"МУК 4.1.2678-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Пеноксулама в воде, почве, зерне и соломе риса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 02.08.2010)

1. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 10.06.2010 N 1).

2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 2 августа 2010 г.

3. Введены впервые.

Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации Пеноксулама в воде в диапазоне 0,0025 - 0,025 мг/дм³ и в почве в диапазоне 0,1 - 1,0 мг/кг, а также уровня остаточных количеств в зерне риса в диапазоне 0,02 - 0,2 мг/кг и в соломе риса в диапазоне 0,5 - 5,0 мг/кг.

Название действующего вещества по ИЮПАК:

2-N-[2-(2,2-дифторэтокси)-6-(трифторметил)бензолсульфонил]-2-амино-5,8 диметокси[1,2,4]триазоло[1,5-c]пиримидин.

Структурная формула:

Эмпирическая формула: C₁₆H₁₄F₅N₅O₅S

Мол. масса: 483,37.

Агрегатное состояние: порошок.

Цвет, запах: бледно-розовый со слегка затхлым запахом.

Давление паров: 9,55 x 10^-14 Па (при 25 °C); 2,49 x 10^-14 Па (при 20 °C).

Коэффициент распределения октанол-вода: K_ow logP = -0,354 (без буфера), K_ow logP = 1,137 (pH 5), K_ow logP = -0,602 (pH 7), K_ow logP = -1,418 (pH 9).

Температура плавления: 212 °C.

Растворимость в воде мг/дм³ (19 °C): Без буфера - 4,91; pH 5 - 5,66; pH 7 - 408; pH 9 - 1460.

Растворимость в органических растворителях (г/дм³, 19 °C): ксилол 0,017; 1,2-дихлороэтан - 1,99; метанол - 1,48; ацетон - 20,3; этилацетат - 3,23; н-октанол - 0,035; N,N-диметилформамид - 39,8; диметилсульфоксид - 78,4; ацетонитрил - 15,3.

Устойчив к гидролизу.

Пеноксулам - слабая кислота: pKa - 5,1 (при 20 °C).

Подвергается фотолизу, DT₅₀ в воде составляет 2 дня, в почве 19 дней. Основной путь разложения в почве - микробиологический.

Пеноксулам относится к веществам мало опасным по острой пероральной и дермальной токсичности (ЛД₅₀ для крыс более 5000 мг/кг), но умеренно опасным веществам по ингаляционной токсичности (ЛК₅₀ для крыс (4 ч) более 3500 мг/куб. м). Вызывает легкое покраснение кожных покровов и глаз кроликов, не вызывает покраснения кожных покровов морских свинок.

Пеноксулам - гербицид системного действия, который проникает через листья и корни, хорошо передвигается по ксилеме и флоэме. Подавляет развитие злаковых однолетних сорняков, а также некоторых двудольных: сыть круглая, клубнекамыш при довсходовом, послевсходовом применении и внесении в воду в посевах риса при норме расхода 10 - 50 г д.в./га.

Предлагается в России для применения в посевах риса.

В России для Пеноксулама установлены следующие гигиенические нормативы: ПДК в воде - 0,003 мг/дм³, ПДК в почве - 0,9 мг/кг; МДУ в зерне риса - 0,5 мг/кг.

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.

Метод основан на определении Пеноксулама с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием ультрафиолетового детектора после его экстракции из образцов водно-органической смесью растворителей, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами, на колонках с окисью алюминия и концентрирующих патронах Диапак C16.

Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором состава подвижной фазы и выбором колонок различной полярности.

Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка колонок с окисью алюминия, концентрирующих патронов Диапак C16 для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на колонке с окисью алюминия и на концентрирующих патронах Диапак C16, построение калибровочной кривой.

Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм³. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 ч. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см³ аппарата для перегонки растворителей.

Ацетонитрил перегоняют при температуре 81,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81,5 °C, отбрасывают.

Ацетон помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см³ от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм³.

Ацетон перегоняют при температуре 56,2 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 56,2 °C, отбрасывают.

Дистиллят помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см³ от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм³ и кипятят в течение 6 ч.

Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 100,0 °C, отбрасывают.

Для приготовления подвижной фазы используют свежеперегнанный ацетонитрил и очищенную воду, а также ледяную уксусную кислоту.

В плоскодонную колбу объемом 1000 см³ помещают 500 см³ ацетонитрила, 500 см³ очищенной воды и 1,0 см³ ледяной уксусной кислоты. Смесь тщательно перемешивают, пропускают через нее газообразный гелий со скоростью 20 см³/мин. в течение 5 мин., после чего помещают в ультразвуковую ванну для удаления растворенных газов на 1 мин.

Мерным цилиндром отбирают 246 см³ концентрированной соляной кислоты и осторожно переносят в мерную колбу на 500 см³, куда предварительно наливают около 100 см³ дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).

Мерной пипеткой отбирают 4,1 см³ концентрированной соляной кислоты и осторожно переносят в мерную колбу на 500 см³, куда предварительно наливают около 100 см³ дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой).

50 г гидрокарбоната натрия переносят в мерную колбу на 1000 см³, добавляют 200 - 300 см³ дистиллированной воды, перемешивают до полного растворения и доводят водой объем в колбе до метки.

Взвешивают 50 мг Пеноксулама в мерной колбе объемом 50 см³. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом. Полученный стандартный раствор N 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и построения калибровочной кривой.

Из стандартного раствора N 1 отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 100 см³ и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор N 2 используется для приготовления стандартных растворов для построения калибровочной кривой.

Из стандартного раствора N 2 отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор N 3 используется для построения калибровочной кривой.

Из стандартного раствора N 3 отбирают пипеткой 5 см³, помещают в мерную колбу объемом 10 см³ и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор N 4 используется для построения калибровочной кривой.

Из стандартного раствора N 2 отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 50 см³ и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор N 5 используется для построения калибровочной кривой.

Из стандартного раствора N 2 отбирают пипеткой 1 см³, помещают в мерную колбу объемом 100 см³ и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор N 6 используется для построения калибровочной кривой.

7.2.3.7. Стандартные растворы Пеноксулама с концентрацией 25,0; 10,0; 5,0; 2,5; 2,0; 1,0; 0,5; 0,4; и 0,2 мкг/см³ для внесения в образцы.

Методом последовательного разведения ацетонитрилом готовят растворы, содержащие по 25,0; 10,0; 5,0; 2,5; 2,0; 1,0; 0,5; 0,4; и 0,2 мкг/см³ и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации Пеноксулама в растворе (мкг/см³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/см³.

В инжектор хроматографа вводят по 20 мм³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.5. Осуществляют не менее 5-ти параллельных измерений.

В пластиковую или стеклянную колонку диаметром 15 мм помещают 3 г окиси алюминия с зернением 40/250 меш и, аккуратно постукивая по стенкам колонки, формируют слой адсорбента. Непосредственно перед использованием колонку промывают 10 см³ ацетонитрила.

В концентратор объемом 100 см³ вносят 1 см³ стандартного раствора Пеноксулама в ацетонитриле с концентрацией 1,0 мкг/см³ и выпаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 10 см³ смеси ацетонитрил-ледяная уксусная кислота в соотношении 99:1, тщательно обмывают стенки концентратора и наносят на подготовленную колонку. Элюат собирают в концентратор объемом по 100 см³ и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °C.

Исходную колбу обмывают еще двумя порциями смеси ацетонитрил-ледяная уксусная кислота в соотношении 99:1 объемом 10 см³ каждая и последовательно вносят их на колонку. Каждую порцию собирают отдельно в концентраторы объемом по 100 см³ и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

Сухой остаток каждой фракции растворяют в 2 см³ ацетонитрила и 20 мм³ пробы вводят в хроматограф.

Определяют фракции, содержащие Пеноксулам, полноту смывания с колонки и необходимый объем элюента.

Изучение поведения Пеноксулама на колонке проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии окиси алюминия.

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см³/мин.

Патрон Диапак C16 устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 см³ (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 5 см³ смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:1, затем 10 см³ воды. Элюаты отбрасывают.

Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

Из стандартного раствора Пеноксулама в ацетонитриле, содержащего 1 мкг/см³, отбирают 1 см³, помещают в концентратор объемом 100 см³ и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 2 см³ ацетонитрила, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 8 см³ воды, перемешивают и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор объемом по 100 см³, выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °C, сухой остаток растворяют в 2 см³ ацетонитрила и 20 мм³ пробы вводят в хроматограф.

Исходный концентратор обмывают последовательно двумя порциями по 10 см³ смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:4, полученные растворы последовательно вносят на патрон. Элюат после прохождения каждой порции элюентов собирают в отдельные концентраторы объемом по 100 см³, выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C, сухой остаток растворяют в 2 см³ ацетонитрила и хроматографируют.

Определяют фракции, содержащие Пеноксулам, полноту смывания с колонки и необходимый объем элюента.

Изучение поведения Пеноксулама на концентрирующих патронах Диапак C16 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии концентрирующих патронов.

Хроматографическую колонку Symmetry Shield RP18 с предколонкой Symmetry C8 устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют при температуре 30 °C и скорости потока подвижной фазы 1 см³/мин. 3 - 4 часа.

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", N 2051-79 от 21.08.79, а также в соответствии ГОСТ Р 51592-2000 "Вода. Общие требования к отбору проб", ГОСТ 1743.01-83 "Почвы. Общие требования к отбору проб", ГОСТ 26950-89 "Почвы. Отбор проб", ГОСТ 13586.3-83 "Зерно. Правила приемки и методы отбора проб", ГОСТ Р 50436-92 (ИСО 950-79) "Зерновые. Отбор проб зерна" и ГОСТ 27262 "Корма растительного происхождения. Методы отбора проб".

Пробы воды хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре 4 °C; пробы почвы - в полиэтиленовой таре в морозильнике при температуре -18 °C.

Отобранные пробы зерна и соломки подсушивают до стандартной влажности и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.

Для длительного хранения пробы почвы подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в темной таре в течение года. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.

Анализ образцов должен быть выполнен в течение одного дня.

Пробу воды объемом 200 см³ помещают в делительную воронку объемом 500 см³, прибавляют туда 20 г хлористого натрия, 2 см³ 6 М соляной кислоты (до pH 1) и перемешивают до полного растворения соли. Пеноксулам экстрагируют тремя порциями диэтилового эфира объемом по 50 см³, встряхивая каждый раз делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой (диэтиловый эфир) объединяют в концентраторе объемом 250 см³, собирая его через слой безводного сульфата натрия. Экстракт выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

Сухой остаток, полученный в п. 9.1.1, растворяют в 2 см³ ацетонитрила, тщательно обмывая стенки концентратора, прибавляют 8 см³ воды, перемешивают и вносят на заранее подготовленный концентрирующий патрон Диапак C16. Элюат собирают в концентратор объемом 100 см³. Исходный концентратор обмывают 10 см³ смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:4, элюат объединяют с предыдущим и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C. Сухой остаток растворяют в 5 см³ ацетонитрила и 20 мм³ пробы вводят в хроматограф.

Пробу почвы весом 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования объемом 200 см³, прибавляют туда 10 см³ 0,1 М соляной кислоты и выдерживают 5 мин. при комнатной температуре. Пеноксулам экстрагируют 50 см³ ацетона в течение 10 мин. в ультразвуковой ванне и дополнительно 10 мин. на механическом встряхивателе. Затем пробу центрифугируют в течение 5 мин. при скорости 4000 оборотов в минуту. Супернатант фильтруют через фильтр "красная лента" в коническую колбу объемом 250 см³ с 10 см³ 5% раствора гидрокарбоната натрия. Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 см³ ацетона и помещая каждый раз на 10 мин. на механический встряхиватель. Пробы центрифугируют в течение 5 мин. при скорости 4000 оборотов в минуту, супернатант фильтруют. Экстракты объединяют в конической колбе объемом 250 см³ с 10 см³ 5% раствора гидрокарбоната натрия и перемешивают. Затем объединенный экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 см³, остаток в колбе промывают 10 см³ ацетона, фильтруют и объединяют с основным экстрактом. Экстракт упаривают до водного остатка (осторожно, вспенивание!) на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

К водному остатку в концентраторе, полученному в п. 9.2.1, прибавляют 50 см³ дистиллированной воды, 1 см³ 6 М соляной кислоты (до pH 1), перемешивают и переносят в делительную воронку объемом 250 см³. Туда же прибавляют 10 г сухого хлорида натрия и интенсивно перемешивают до полного растворения соли. Пеноксулам экстрагируют тремя порциями диэтилового эфира объемом по 25 см³, каждый раз интенсивно встряхивая воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой диэтилового эфира объединяют в химическом стакане объемом 100 см³, нижний водный слой отбрасывают. Эфирный слой возвращают в делительную воронку и экстрагируют Пеноксулам тремя порциями 5% раствора гидрокарбоната натрия объемом по 20 см³, интенсивно встряхивая делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний водный слой с эмульсией объединяют в химическом стакане объемом 100 см³. Эфир отбрасывают.

Водный слой с эмульсией возвращают в делительную воронку и выдерживают до прозрачности нижнего водного слоя. Водный слой помещают в химический стакан объемом 100 см³, выделившийся эфир отбрасывают. Водную фазу возвращают в делительную воронку, прибавляют туда 5 г сухого хлорида натрия и перемешивают до полного растворения соли. Затем содержимое воронки подкисляют 6 М соляной кислотой до pH 1 и дегазируют.

Пеноксулам экстрагируют тремя порциями диэтилового эфира объемом по 30 см³, каждый раз интенсивно встряхивая делительную воронку 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке верхний слой диэтилового эфира объединяют в концентраторе объемом 250 см³, пропуская его через слой безводного сульфата натрия, и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

Сухой остаток, полученный в п. 9.2.2, растворяют в 10 см³ смеси ацетонитрил-ледяная уксусная кислота в соотношении 99:1, тщательно обмывают стенки концентратора, наносят на подготовленную колонку, элюат отбрасывают. Исходную колбу обмывают 10 см³ смеси ацетонитрил-уксусная кислота в соотношении 99:1 и вносят на колонку. Элюат собирают в концентратор объемом 100 см³ и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

Сухой остаток подвергают дальнейшей очистке на концентрирующих патронах Диапак C16, как указано в п. 9.1.2.

После очистки элюат выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C, сухой остаток растворяют в 5 см³ ацетонитрила и 20 мм³ пробы вводят в хроматограф.

Образец измельченного зерна риса массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции и центрифугирования объемом 200 см³, прибавляют 50 см³ смеси ацетон - 0,1 М соляная кислота в соотношении 9:1 и помещают на 10 мин. в ультразвуковую ванну, а затем на 10 мин. на механический встряхиватель. Пробу центрифугируют в течение 5 мин. при скорости 4000 оборотов в минуту и экстракт фильтруют в коническую колбу объемом 250 см³ с 10 см³ 5% раствора гидрокарбоната натрия через фильтр "красная лента". Экстракцию повторяют еще два раза, используя каждый раз по 50 см³ смеси ацетон-0,1 М соляная кислота в соотношении 9:1, помещая на 10 мин. на механический встряхиватель. Пробы центрифугируют в течение 5 минут при скорости 4000 оборотов в минуту, супернатант фильтруют. Экстракты объединяют в конической колбе объемом 250 см³ с 10 см³ 5% раствора гидрокарбоната натрия. Затем объединенный экстракт фильтруют в концентратор объемом 250 см³, остаток в колбе промывают 10 см ацетона, фильтруют и объединяют с основным экстрактом. Экстракт упаривают до водного остатка (осторожно, вспенивание!) на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

Далее проводят очистку экстракта по п. 9.2.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и п. 9.2.3. Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия и на концентрирующих патронах Диапак C16.

После очистки элюат выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C, сухой остаток растворяют в 2 см³ ацетонитрила и 20 мм³ пробы вводят в хроматограф.

Образец измельченной соломы риса массой 5 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см³, прибавляют 100 см³ смеси ацетон-0,1 М соляная кислота в соотношении 9:1 и помещают на 10 мин. в ультразвуковую ванну, а затем на 10 мин. на механический встряхиватель. Экстракт фильтруют в коническую колбу объемом 500 см³ с 20 см³ 5% раствора гидрокарбоната натрия через фильтр "красная лента". Экстракцию повторяют еще два раза, используя каждый раз по 70 см³ смеси ацетон-0,1 М соляная кислота в соотношении 9:1 и помещая на 10 мин. на механический встряхиватель. Экстракты фильтруют объединяют в конической колбе объемом 500 см³ с 20 см³ 5% раствора гидрокарбоната натрия. Затем объединенный экстракт фильтруют в колбу объемом 500 см, остаток в колбе промывают 15 см³ ацетона, фильтруют и объединяют с основным экстрактом (общий объем экстрагента составляет при этом 275 см³; для работы берут аликвоту объемом 55 см³ - 20% от объема). Экстракт упаривают до водного остатка (осторожно, вспенивание!) на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C.

Далее проводят очистку экстракта по п. 9.2.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и п. 9.2.3. Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия и на концентрирующих патронах Диапак C16.

После очистки элюат выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °C, сухой остаток растворяют в 5 см³ ацетонитрила и 20 мм³ пробы вводят в хроматограф.

Хроматограф жидкостной Waters 510 с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны и чувствительностью не ниже 0,005 единиц адсорбции на шкалу, номер госрегистрации N 15311-02 или другой с аналогичными характеристиками.

Колонка стальная Symmetry Shield RP18, 250 мм x 4,6 мм, зернение 5 мкм, фирма "Waters".

Предколонка стальная Symmetry C8, 20 мм x 3,9 мм, зернение 5 мкм, фирма "Waters".

Температура колонки: 30 °C.

Подвижная фаза: ацетонитрил-вода-ледяная уксусная кислота в соотношении 500:500:1.

Длина волны: 290 нм.

Время удерживания Пеноксулама: 8,563 мин. +/- 2%.

Чувствительность не менее 0,0025 AUFS (единиц абсорбции на шкалу).

Объем вводимой пробы: 20 мм³.

Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 2 - 20 нг.

Для обработки результатов хроматографического анализа используется программное обеспечение химического анализа Millenium 3.05.01.

Альтернативная обработка результатов.

Содержание Пеноксулама рассчитывают по формуле:

X - содержание Пеноксулама в пробе, мг/кг;

- высота (площадь) пика стандарта, мм;

- высота (площадь) пика образца, мм;

A - концентрация стандартного раствора, мкг/см³;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см;

m - масса анализируемого образца, г (см³);

P - содержание Пеноксулама в аналитическом стандарте, %.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

X₁, X₂ - результаты параллельных определений, мг/кг;

r - значение предела повторяемости (табл. 1), при этом r = 2,8 x .

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

- среднее арифметическое значение результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

- граница абсолютной погрешности, мг/кг;

- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание вещества в пробе менее 0,01 мг/кг" <*>

--------------------------------

<*> 0,01 мг/кг - предел обнаружения.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

Величина добавки должна удовлетворять условию:

, - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно) мг/кг, при этом:

- граница абсолютной погрешности, мг/кг;

- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Результат контроля процедуры K_к рассчитывают по формуле:

, , - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11), содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки, соответственно, мг/кг.

Норматив контроля K рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (K_к) с нормативом контроля (K).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

X₁, X₂ - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

Российский государственный аграрный университет МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов".