"МУК 4.1.2390-08. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств пропамокарба гидрохлорида в клубнях картофеля методом газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 02.07.2008)

1. Разработаны Российским государственным аграрным университетом - МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научным консультационным центром "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов".

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия населения (протокол от 3 апреля 2008 г. N 1).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия населения, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 2 июля 2008 г.

4. Введены в действие с 5 сентября 2008 г.

5. Введены впервые.

Настоящие Методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения в клубнях картофеля массовой концентрации Пропамокарба гидрохлорида в диапазоне 0,05 - 0,4 мг/кг.

Название действующего вещества по ИСО: Пропамокарб гидрохлорид.

Название действующего вещества по ИЮПАК: Пропил-[3-(диметиламино)пропил]карбамат гидрохлорид.

Молекулярная масса: 224,7.

Химически чистый Пропамокарб гидрохлорид представляет собой бесцветное кристаллическое, чрезвычайно гигроскопическое вещество без запаха.

Температура плавления 45 - 55 °С.

Пропамокарб гидрохлорид стабилен при нормальных условиях хранения, не гидролизуется в водном растворе при различных значениях pH и температуры.

В России установлены следующие гигиенические нормативы:

ОДК в почве - 0,1 мг/кг;

ПДК в воде - 0,08 мг/куб. дм;

ВМДУ в огурцах - 0,05 мг/кг;

МДУ в клубнях картофеля - 0,1 мг/кг.

Пропамокарб гидрохлорид - системный фунгицид с продолжительным защитным действием, рекомендуемый для борьбы с возбудителями пероноспороза, фитофтороза, черной ножки, корневых гнилей овощных, декоративных культур и табака путем внесения в почву, опрыскивания вегетирующих растений и обработки семян, корней рассады, клубней и клубнелуковиц перед посадкой.

В России применяется как средство борьбы с возбудителями пероноспороза и корневых гнилей на огурцах, черной ножки рассады капусты, фитофтороза глоксинии и томатов защищенного грунта, корневых гнилей табака при норме расхода 1,0 - 3,5 кг д.в./га за обработку. Пропамокарб гидрохлорид входит в состав смесевых препаратов, применяемых на картофеле.

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения Пропамокарба гидрохлорида, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в таблице 2.

Метод основан на определении Пропамокарба гидрохлорида методом газожидкостной хроматографии с использованием термоионного детектора после экстракции веществ органическим растворителем, очистки методом перераспределения между двумя несмешивающимися растворителями и дополнительной очистки на патронах Диапак C16.

Идентификация проводится по времени удерживания. Количественное определение - методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Избирательность метода достигается за счет подбора колонки и условий программирования.

Весы аналитические СИГМА 11140, фирма "OHAUS".

Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 600 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г V600, "ACCULAB".

Колбы мерные вместимостью 10, 50, 100 и 1000 куб. см, ГОСТ 1770-74.

Микрошприц Гамильтон вместимостью 10 куб. мм.

Пипетки мерные вместимостью 1, 2, 5 и 10 куб. см, ГОСТ 20292-74.

Стаканы мерные вместимостью 200 и 1000 куб. см, ГОСТ 6236.

Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 25, 50, 100 и 250 куб. см, ГОСТ 1770.

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Аналитический стандарт Пропамокарба гидрохлорида с содержанием 76,6% д.в. (фирма Байер Кроп Сайенс).

Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

Ацетон, ч.д.а., ГОСТ 2603-79.

Ацетонитрил, х.ч., ТУ 6-09-06-1092-83.

Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-72.

Гелий очищенный марки "А", ТУ-51-940-80.

Кислота хлороводородная, конц., х.ч., ГОСТ 3118-77.

Натрия гидроокись, х.ч., ГОСТ 4328-77.

Натрий сернокислый безводный, х.ч., ГОСТ 4166-76.

Эфир диэтиловый (для наркоза, Фармакопея СССР).

Стандартный раствор Пропамокарба гидрохлорида в ацетоне - 1 мг/куб. см (хранить в холодильнике, срок годности 120 суток).

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

Аппарат для встряхивания проб TYP LT1 фирмы "SKLO UNION".

Банки с крышками для экстракции на 250 куб. см, полипропилен, кат. N 3120-0250, NALGENE.

Воронки химические для фильтрования стеклянные, ГОСТ 8613-75.

Воронки делительные на 250 куб. см, ГОСТ 10054-75.

Испаритель ротационный Rota vapor R110 Buchi с водяной баней B-480.

Концентраторы грушевидные на 100 и 250 куб. см, НШ 29 КГУ - 100 (250) ГОСТ 10394-72.

Колонка хроматографическая, капиллярная кварцевая НР-5 (5% дифенил и 95% диметилполисилоксан), длина 10 м, внутренний диаметр 0,53 мм, толщина пленки 2,65 мкм, фирма J&W Scientific.

Насос вакуумный диафрагменный FT.19 фирмы KNF Neu Laboport.

Патроны Диапак С16, ТУ 4215-002-05451931-94.

Фильтры бумажные "красная лента", ТУ 6-09-2678-77.

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на газовом хроматографе.

К подготовке проб допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С и относительной влажности не более 80%;

выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7.1.1. Подготовка концентрирующего патрона Диапак C16

Патрон устанавливают на аллонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 мл, который используют как емкость для элюентов.

Патрон кондиционируют, пропуская через него последовательно 10 мл ацетонитрила и 10 мл деионизированной дистиллированной воды. Смывы отбрасывают. Растворы пропускают через патрон под вакуумом, скорость потока растворов должна быть не более 2 мл/мин. (1 капля в 2 секунды). Нельзя допускать осушения поверхности патрона!

7.1.2. Проверка хроматографического поведения Пропамокарба гидрохлорида на патронах Диапак С16

При отработке методики или поступлении новой партии патронов проводят изучение поведения Пропамокарба гидрохлорида на патронах. В концентратор помещают 1 куб. см стандартного раствора Пропамокарба гидрохлорида в ацетоне с концентрацией 1 мкг/куб. см и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе. Сухой остаток растворяют в 1 куб. см ацетонитрила, добавляют 10 куб. см деионизированной дистиллированной воды, перемешивают содержимое концентратора, наносят на патрон и пропускают через него со скоростью, указанной в разделе 7.1.1. Смыв отбрасывают.

Промывают патрон 10 куб. см смеси ацетонитрил:вода - 1:1, смыв отбрасывают. Наносят на колонку 25 куб. см смеси ацетонитрил с 0,1н раствором соляной кислоты в соотношении 1:1, отбирая последовательно по 5 мл элюента. Каждую фракцию собирают отдельно в концентраторы и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани 45 - 50 °С досуха.

Сухой остаток в концентраторах растворяют в 1 куб. см ацетона и вводят в хроматограф 1 куб. мм. По результатам обнаружения Пропамокарба гидрохлорида в каждой фракции определяют объем смеси ацетонитрил с 0,1н раствором соляной кислоты в соотношении 1:1, необходимый для полного вымывания Пропамокарба гидрохлорида.

7.2.1. Приготовление 1н раствора хлороводородной (соляной) кислоты

Раствор готовят из химически чистой концентрированной кислоты с плотностью 1,19 путем разведения 82 куб. см концентрированной кислоты дистиллированной водой в мерной колбе на 1 куб. дм.

7.2.2. Приготовление 0,1н раствора хлороводородной кислоты

Раствор готовят из химически чистой концентрированной кислоты с плотностью 1,19 путем разведения 8,2 куб. см концентрированной кислоты дистиллированной водой в мерной колбе на 1 куб. дм.

7.2.3. Приготовление 10н раствора гидроокиси натрия

Навеску гидроокиси натрия 400 г растворяют в дистиллированной воде в стакане емкостью 1000 куб. см, переливают раствор в мерную колбу емкостью 1 куб. дм. Стакан ополаскивают 400 куб. см дистиллированной воды, воду сливают в ту же колбу. После охлаждения раствора доводят его уровень до метки дистиллированной водой.

7.2.4. Приготовление деионизированной воды

Деионизированную воду получают при кипячении бидистиллята в течение 6 часов с марганцовокислым калием, добавленным из расчета 1 г/куб. дм, и затем перегоняют.

50 мг Пропамокарба гидрохлорида (аналитического стандарта) вносят в мерную колбу вместимостью 50 куб. см, растворяют навеску в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном (стандартный раствор N 1, концентрация 1 мг/куб. см). Раствор хранится в холодильнике около 120 суток.

Методом последовательного разбавления исходного раствора N 1 ацетоном готовят рабочие растворы Пропамокарба гидрохлорида с концентрацией 0,25; 0,5; 1,0; 2,0 мкг/куб. см для построения калибровочного графика и внесения в образцы, которые могут храниться в холодильнике не более 30 суток.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации Пропамокарба гидрохлорида в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки с концентрацией 0,25; 0,5; 1,0; 2,0 мкг/куб. см.

В испаритель хроматографа вводят по 1 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования, указанных в п. 9.2. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.

По полученным данным строят градуировочный график зависимости площади хроматографического пика в мВ от концентрации Пропамокарба гидрохлорида в растворе в мкг/куб. см (рисунок 1 - не приводится).

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", N 2051-79 от 21.08.79, а также в соответствии с ГОСТ 7176-85 "Картофель свежий продовольственный, заготовляемый и поставляемый. ТУ", ГОСТ 26832-86 "Картофель свежий для переработки на продукты питания. ТУ".

Пробы клубней картофеля хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре 0 - 4 °С в течение до 3-х суток. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре -18 °С до 2-х лет.

Перед анализом клубни картофеля размораживают и измельчают на терке.

9.1.1. Экстракция Пропамокарба гидрохлорида из анализируемой пробы

Навеску 20 г измельченных клубней картофеля помещают в полипропиленовые банки объемом 250 куб. см, заливают 50 куб. см смеси ацетонитрил с 1н раствором соляной кислоты в соотношении 8:2, перемешивают содержимое банки и встряхивают в течение 30 мин. Экстракт оставляют на ночь.

На следующий день экстракт отфильтровывают в концентратор емкостью 250 куб. см через стеклянную воронку с бумажным фильтром. Экстракцию повторяют еще 2 раза, заливая пробу той же смесью объемом 50 мл, и встряхивая пробу в течение 15 минут. Экстракты фильтруют в тот же концентратор. Содержимое концентратора выпаривают на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка при температуре 40 - 45 °С.

К водному остатку в концентраторе добавляют 7 куб. см 10н раствора гидроокиси натрия, перемешивают содержимое концентратора и переносят в делительную воронку емкостью 250 куб. см. В делительную воронку добавляют 3 г хлористого натрия и встряхивают воронку до полного растворения соли.

Приливают в делительную воронку 50 куб. см диэтилового эфира, содержимое воронки встряхивают в течение 1 - 2 минут. После разделения слоев нижний водный слой сливают в стакан емкостью 200 куб. см, а эфир собирают в концентратор емкостью 250 куб. см, пропуская его через воронку с безводным сульфатом натрия. Экстракцию повторяют еще 2 раза с тем же объемом диэтилового эфира. Объединенный экстракт выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С досуха.

9.1.2. Очистка экстракта на патроне Диапак C16

Сухой остаток в концентраторе растворяют в 1 куб. см ацетонитрила, добавляют 10 куб. см деионизированной дистиллированной воды, тщательно обмывают концентратор, наносят содержимое концентратора на кондиционированный патрон и пропускают через него со скоростью, указанной в разделе 7.1.1. Смыв отбрасывают. Промывают патрон 10 куб. см смеси ацетонитрил:вода - 1:1, смыв отбрасывают. Наносят на колонку 25 куб. см смеси ацетонитрил с 0,1н раствором соляной кислоты в соотношении 1:1, пропускают через патрон и собирают весь объем в концентратор емкостью 100 куб. см. Элюат выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани 45 - 50 °С досуха.

Сухой остаток в концентраторе растворяют в 4 куб. см ацетона и вводят в хроматограф 1 куб. мм пробы.

Капиллярная кварцевая колонка НР-5, длина 10 м, внутренний диаметр 0,53 мм, толщина пленки 2,7 мкм.

Температура термостата колонки программированная: начальная температура - 100 °С, выдержка - 1 минута, нагрев колонки по 20 °С в минуту до 210 °С, выдержка - 5 мин.

Продувка детектора после анализа азотом - 40 куб. см/мин. в течение 3 минут. Нагрев колонки до 260 °С.

Температура испарителя - 200 °С, детектора - 300 °С.

Газ 1 - гелий (газ-носитель), давление на входе - 7 кПа, давление на выходе - 101,3 кПа, линейная скорость - 26,812 см/сек., поток - 2,935 куб. см/мин. Мертвое время - 0,62 мин. Регулятор расхода Г1 - РРГ-10.

Газ 2 - гелий (сброс пробы), режим Splitless, расход во время анализа - 10 куб. см/мин.; деление потока - 1:30, начало сброса - 30 сек., длительность сброса - 2 мин. Регулятор расхода Г2 - РРГ-11.

Газ 4 - азот (поддув в детектор), расход во время анализа - 35 куб. см/мин.

Газ 5 - водород, расход во время анализа - 11,5 куб. см/мин.

Газ 6 - воздух, расход - 200 куб. см/мин.

Абсолютное время удерживания Пропамокарба гидрохлорида - 6 мин. 35 сек. - 6 мин. 42 сек.

Минимально детектируемое количество Пропамокарба гидрохлорида в анализируемом объеме - 0,25 нг.

Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,25 - 2,0 нг.

Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю площадь пика.

Образцы, дающие пики больше, чем стандартный раствор с концентрацией Пропамокарба гидрохлорида 2,0 мкг/куб. см соответственно, разбавляют.

Для определения содержания Пропамокарба гидрохлорида в пробах методом ГЖХ используют следующую формулу:

где:

X - содержание Пропамокарба гидрохлорида в пробе, мг/кг;

Sст - площадь пика стандарта, мВ;

Sпр - площадь пика образца, мВ;

A - концентрация стандартного раствора, мкг/куб. см;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;

m - масса анализируемого образца, г;

P - содержание Пропамокарба гидрохлорида в аналитическом стандарте, %.

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание вещества в пробе менее 0,05 мг/кг" <*>.

--------------------------------

<*> 0,05 мг/кг - предел обнаружения.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости: