"МУК 4.1.2458-09. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств тебуконазола, триадимефона и триадименола в ботве и корнеплодах свеклы методом газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 02.02.2009)

1. Разработаны Всероссийским НИИ защиты растений.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты нрав потребителей и благополучия человека (протокол от 25 декабря 2008 г. N 3).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 2 февраля 2009 г.

4. Введены в действие с 29 апреля 2009 г.

5. Введены впервые.

Настоящие методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения в корнеплодах свеклы массовой концентрации тебуконазола, триадимефона и триадименола в диапазоне концентраций 0,01 - 0,1 мг/кг, в ботве свеклы - 0,05 - 0,5 мг/кг.

Тебуконазол

Структурная формула (не приводится).

Мол. масса: 307,8.

(RS)-1p-хлорфенил-4,4-диметил-3-(1H-1,2,4-триазол-1-ил-метил)пентан-3-ил (IUPAC).

Химически чистый препарат - бесцветное кристаллическое вещество.

Температура плавления: 105 °C.

Мол. масса: 293,8.

1-(4-хлорфенокси)-3,3-диметил-1-(1H-1,2,4-триазол-1-ил)бутан-2-он (IUPAC).

Химически чистый препарат - бесцветное кристаллическое вещество со слабым характерным запахом.

Температура плавления: 82,3 °C.

Давление паров при 20 °C - 0,02 mPa, при 25 °C - 0,06 mPa.

Растворимость в воде при 20 °C - 64 мг/л (pH 5 - 9); гексане - 6,3, изопропаноле - 99, дихлорметане, толуоле - > 200 (в г/л при 20 °C); умеренно растворим в большинстве органических растворителей. Устойчив к гидролизу.

Класс токсичности по ВОЗ - III, ЕПА - III.

Область применения: системный фунгицид защитного действия.

Триадименол

Структурная формула (не приводится).

Мол. масса: 295,8.

(1RS, 2RS; 1RS, 2SR)-1-(4-хлорфенокси)-3,3-диметил-1-(1H-1,2,4-триазол-1-ил)бутан-2-ол (IUPAC).

Химически чистый препарат - бесцветное кристаллическое вещество со слабым характерным запахом.

Химически чистый препарат - бесцветное кристаллическое вещество без запаха.

Температура плавления: 138,2 °C.

Растворимость в воде при 20 °C - 62 мг/л (pH 5 - 9); гексане - 0,1 - 1,0, изопропаноле - 50 - 100, толуоле - 20 - 50, дихлорметане - > 250 (в г/л при 20 °C). Устойчив к гидролизу. Класс токсичности по ВОЗ - III, ЕПА - III.

Область применения: системный фунгицид защитного действия.

Гигиенические нормативы для сахарной свеклы: тебуконазол - МДУ не установлен, триадимефон - 0,5 мг/кг, триадименол - МДУ не установлен.

Методика основана на извлечении тебуконазола, триадимефона и триадименола из образца ботвы или корнеплодов свеклы органическими растворителями с последующей очисткой экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися жидкими фазами и количественном определении газохроматографическим методом с использованием насадочных колонок и термоионного детектора (ТИД) для определения тебуконазола и триадименола и электронозахватного детектора (ДЭЗ или ДПР) для определения триадимефона.

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих диапазонов концентраций.

Избирательность метода определения тебуконазола, триадимефона и триадименола достигается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.

Отбор образцов свеклы для анализа проводят в соответствии с ГОСТ 1722-85 "Свекла столовая свежая, заготовляемая и поставляемая". Для длительного хранения образцы свеклы (ботва и корнеплоды) помещают в морозильную камеру с температурой -18 °C и хранят в закрытой полиэтиленовой таре.

4.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей. Перед началом работы рекомендуется проверить чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 мл растворителя упаривают в ротационном вакуумном испарителе при температуре +40 °C до объема 1 куб. см и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку растворителей производят в соответствии с общепринятыми методиками.

4.2. Приготовление градуировочных растворов. Стандартные растворы готовят растворением в ацетоне (марки ос.ч.) по 50 мг аналитических стандартов тебуконазола, триадимефона и триадименола в мерных колбах на 100 куб. см. Из полученных растворов с концентрацией 0,5 мг/куб. см готовят градуировочные растворы с концентрациями 0,5, 1,0, 2,0 и 5,0 мкг/куб. см методом последовательного разбавления гексаном.

При определении полноты извлечения пестицида из образцов свеклы для внесения использовали соответствующие градуировочные растворы, приготовленные из основного раствора методом последовательного разбавления гексаном. Стандартные растворы тебуконазола и триадимефона хранятся в холодильнике в течение 6 месяцев, триадименола - в течение 1 месяца; градуировочные растворы - в течение недели.

4.3. Построение градуировочного графика. Для построения градуировочных графиков (площадь пика - концентрация тебуконазола, триадимефона и триадименола в растворе) в хроматограф вводят по 1 куб. мм градуировочных растворов (не менее 3-х параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4-х точек по диапазону измеряемых концентраций). Затем измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации пестицида в градуировочном растворе (мкг/куб. см).

4.4. Подготовка приборов и средств измерения. Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями технической документации.

5.1. Ботва и корнеплоды свеклы. Навеску усредненных проб корнеплодов (50 г) или ботвы свеклы (10 г) измельчают, заливают смесью ацетон-дистиллированная вода (1:1 по объему) и экстрагируют тебуконазол, триадимефон и триадименол в ультразвуковой ванне в течение 15 мин.

Экстракт фильтруют через фильтр "красная лента" в колбу на 250 куб. см. Остаток на фильтре дважды промывают водно-ацетоновой смесью порциями по 25 куб. см. К объединенному экстракту добавляют 10 куб. см насыщенного раствора хлористого натрия и переносят в делительную воронку на 500 куб. см. Пестициды экстрагируют трижды дихлорметаном порциями по 25 - 30 куб. см. Объединенный экстракт сушат над безводным сернокислым натрием и выпаривают на ротационном испарителе досуха при температуре не выше 40 °C.

Сухой остаток растворяют в 1 куб. см гексана при определении тебуконазола и триадименола (ТИД) и в 2,5 куб. см гексана при определении триадимефона (ДПР). В хроматограф вводят аликвоту 1 куб. мм.

При одновременном определении трех компонентов с использованием капиллярной колонки может потребоваться дополнительная очистка на колонке с силикагелем 60 (п. 5.2 и 5.3).

5.2. Подготовка колонки с силикагелем для дополнительной очистки экстракта. Силикагель не менее 5 ч прокаливают при 130 °C, охлаждают и хранят в эксикаторе. Навеску силикагеля 98,5 г помещают в круглодонную колбу и добавляют 1,5 г дистиллированной воды. Колбу плотно закрывают и интенсивно встряхивают в течение 5 мин. Затем колбу присоединяют к ротационному испарителю при атмосферном давлении и медленно вращают 2 ч. Деактивированный таким образом силикагель используют в течение 5 дней.

На дно стеклянной колонки помещают тампон из стекловаты и заполняют суспензией 1 г силикагеля в 3 куб. см гексана при открытом кране, сверху вносят слой 5 - 10 мм безводного сульфата натрия и промывают колонку 5 куб. см гексана. Когда уровень растворителя достигнет верхнего слоя в колонке, кран закрывают. Колонка готова к работе.

5.3. Очистка экстракта на колонке с силикагелем. Гексановый раствор аналита переносят на колонку. Открывают кран и дают пробе впитаться. Когда уровень растворителя достигнет верхнего края колонки, кран закрывают. Колбу ополаскивают 1 куб. см гексана, пипеткой переносят раствор на колонку и открывают кран. Элюат отбрасывают.

Продолжают элюирование последовательно 6 куб. см элюента N 1, затем 6 куб. см толуола, затем порциями по 6 куб. см элюентов N 2 и N 3. Элюаты собирают.

Собранный объединенный элюат выпаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °C. Сухой остаток растворяют в 1 куб. см гексана и 1 куб. мм вводят в хроматограф.

Примечание: профиль вымывания тебуконазола, триадимефона и триадименола может изменяться при использовании силикагеля новой партии или другой марки.

Альтернативные условия хроматографирования

Газовый хроматограф "Кристалл 2000М" с ТИД, колонка кварцевая капиллярная длиной 30 м, диаметром 0,32 мм, неподвижная фаза НР-1, толщина слоя 0,25 мкм. Температура колонки программируется от 170 °C (10 с) до 270 °C (6 мин.) со скоростью 25 °C/мин. Температура термостата детектора 380 °C, испарителя 270 °C. Расход газа-носителя 1 (азот) - 14,5 куб. см/мин., водорода - 14 куб. см/мин., воздуха - 200 куб. см/мин. Расход газа 2 (азот, сброс) - 8 куб. см/мин. Расход газа 3 (азот, поддув ТИД) - 28 куб. см/мин.; расход газа 5 (водород) - 13 куб. см/мин., газа 6 (воздух) - 200 куб. см/мин. Деление потока 1:4. Дозируемый объем 1 куб. мм.

Содержание тебуконазола, триадимефона и триадименола в пробе рассчитывают методом внешнего стандарта по формуле:

A - концентрация градуировочного раствора, мкг/куб. см;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;

m - масса аналитической навески, г.

При получении зашкаленных пиков анализируемый экстракт разбавляют гексаном.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

где дельта - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание вещества в пробе "менее нижней границы определения" (например: менее 0,01 или 0,05 мг/кг) <*>.

--------------------------------

<*> 0,01 и 0,05 мг/кг - пределы обнаружения в корнеплодах и ботве свеклы соответственно.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

9.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

9.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

9.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций), %.

При проведении работы необходимо соблюдать требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1005-88).

При выполнении измерений с использованием газового хроматографа и работе с электроустановками соблюдать правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкциями по эксплуатации приборов.

Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91.

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом газожидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 5.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в таблицах.