"МУК 4.1.2708-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств тирама в растительном масле методом газохроматографического парофазного анализа. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 02.08.2010)

1. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 10.06.2010 N 1).

2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 2 августа 2010 г.

3. Введены впервые.

Настоящие методические указания устанавливают метод парофазного газохроматографического анализа для определения в растительном масле массовой концентрации тирама в диапазоне концентраций 0,005 - 0,05 мг/кг.

Название действующего вещества по ИСО: Тирам.

Tetramethylthiuram disulfide; bis(dimethylthiocarbamoyl) disulfide (IUPAC).

Структурная формула: (не приводится).

Гигиенические нормативы, установленные в России:

МДУ - во всех пищевых продуктах содержание тирама не допускается.

Область применения: фунгицид для опрыскивания в период вегетации в борьбе с различными грибковыми болезнями семечковых и косточковых плодовых, виноградной лозы, овощных и зерновых культур, в качестве составного компонента для протравливания семян.

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих диапазонов концентраций.

Методика основана на газохроматографическом определении сероуглерода, выделившегося в парогазовую фазу в результате кислотного гидролиза пробы масла, растворенного в тетрахлорэтилене, помещенной в герметически закрытый сосуд при 80 °C. Используется пламенно-фотометрический детектор (ПФД). Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки по зависимости высоты (площади) пика сероуглерода от концентрации тирама, внесенного в контрольную пробу растительного масла.

Пестициды других групп не мешают определению. Внутри группы дитиокарбаматов метод неселективен.

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Допускается использование реактивов квалификацией не ниже указанных.

Допускается использование другого вспомогательного оборудования с техническими характеристиками не ниже указанных.

4.1. При проведении работы необходимо соблюдать требования техники безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1.005, ГОСТ 12.1.007). Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.

При выполнении измерений с использованием газового хроматографа и работе с электроустановками соблюдать правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкциями по эксплуатации приборов.

4.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны".

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом газожидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.

При выполнении измерений выполняют следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха 20 +/- 5 °C и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Готовую насадку 5% OV-101 на хроматоне N-Super (0,125 - 0,160 мм) засыпают в стеклянную колонку, закрепив с двух сторон тампонами из стекловаты, устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и кондиционируют в токе инертного газа при температуре 260 °C в течение 8 - 10 часов.

7.2.1. 1,5%-ный раствор двухлористого олова в 1,2 н соляной кислоте.

15 г соли растворяют в 100 куб. см концентрированной соляной кислоты при нагревании на водяной бане. Остывший раствор переносят в мерную колбу на 1000 куб. см и доводят до метки дистиллированной водой. Срок хранения в холодильнике - 2 недели в темной посуде.

7.2.2. 0,1 н раствор гидроксида натрия.

Навеску 2 г гидроксида натрия помещают в мерную колбу на 500 куб. см, добавляют 200 куб. см дистиллированной воды и перемешивают до полного растворения. После охлаждения раствора доводят объем раствора до метки дистиллированной водой. Содержимое колбы перемешивают.

7.2.3. Приготовление растворов для внесения в контрольные образцы растительного масла.

Основной раствор с концентрацией 0,5 мг/куб. см: 50 +/- 0,5 мг тирама вносят в мерную колбу на 100 куб. см, растворяют навеску в 0,1 н растворе гидроксида натрия при нагревании до 50 °C в ультразвуковой ванне в течение 5 мин.

Растворы с концентрацией тирама от 5 до 0,5 мкг/куб. см готовят из основного раствора методом последовательного разбавления по объему.

7.2.4. Раствор N 1. Для получения раствора с концентрацией тирама 5 мкг/куб. см 1 куб. см основного раствора вносят градуированной пипеткой в мерную колбу на 100 куб. см и доводят до метки дистиллированной водой.

7.2.5. Раствор N 2 с концентрацией тирама 2,5 мкг/куб. см готовят разбавлением раствора N 1 водой в 2 раза. Для этого, используя мерный цилиндр, в мерную колбу на 100 куб. см вносят 50 куб. см раствора N 1 и доводят до метки дистиллированной водой.

7.2.6. Раствор N 3 с концентрацией тирама 1 мкг/куб. см готовят разбавлением раствора N 1 водой в 5 раз. Для этого, используя мерный цилиндр, в мерную колбу на 100 куб. см вносят 20 куб. см раствора N 1 и доводят до метки дистиллированной водой.

7.2.7. Раствор N 4 с концентрацией тирама 0,5 мкг/куб. см готовят разбавлением раствора N 1 водой в 10 раз. Для этого, используя мерный цилиндр, в мерную колбу на 100 куб. см вносят 10 куб. см раствора N 1 и доводят до метки дистиллированной водой.

Растворы N 1 - 5 готовят в день анализа и используют при внесении в контрольные образцы растительного масла для получения градуировочных образцов по п. 7.3.

7.3.1. Для приготовления градуировочных образцов растительного масла, содержащих известное количество тирама, во флакон объемом 20 куб. см с 5 г (3 куб. см) тетрахлорэтилена и навеской контрольной пробы (5 +/- 0,05) г микропипеткой или микрошприцем добавляют 50 куб. мм приготовленного по п. 7.2.4 раствора N 1 - получают градуировочный образец масла с концентрацией тирама 0,05 мг/кг.

7.3.2. Для получения образцов масла с концентрацией тирама 0,025, 0,010 и 0,005 мг/кг используют растворы N 2 - 4. Процедура приготовления аналогична п. 7.3.1: во флакон объемом 20 куб. см с 5 г тетрахлорэтилена помещают навеску контрольной пробы масла (5 +/- 0,05) г, добавляют 50 куб. мм приготовленных по п. п. 7.2.5 - 7.2.7 растворов N 2 - 4 соответственно. Каждый флакон с пробой герметично закрывают крышкой с резиновой пробкой, энергично встряхивают в течение нескольких минут, после чего пробу подвергают гидролизу по п. 9.1.

При выполнении количественных анализов с ПФД следует иметь в виду, что для серосодержащих соединений зависимость сигнала от потока вещества через детектор носит логарифмический характер. При обработке хроматограмм вручную по высотам пиков градуировочный график строят в координатах lg H - C (мг/кг), при использовании для регистрации сигнала логарифмического самописца - в координатах H (мм) - C (мг/кг), при использовании программного обеспечения системы "Мультихром" расчет производится автоматически.

Внимание! В процессе выполнения всех экспериментов необходимо тщательно контролировать постоянство всех параметров работы прибора (температура колонки, расход газа-носителя и вспомогательных газов), а также температуру и время термостатирования проб.

Следует иметь в виду, что до начала использования медицинского шприца для дозирования газов в хроматограф, его следует проверить на герметичность соединения иглы с канюлей шприца. Для этого на острие иглы накалывают силиконовую прокладку для испарителя хроматографа и нижнюю часть шприца погружают в стакан с водой. При попытке выдавливания воздуха из цилиндра шприца штоком не должны появляться пузырьки воздуха из проверяемых соединений.

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79), а также в соответствии с ГОСТ 10852-86 "Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб".

Пробы масла хранят в холодильнике при 0 - 4 °C в плотно закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре.

Из лабораторной пробы масла отбирают в стеклянные флаконы емкостью 20 куб. см (с внесенными в них заранее 3 куб. см тетрахлорэтилена) навески по 5 г. При использовании флаконов большей емкости следует исходить из того, что соотношение объемов навески и добавляемого реактива для кислотного гидролиза должно быть 1:1. Соотношение объемов конденсированной и газовой фаз во флаконе также должно быть приблизительно 1:1.

После чего во флакон добавляют 5 куб. см 1,5% раствора двухлористого олова в соляной кислоте. Флаконы герметично закрывают резиновыми пробками и завинчивающимися крышками с отверстием и энергично встряхивают в течение 1 мин.

При приготовлении проб с внесением тирама до добавления солянокислого реактива во флакон с навеской контрольного образца микрошприцем или микродозатором вносят 50 куб. мм соответствующего градуировочного раствора.

Внимание! Обязательно поверхность резиновой пробки изолировать от пробы с помощью прокладки из фторопластовой пленки - для устранения сорбции сероуглерода резиной в процессе термостатирования флаконов с пробами.

Герметизированные флаконы помещают в жидкостной ультратермостат или, при наличии свободного хроматографа, в термостат колонок прибора, разогретый до 80 °C (хроматографические колонки из него должны быть убраны).

Пробы периодически через 10 мин. энергично встряхивают в течение 2 мин. или помещают в ультразвуковую ванну на 1 - 2 мин. Гидролиз проводят в течение 40 - 60 мин. (при анализе всех образцов время должно быть одинаковым).

Дозирование паровой фазы в хроматограф осуществляют с помощью специального пневматического дозатора (при наличии приставки для парофазного анализа) или шприцем в испаритель хроматографа. При введении паровой фазы шприцем во избежание конденсации паров пробы на стенках шприца он должен быть нагрет до температуры на несколько градусов выше температуры термостатирования флакона с пробой (85 - 90 °C).

Время удерживания сероуглерода в указанных условиях (75 +/- 5) с.

Примечание: для определения времени удерживания сероуглерода на используемой колонке хроматографируют раствор сероуглерода в бензоле. Для этого каплю сероуглерода добавляют в колбу с 25 - 50 куб. см бензола и перемешивают. В хроматограф вводят паровую фазу над полученным раствором. При получении на хроматограмме зашкаленного пика раствор разбавляют бензолом до получения на хроматограмме пика высотой не более 50% шкалы самописца.

Градуировка хроматографа производится по внесению градуировочных растворов в анализируемую матрицу с последующим гидролизом тирама до сероуглерода в условиях, идентичных анализу исследуемой пробы. Таким образом, градуировка учитывает влияние матрицы на установление равновесия в системе конденсированная фаза - газовая фаза, полноту гидролиза, сорбционные потери сероуглерода в процессе анализа. Поэтому расчет содержания тирама в исследуемом объекте проводится непосредственно по градуировочному графику (lg S - концентрация тирама в пробе, мг/кг) или по соотношению площадей (высот) пиков сероуглерода в исследуемом и градуировочном образце, обязательно с близким содержанием определяемого компонента:

Результат вычисляют как среднее из 2-х результатов анализа параллельно приготовленных образцов.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

Результат анализа представляют в виде:

где дельта - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

содержание вещества в пробе "менее нижней границы определения" (например: менее 0,005 мг/кг <*>).

--------------------------------

<*> 0,005 мг/кг - предел определения тирама в масле.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

ГНУ ВИЗР, Санкт-Петербург.