"МУК 4.1.2268-07. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств проквиназида в воде, почве, ягодах и соке винограда методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 24.09.2007)

1. Разработаны Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева, Учебно-научным консультационным центром "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов", Федеральным агентством по сельскому хозяйству Минсельхоза России.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по защите прав потребителей и благополучия человека (протокол N 2 от 21 июня 2007 г.).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 24 сентября 2007 г.

4. Введены в действие с 10 декабря 2007 г.

5. Введены впервые в качестве дополнения.

Настоящие Методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения массовой концентрации Проквиназида в воде в диапазоне 0,01 - 0,1 мг/л; в почве, в ягодах и соке винограда в диапазоне 0,02 - 0,2 мг/кг.

Название действующего вещества по ИСО: Проквиназид.

Название по ИЮПАК: 6-йодо-2-пропокси-3-пропил-3Н-хиназолин-4-он.

Структурная формула (не приводится).

Молекулярная масса: 372,21.

Агрегатное состояние: кристаллы.

Цвет, запах: белого цвета без запаха.

В России установлены следующие гигиенические нормативы: ДСД - 0,003 мг/кг/сут.; ПДК в воде - 0,006 мг/куб. дм; ОДК в почве - 0,1 мг/кг; МДУ в винограде - 0,04 мг/кг.

Проквиназид - фунгицид контактного действия со специфичной активностью против ложномучнисторосяных грибов таких, как мильдью на виноградной лозе.

Рекомендуется к применению в России для борьбы с мильдью на винограде с нормой расхода по действующему веществу до 50 г/га путем опрыскивания.

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в таблице 2.

Метод основан на определении Проквиназида методом капиллярной ГЖХ с использованием детектора по захвату электронов после экстракции его из воды и сока винограда диэтиловым эфиром, из почвы и ягод винограда - ацетонитрилом, и очистки экстракта путем перераспределения между двумя несмешивающимися растворителями.

Идентификация проводится по времени удерживания. Количественное определение - методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Избирательность обеспечивается путем подбора капиллярной колонки и условий программирования температуры.

Весы аналитические "OHAUS", СИГМА 11140.

Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 600 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г "ACCULAB" V600.

Колбы мерные на 25, 50, 100 куб. см, ГОСТ 1770-74.

Микрошприц на 10 куб. мм, ТУ 2.833.106.

Пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0 куб. см, ГОСТ 20292-74.

Цилиндры мерные на 10, 25 и 50 куб. см, ГОСТ 1770-74.

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Аналитический стандарт Проквиназид с содержанием 98,0% д.в. (фирма Дюпон).

Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

Ацетон, х.ч., ТУ 6-09-3513-86.

Ацетонитрил, ТУ 6-09-3534-87.

Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-72.

Диэтиловый эфир, х.ч., ГОСТ 6262-79.

н-Гексан, ч., ТУ 6-09-3375-78.

Гелий очищенный марки "А", ТУ 51-940-80.

Натрий сернокислый безводный, х.ч., ГОСТ 4166-76.

Натрия хлорид, х.ч., ГОСТ 4233-77.

Стандартный раствор Проквиназида в ацетоне - 1 мг/куб. см (хранить в холодильнике, срок годности 120 суток).

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

Аппарат для встряхивания проб "SKLO UNION TYP LT1".

Ванна ультразвуковая "UNITRA" UNIMA OLSZTYN UM-4.

Виалы с тефлоновыми прокладками, Aldrich, cat. N Z27, 702-9.

Воронки химические для фильтрования стеклянные, ГОСТ 8613-75.

Воронки делительные на 250 и 500 куб. см, ГОСТ 10054-75.

Испаритель ротационный Rotavapor R110 Buchi с водяной баней В-480, фирма Буши.

Концентраторы грушевидные (конические) 250 куб. см, ГОСТ 10394-72.

Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая НР-5, (Crosslinked 5% фенилсилоксана и 95% метилсилоксана), длина 30 м, внутренний диаметр 0,25 мм, толщина пленки 0,25 мкм, фирмы Хьюлетт Паккард.

Насос диафрагменный FT.19 фирмы KNF Neu Laboport.

Стаканы стеклянные на 100 куб. см, ГОСТ 6236-72.

Фильтры бумажные "Красная лента", ТУ 6-09-1678-86.

Центрифуга MPW-350e с набором полипропиленовых банок емкостью 200 куб. см, MPW Med. instruments.

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на газовом хроматографе.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7.1.1. Приготовление стандартных растворов

100 мг Проквиназида (аналитического стандарта) вносят в мерную колбу вместимостью 100 куб. см, растворяют навеску в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном (стандартный раствор N 1, концентрация 1 мг/куб. см). Раствор хранится в холодильнике не более 120 суток.

Методом последовательного разбавления исходного раствора N 1 ацетоном готовят стандартный раствор N 2 с концентрацией 10,0 мкг/куб. см, который может храниться в холодильнике не более 30 суток. Из стандартного раствора N 2 путем последовательного разбавления готовят рабочие растворы для установки градуировочной характеристики с концентрациями: 0,02; 0,05; 0,1; 0,2; 0,5; 1,0 мкг/куб. см.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации Проквиназида в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 6-и растворам для градуировки с концентрацией 0,02; 0,05; 0,1; 0,2; 0,5; 1,0 мкг/куб. см.

В испаритель хроматографа вводят по 1 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.5. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений (рисунок 1 - не приводится).

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", N 2051-79 от 21.08.79, а также в соответствии с ГОСТ Р 51592-2000 "Вода. Общие требования к отбору проб", ГОСТ 1743.01-83 "Почвы. Общие требования к отбору проб", ГОСТ 26950-89 "Почвы. Отбор проб", ГОСТ 25896-83 "Виноград свежий столовый. ТУ", ГОСТ 25892-83Е "Сок виноградный натуральный. ТУ".

Пробы воды хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре +4 °С не более 10 суток.

Пробы винограда хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре 0 - 4 °С не более суток. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре -18 °С до 2-х лет.

Для длительного хранения пробы почвы подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в темной таре в течение года. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.

9.1.1. Экстракция и очистка экстракта

Пробу воды объемом 300 куб. см помещают в делительную воронку, добавляют 50 куб. см диэтилового эфира и интенсивно встряхивают в течение 2 минут. После полного разделения слоев нижний водный слой собирают в плоскодонную колбу объемом 250 куб. см, а верхний эфирный собирают в концентратор емкостью 250 куб. см через слой безводного сульфата натрия. Повторяют экстракцию еще дважды, используя каждый раз по 50 куб. см диэтилового эфира. Экстракты объединяют и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °С. Сухой остаток в концентраторе разводят в 10 куб. см ацетона и аликвоту 1 куб. мм вводят в хроматограф.

9.2.1. Экстракция

Навеску почвы 10 г помещают в центрифужную полипропиленовую банку объемом 250 куб. см, увлажняют 10 куб. см воды. Добавляют 50 куб. см ацетонитрила и встряхивают смесь на встряхивателе 45 минут. По окончании встряхивания пробу центрифугируют 5 минут при 4000 об./мин. Фильтруют экстракт в концентратор емкостью 250 куб. см через воронку с бумажным фильтром. Повторяют экстракцию еще дважды, используя по 50 куб. см ацетонитрила, встряхивая смесь каждый раз по 30 минут. Объединенный экстракт выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °С.

Далее проводят очистку экстракта, как описано в пункте 9.3.2.

9.3.1. Экстракция

Навеску размятых ягод 10 г помещают в полипропиленовую банку, добавляют 50 куб. см ацетонитрила и помещают на ультразвуковую ванну на 10 минут. Фильтруют экстракт в концентратор емкостью 250 куб. см через воронку с бумажным фильтром. Повторяют экстракцию еще дважды, используя по 50 куб. см ацетонитрила, помещая на ультразвуковую ванну каждый раз по 10 минут. Экстракты объединяют и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °С.

9.3.2. Очистка экстракта

К сухому остатку в концентраторе добавляют 5 куб. см ацетонитрила, омывают концентратор и помещают на 2 минуты на ультразвуковую ванну. В концентратор двумя порциями добавляют 100 мл воды, ополаскивают стенки концентратора и переносят водную фазу в делительную воронку.

Добавляют в воронку 5 граммов хлорида натрия, растворяют его путем встряхивания. Приливают 50 куб. см диэтилового эфира и интенсивно встряхивают смесь в течение 1 - 2 мин. После разделения слоев нижний водный слой сливают в тот же концентратор, а верхний эфирный переносят в чистый концентратор емкостью 250 куб. см, пропуская через воронку с безводным сульфатом натрия. Водную фракцию возвращают в делительную воронку. Экстракцию повторяют еще дважды, используя для этого каждый раз 50 куб. см диэтилового эфира. Эфирные экстракты объединяют в концентраторе и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °С досуха.

Сухой остаток в концентраторе разводят в 10 куб. см и аликвоту 1 куб. мм вводят в хроматограф.

9.4.1. Экстракция

Навеску сока 10 г помещают в полипропиленовую банку. Растворяют 5 г хлористого натрия в 100 куб. см воды, приливают раствор в банку с соком. Добавляют 50 куб. см диэтилового эфира и помещают на ультразвуковую ванну на 10 минут. Далее экстракцию продолжают на встряхивателе в течение еще 10 минут. Экстракт переносят в делительную воронку и после полного разделения слоев нижний водный слой собирают в полипропиленовую банку, а верхний эфирный - в чистый концентратор объемом 250 куб. см, пропуская через слой безводного сульфата натрия. Повторяют экстракцию еще дважды, используя по 50 куб. см диэтилового эфира, помещая на ультразвуковую ванну и встряхиватель каждый раз по 10 минут. Экстракты объединяют и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше 35 °С.

Далее проводят очистку экстракта, как описано в пункте 9.3.2.

Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая НР-5, (Crosslinked 5% фенилсилоксана и 95% метилсилоксана), длина 30 м, внутренний диаметр 0,25 мм, толщина пленки 0,25 мкм.

Температура детектора - 300 °С, испарителя - 260 °С, программированный нагрев колонки с 220 °С (выдержка 2 минуты) по 5 град./мин. до 260 °С.

Газ 1: тип регулятора расхода газа РРГ 11, режим нормальный, скорость 20 см/с, давление 101,8 кПа.

Газ 2 (гелий) - 40 куб. см/мин.: расход 0,5 куб. см/мин., сброс 1:80.

Газ 3 (азот, поддув детектора) - 45 куб. см/мин.

Абсолютное время удерживания Проквиназида - 8 мин. 10 сек. +/- 2%.

Линейность детектирования сохраняется в пределах - 1,0 - 0,02 нг.

Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю площадь пика.

Образцы почвы, ягод и сока винограда, дающие пики больше, чем стандартный раствор с концентрацией Проквиназида 0,2 мкг/куб. см, соответственно разбавляют. Образцы воды, дающие пики больше, чем стандартный раствор с концентрацией Проквиназида 1,0 мкг/куб. см, соответственно разбавляют.

Количественное определение Проквиназида проводят по методу абсолютной калибровки посредством сравнения с хроматограммами стандартных растворов Проквиназида с концентрацией 0,02 - 1,0 мкг/куб. см.

Для обработки результатов хроматографического анализа используется программа сбора и обработки хроматографической информации "Хроматэк Аналитик", версия 1.20.

Альтернативная обработка результатов.

Содержание Проквиназида рассчитывают по формуле:

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание вещества в пробе менее 0,02 мг/кг" <*>.

--------------------------------

<*> 0,02 мг/кг - предел обнаружения.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):