"МУК 4.1.2681-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств пиклорама в семенах и масле рапса методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 02.08.2010)

1. Разработаны сотрудниками ГНУ Всероссийского НИИ защиты растений.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 10.06.2010 N 1).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 2 августа 2010 г.

4. Введены в действие с 1 октября 2010 г.

5. Введены впервые.

Настоящие методические указания устанавливают метод капиллярной газожидкостной хроматографии для определения в семенах и масле рапса массовой концентрации пиклорама в диапазоне концентраций 0,01 - 0,08 мг/кг.

Название действующего вещества по номенклатуре ICO: пиклорам.

Название по номенклатуре IUPAC: 4-amino-3,5,6-trichloropyridine-2-carboxylic acid.

Структурная формула (не приводится).

Молекулярная масса: 241,5.

Химически чистое вещество: кристаллы белого цвета.

Температура плавления: 190 °C (с разложением).

Растворимость при 25 °C (г/л): в воде - 0,43, ацетоне - 19,8, этаноле - 10,5, пропаноле - 5,5, дихлорметане - 0,6.

Гигиенические нормативы: ПДК в воде водоемов - 0,04 мг/куб. дм, ПДК в почве - 0,05 мг/кг. МДУ в кукурузе, зерне хлебных злаков - не допускается.

МДУ в семенах и масле рапса - 0,01 мг/кг.

Область применения: гербицид для борьбы с горчаком розовым и другими многолетними корнеотпрысковыми сорными растениями.

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений (таблица 1) для соответствующих диапазонов концентраций.

Метод основан на извлечении остаточных количеств пиклорама из анализируемого объекта органическими растворителями, проведении очистки экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и метилировании пиклорама диазометаном. Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки с применением капиллярной газожидкостной хроматографии и использованием детектора электронного захвата.

Метод специфичен в присутствии других применяемых пестицидов. Проведение очистки экстрактов, а также использование капиллярной колонки и селективного детектора позволяет устранять влияние коэкстрактивных веществ на результаты анализа.

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Допускается использование реактивов квалификацией не ниже указанных.

Допускается использование другого вспомогательного оборудования с техническими характеристиками не ниже указанных.

4.1. При проведении работы необходимо соблюдать правила техники безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1.005, ГОСТ 12.1.007). Организация обучения работников по безопасности труда (ГОСТ 12.0.004).

При выполнении измерений с использованием газового хроматографа и работе с электроустановками соблюдать правила электробезопасности в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.019 и инструкциями по эксплуатации приборов.

4.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности (ГОСТ 12.1.004) и иметь средства пожаротушения (ГОСТ 12.4.009). Содержание вредных веществ в воздухе лабораторного помещения не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны".

Измерения может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом капиллярной газожидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации газового хроматографа, освоивший данный метод и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.

При выполнении измерения выполняют следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха лабораторного помещения +20 +/- 5 °C и относительной влажности воздуха не более 80%;

- выполнение измерения на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Отбор проб для анализа проводят в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", N 2051-79 от 21.08.1979, а также в соответствии с ГОСТ 10852-86 "Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб".

Для исследовательских целей допускается получение в лаборатории масла из проб измельченных семян методом экстракции органическим растворителем при температуре не выше +40 °C. Пробы масла хранят при +4 - 6 °C в закрытой стеклянной таре не более 30 суток.

Капиллярную хроматографическую колонку устанавливают в газовый хроматограф и перед анализом кондиционируют при температуре +280 °C до установления нулевой линии.

Перед началом работы проверяют чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 куб. см растворителя упаривают в ротационном вакуумном испарителе при температуре +40 °C до объема 1,0 куб. см и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку растворителей производят в соответствии с общепринятыми методиками.

N-Нитрозометилмочевину массой (0,5 +/- 0,01) г помещают во флакон емкостью 2,0 - 3,0 куб. см и герметизируют резиновой пробкой и колпачком с помощью приспособления для обжима колпачков на флаконах. В другой флакон емкостью 5,0 куб. см вносят диэтиловый эфир объемом 4,0 куб. см, герметизируют резиновой пробкой и колпачком и охлаждают в морозильной камере холодильника в течение 30 минут.

После этого флаконы через предварительно проколотые пробки соединяют гибкой тефлоновой трубкой (внутр. диам. ~ 1,5 - 2,0 мм), одним концом погружая ее в диэтиловый эфир на всю глубину (флакон с охлажденным этиловым эфиром обязательно должен еще иметь свободный выход в атмосферу). Во флакон с нитрозометилмочевиной, используя шприц с тонкой иглой и прокалывая пробку, добавляют по каплям по стенке 50%-ный водный раствор гидроокиси калия (~ 0,3 куб. см) до прекращения реакции. Диэтиловый эфир при насыщении диазометаном окрашивается в ярко желтый цвет.

Внимание! Приготовление эфирного раствора диазометана и процедуру метилирования необходимо проводить в работающем вытяжном шкафу.

Основной раствор пиклорама с содержанием 100 мкг/куб. см готовят растворением в ацетоне 0,01 г аналитического стандарта пиклорама в мерной колбе емкостью 100 куб. см. Раствор хранят в холодильнике при температуре +4 - 6 °C не более трех месяцев.

Рабочие стандартные растворы с концентрациями 0,8, 0,4, 0,2 и 0,1 мкг/куб. см готовят из основного стандартного раствора пиклорама последовательным разбавлением ацетоном. Рабочие растворы хранят в холодильнике при температуре +4 - 6 °C не более месяца. В модельных опытах при изучении полноты извлечения пиклорама используют ацетоновые растворы стандартного вещества.

Для приготовления градуировочных растворов в мерные пробирки со шлифом объемом 5,0 куб. см вносят по 1,0 куб. см рабочих растворов пиклорама с концентрациями 0,1, 0,2, 0,4 и 0,8 мкг/куб. см. Растворитель в пробирках упаривают в токе азота досуха и проводят метилирование пиклорама по п. 8.4.1.

8.4.1. Метилирование пиклорама

В пробирки с сухим остатком добавляют по 2,0 куб. см свежеприготовленного по п. 8.3 эфирного раствора диазометана. Пробирки закрывают пробками и ставят на 12 - 14 часов (на ночь) в холодильник с температурой +4 - 6 °C. После этого диэтиловый эфир в пробирках упаривают в токе азота досуха и сухой остаток растворяют в 1,0 куб. см изооктана.

Для построения градуировочного графика в инжектор хроматографа (п. 9.3) вводят по 1 куб. мм приготовленных по п. 8.4 и п. 8.4.1 растворов, содержащих пиклорам (в виде производного) в концентрациях 0,1, 0,2, 0,4 и 0,8 мкг/куб. см. Осуществляют не менее трех параллельных измерений и находят среднее значение высоты (площади) хроматографического пика для каждой концентрации. Строят градуировочный график зависимости высоты (площади) хроматографического пика в мм (кв. мм) от концентрации пиклорама в градуировочном растворе в мкг/куб. см. Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, изменении условий хроматографирования, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.

Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:

Пробы семян рапса перед анализом рассыпают на бумаге или кальке и пинцетом удаляют включения. Семена измельчают на лабораторной мельнице и после перемешивания измельченной массы отбирают усредненную аналитическую пробу.

Аналитическую пробу семян массой 10 +/- 0,1 г помещают в плоскодонную колбу емкостью 300 куб. см, добавляют 150 куб. см смеси ацетон:дистиллированная вода (90:10), слегка встряхивают и подвергают обработке ультразвуком в УЗ-бане в течение 10 мин. при комнатной температуре. После этого содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр красная лента в колбу-концентратор емкостью 250 куб. см. Содержимое колбы с пробой промывают 50 куб. см смеси ацетон:дистиллированная вода (90:10), которую также фильтруют в колбу-концентратор.

При использовании аппарата для встряхивания в плоскодонную колбу с аналитической пробой вносят 150 куб. см смеси ацетон:дистиллированная вода (90:10) и встряхивают в течение 60 мин. После этого содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр красная лента в колбу-концентратор емкостью 250 куб. см. Содержимое колбы с пробой промывают 50 куб. см смеси ацетон:дистиллированная вода (90:10), которую также фильтруют в колбу-концентратор.

Колбу-концентратор с объединенным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворитель до объема 10 - 20 куб. см при температуре +40 °C. В колбу-концентратор добавляют 200 куб. см дистиллированной воды, 2,0 куб. см 5,0%-ного водного раствора серной кислоты и содержимое колбы перемешивают встряхиванием. Колбу-концентратор помещают в холодильник и выдерживают при температуре +4 - 6 °C в течение 4 - 5 часов. После этого содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр белая лента в делительную воронку емкостью 500 куб. см. В воронку добавляют 10%-ный водный раствор гидроокиси калия до pH 9 - 10, 30 куб. см насыщенного водного раствора хлористого натрия и после перемешивания 75 куб. см дихлорметана. Содержимое воронки энергично встряхивают в течение 2-х минут. После 15-минутного отстаивания нижний дихлорметановый слой сливают и отбрасывают. Процедуру очистки экстракта повторяют с использованием 50 куб. см дихлорметана. Далее в воронку добавляют 40 куб. см насыщенного водного раствора хлористого натрия и после перемешивания 75 куб. см н-гексана. Содержимое воронки энергично встряхивают в течение 2-х минут. После 5-минутного отстаивания нижний ацетоно-водный слой сливают в химический стакан емкостью 500 куб. см, а верхний гексановый слой сливают и отбрасывают.

Водный раствор пробы, находящийся в химическом стакане, подкисляют концентрированной серной кислотой до pH 2,0 и переносят в чистую делительную воронку емкостью 500 куб. см. В воронку добавляют 75 куб. см смеси гексан:диэтиловый эфир (50:50) и встряхивают в течение 2-х минут. После полного разделения слоев нижний водный слой сливают в химический стакан, а верхний гексано-эфирный слой фильтруют через фильтр синяя лента со слоем безводного сульфата натрия (толщина слоя ~ 1,0 - 1,5 см) в колбу-концентратор емкостью 250 куб. см. Экстрагирование и фильтрование повторяют с использованием 50 куб. см смеси гексан:диэтиловый эфир (50:50). Нижний водный слой отбрасывают.

Колбу-концентратор с объединенным гексано-эфирным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворители при температуре +40 °C до объема 3 - 5 куб. см. Остаток экстракта количественно переносят в мерную пробирку со шлифом емкостью 5,0 куб. см и упаривают растворители в токе азота досуха при температуре +40°.

Метилирование пиклорама проводят по п. 8.4.1, а газохроматографический анализ по п. 9.3.

Аналитическую пробу масла массой 10,0 +/- 0,1 г растворяют в 50 куб. см н-гексана (насыщенного ацетонитрилом) в плоскодонной колбе емкостью 100 куб. см и после этого гексановый раствор масла переносят в делительную воронку емкостью 250 куб. см. Колбу промывают 50 куб. см ацетонитрила (насыщенного н-гексаном) и переносят его в воронку. Содержимое воронки встряхивают в течение 2-х минут. После 5-минутного отстаивания нижний ацетонитрильный слой сливают в колбу-концентратор емкостью 250 куб. см. Плоскодонную колбу промывают 25 куб. см ацетонитрила (насыщенного н-гексаном) и также переносят в делительную воронку (250 куб. см). Содержимое воронки встряхивают в течение 2-х минут, отстаивают 5 минут и нижний ацетонитрильный слой объединяют в колбе-концентраторе с предыдущим. Верхний гексановый слой отбрасывают.

Колбу-концентратор с объединенным ацетонитрильным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворитель досуха при температуре +50 °C. Сухой остаток растворяют в 20 куб. см ацетона. К раствору добавляют 200 куб. см дистиллированной воды, 2,0 куб. см 5,0%-ного водного раствора серной кислоты и содержимое колбы перемешивают встряхиванием. Колбу-концентратор помещают в холодильник и выдерживают при температуре +4 - 6 °C в течение 4 - 5 часов. После этого содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр белая лента в делительную воронку емкостью 500 куб. см. В воронку добавляют 10%-ный водный раствор гидроокиси калия до pH 9 - 10, 30 куб. см насыщенного водного раствора хлористого натрия и, после перемешивания, 75 куб. см дихлорметана. Содержимое воронки энергично встряхивают в течение 2-х минут. После 15-минутного отстаивания нижний дихлорметановый слой сливают и отбрасывают. Процедуру очистки экстракта повторяют с использованием 50 куб. см дихлорметана. Далее в воронку добавляют 40 куб. см насыщенного водного раствора хлористого натрия и, после перемешивания, 75 куб. см н-гексана. Содержимое воронки энергично встряхивают в течение 2-х минут. После 5-минутного отстаивания нижний ацетоно-водный слой сливают в химический стакан емкостью 500 куб. см, а верхний гексановый слой сливают и отбрасывают.

Водный раствор пробы, находящийся в химическом стакане, подкисляют концентрированной серной кислотой до pH 2,0 и переносят в чистую делительную воронку емкостью 500 куб. см. В воронку добавляют 75 куб. см смеси гексан:диэтиловый эфир (50:50) и встряхивают в течение 2-х минут. После полного разделения слоев нижний водный слой сливают в химический стакан, а верхний гексано-эфирный слой фильтруют через фильтр синяя лента со слоем безводного сульфата натрия (толщина слоя ~ 1,0 - 1,5 см) в колбу-концентратор емкостью 250 куб. см. Экстрагирование и фильтрование повторяют с использованием 50 куб. см смеси гексан:диэтиловый эфир (50:50). Нижний водный слой отбрасывают.

Колбу-концентратор с объединенным гексано-эфирным экстрактом подсоединяют к ротационному вакуумному испарителю и упаривают растворители при температуре +40 °C до объема 3 - 5 куб. см. Остаток экстракта количественно переносят в мерную пробирку со шлифом емкостью 5,0 куб. см и упаривают растворители в токе азота досуха при температуре +40 °C.

Метилирование пиклорама проводят по п. 8.4.1, а газохроматографический анализ по п. 9.3.

Газовый хроматограф с детектором электронного захвата и хроматографической кварцевой капиллярной колонкой длиной 30 м, внутренним диаметром 0,32 мм с неподвижной фазой ВР-50 (типа OV-17), толщина пленки 0,5 мкм.

Температура колонки: программирование от 80 °C (1 мин.) до 280 °C (20 мин.) со скоростью 10,0 °C/мин. Температура испарителя - 250 °C, детектора - 300 °C. Расход газов: газа-носителя (азот в/ч) - 2,0 куб. см/мин., дополнительного газа (азот в/ч) к детектору - 40 куб. см/мин. Количество аликвоты, вводимое в хроматограф, - 1 куб. мм. Для достижения предела определения 0,5 МДУ (0,005 мг/кг) в хроматограф вводят 2 куб. мм анализируемого экстракта.

Время удерживания пиклорама (в виде производного): 18,00 +/- 0,03 мин.

Количественное определение пиклорама проводят методом абсолютной калибровки и вычисляют по формуле:

C - концентрация стандартного раствора пиклорама, мкг/куб. см;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;

P - масса (г) аналитической пробы.

Содержание остаточных количеств пиклорама в анализируемом образце вычисляют как среднее из двух параллельных определений. При получении зашкаленных пиков анализируемый экстракт разбавляют изооктаном.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

ДЕЛЬТА - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

дельта - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: "содержание вещества в пробе менее 0,01 мг/кг" <*>.

--------------------------------

<*> 0,01 мг/кг - предел обнаружения пиклорама в анализируемых объектах.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.

ГНУ ВНИИ защиты растений РАСХН.

Методика прошла метрологическую экспертизу (Свидетельство об аттестации N 01.5.04.668) и внесена в Федеральный реестр (ФР.1.31.2010.07133).