 10 куб. мм) (п. 2.6). Строят график зависимости средних площадей пиков от концентрации дорамектина в мг/куб. см.

Градуировку во всем диапазоне измеряемых концентраций проводят при смене колонки и/или предколонки; при замене стандартного образца и/или реактивов после проведения ремонта; после длительного простоя хроматографа (2 недели и более).

2.7.2. Оформление результатов. Содержание дорамектина можно рассчитать по градуировочному графику или методом внешнего стандарта. В последнем случае для расчетов используют стандартный раствор, площадь пика которого наиболее близка к площади пика дорамектина в образце. Для расчета по методу внешнего стандарта используют формулу:

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

дельта - предел относительной погрешности (табл. 1), в %.

При невыполнении условия выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

Работу по указанной методике могут исполнять высококвалифицированные специалисты в области газожидкостной хроматографии и санитарной химии. Исполнители должны быть проинструктированы об основных мерах техники безопасности при работе с веществами 1 - 2 класса опасности, органическими растворителями, а также с правилами безопасности при работе в химической лаборатории (п. 3).

Помещение лаборатории должно соответствовать санитарным правилам проектирования, оборудования, эксплуатации и содержания производственных и лабораторных помещений, предназначенных для проведения работ с веществами 1 - 2 класса опасности, органическими растворителями. Аналитическая лаборатория должна быть оснащена вентиляционной системой согласно ГОСТ 12.4.021.