"МУК 4.1.2246-07. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение массовых концентраций 3-[3-(1,1'-бифенил)-4-ил-1,2,3,4-тетрагидро-1-нафталенил]-4-гидрокси-н-1-бензопиран-2-она (дифенакум) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 17.08.2007)

1. Подготовлены: ГУ НИИ медицины труда РАМН.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол N 2 от 21.06.2007).

3. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко.

4. Введены впервые.

Сборник методических указаний "Измерение концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны" (выпуск 49) разработан с целью обеспечения контроля соответствия фактических концентраций вредных веществ их предельно допустимым концентрациям (ПДК) и ориентировочным безопасным уровням воздействия (ОБУВ) и являются обязательными при осуществлении санитарного контроля.

Включенные в данный сборник методические указания по контролю вредных веществ в воздухе рабочей зоны разработаны и подготовлены в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 ССБТ "Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования", ГОСТ Р 8.563-96 "Государственная система обеспечения единства измерений. Методики выполнения измерений", ГОСТ Р ИСО 5725 (части 1 - 6) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

Методики выполнены с использованием современных методов исследования, метрологически аттестованы и дают возможность контролировать концентрации химических веществ на уровне и ниже их ПДК и ОБУВ в воздухе рабочей зоны, установленных в гигиенических нормативах ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны" и ГН 2.2.5.1314-03 "Ориентировочные безопасные уровни воздействия (ОБУВ) вредных веществ в воздухе рабочей зоны" и дополнениях к ним.

Методические указания по измерению массовых концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны предназначены для центров Госсанэпиднадзора, санитарных лабораторий промышленных предприятий при осуществлении контроля за содержанием вредных веществ в воздухе рабочей зоны, а также научно-исследовательских институтов и других заинтересованных министерств и ведомств.

Настоящие Методические указания устанавливают методику количественного химического анализа воздуха рабочей зоны для определения в нем дифенакума методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в диапазоне массовых концентраций 0,001 - 0,04 мг/куб. м.

2.1. Структурная формула: (не приводится).

2.3. Молекулярная масса: 444,55.

2.4. Регистрационный номер CAS: 56073-07-5.

2.5. Физико-химические свойства

Дифенакум - порошок белого цвета без запаха, без вкуса, температура плавления (228 - 232) °С, нерастворим в воде, умеренно растворим в этаноле, хорошо растворим в ацетоне, хлороформе, стабилен на свету.

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

2.6. Токсикологическая характеристика

Дифенакум является антикоагулянтом.

Ориентировочный безопасный уровень воздействия (ОБУВ) дифенакума в воздухе рабочей зоны - 0,005 мг/куб. м.

При соблюдении всех регламентных условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность и ее составляющие результатов измерений не превышают значений, приведенных в табл. 1, для соответствующих диапазонов измерений.

Измерение массовой концентрации дифенакума выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с УФ-детектированием при длине волны 260 нм.

Отбор проб проводят с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерения содержания дифенакума в анализируемом объеме раствора пробы - 0,004 мкг.

Нижний предел измерения массовой концентрации дифенакума в воздухе - 0,001 мг/куб. м (при отборе 200 куб. дм воздуха).

Метод специфичен в условиях приготовления препаративных форм на основе дифенакума. Измерению не мешают сопутствующие вещества: растительные масла, крахмал, триэтиленгликоль, пищевые основы.

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы, растворы.

Допускается применение других средств измерения, вспомогательных устройств, реактивов и материалов с техническими и метрологическими характеристиками не хуже приведенных в разделе.

6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.

6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ должны соблюдаться требования противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и необходимо иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-90.

6.3. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица с высшим или специальным химическим образованием, имеющие опыт работы в химической лаборатории, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы оперативного контроля при выполнении процедур контроля погрешности анализа.

8.1. Приготовление растворов и подготовку проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С, атмосферном давлении (84 - 106) кПа и относительной влажности воздуха не более 80%.

8.2. Выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: приготовление растворов, подготовку жидкостного хроматографа, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

9.1.1. Исходный стандартный раствор N 1 с концентрацией дифенакума 1 мг/куб. см готовят растворением 25 мг дифенакума в мерной колбе вместимостью 25 куб. см в горячем этаноле (t = 50 °С для лучшего растворения вещества). Раствор устойчив в течение недели при хранении в холодильнике.

9.1.2. Рабочий стандартный раствор N 2 с концентрацией дифенакума 10 мкг/куб. см готовят соответствующим разведением исходного стандартного раствора N 1 этанолом.

Для этого берут 0,25 куб. см исходного стандартного раствора N 1, помещают в мерную колбу вместимостью 25 куб. см и доводят до метки этанолом. Раствор устойчив в течение недели при хранении в холодильнике.

9.1.3. 0,5%-ный (об.) раствор уксусной кислоты готовят следующим образом: 0,5 куб. см ледяной уксусной кислоты вносят в мерную колбу вместимостью 100 куб. см и доводят до метки бидистиллированной водой.

9.1.4. Приготовление элюента:

В мерной колбе вместимостью 100 куб. см смешивают 85 куб. см ацетонитрила и 15 куб. см 0,5%-ного (об.) раствора уксусной кислоты. Срок хранения - в течение месяца.

Подготовку жидкостного хроматографа проводят в соответствии с руководством по его эксплуатации.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (приборные единицы) от содержания дифенакума в градуировочном объеме раствора, устанавливают по методу абсолютной калибровки по шести сериям растворов. Каждую серию, состоящую из шести градуировочных растворов и холостой пробы, готовят в мерных колбах вместимостью 25 куб. см. Для этого в соответствии с таблицей N 2 в каждую колбу вносят соответствующий объем рабочего стандартного раствора дифенакума N 2 с концентрацией 10 мкг/куб. см и доводят объем раствора до метки этанолом.

Градуировочные растворы устойчивы в течение трех суток.

Инжектируют в хроматограф по 0,02 куб. см каждого из градуировочных растворов.

По полученным данным строят градуировочную характеристику зависимости площади пика (приборные единицы) от содержания дифенакума в хроматографируемом объеме (мкг).

Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб.

Состав элюента: ацетонитрил, о.с.ч., для ВЭЖХ: 0,5%-ный (об.) раствор уксусной кислоты = 85:15.

Температура термостата колонки: 20 °С.

Скорость подачи элюента: 0,7 куб. см/мин.

Длина волны детектора: 260 нм.

Объем вводимой пробы: 0,02 куб. см.

Время удерживания дифенакума: 5 мин. 54 с.

Проверка градуировочной характеристики проводится 1 раз в три месяца или в случае использования новой партии реактивов, а также при изменении других условий проведения анализа.

9.3.1. Контроль стабильности градуировочной характеристики

Контроль стабильности градуировки проводят не реже 1 раза в три месяца, а также при смене реактивов или изменении условий анализа.

Образцами для контроля являются вновь приготовленные градуировочные растворы. Выбирают образцы в начале, в середине и в конце диапазона измерений и анализируют в точном соответствии с прописью методики.

Градуировочную характеристику считают стабильной, если для каждого контрольного образца выполняется условие (1):

Если условие стабильности не выполняется только для одного образца, то выполняют повторное измерение этого образца с целью исключения результата, содержащего грубую ошибку.

Если градуировка нестабильна, выясняют причины нестабильности и повторяют контроль стабильности с использованием других образцов для градуировки, предусмотренных методикой. При повторном обнаружении нестабильности градуировки прибор градуируют заново.

Отбор проб следует проводить с учетом требований ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны" и Руководства Р 2.2.2006-05 (прилож. 9, обязательное) "Общие методические требования к организации и проведению контроля содержания вредных веществ в воздухе рабочей зоны", п. 2 контроль соответствия максимальным ПДК.

Воздух с объемным расходом 20 куб. дм/мин. аспирируют через фильтр АФА-ВП-20, помещенный в фильтродержатель, снабженный металлической сеткой.

Для измерения 1/2 ОБУВ дифенакума необходимо отобрать 80 куб. дм воздуха. Отобранные пробы могут храниться в бюксах в холодильнике в течение недели.

После отбора пробы фильтр помещают в бюкс и экстрагируют 5,0 куб. см горячего этанола (t = 50 °С), помешивая при этом стеклянной палочкой в течение 5 - 7 мин., затем фильтр тщательно отжимают и повторно экстрагируют 5,0 куб. см горячего этанола. Затем фильтр отжимают и удаляют. Экстракты объединяют и переносят в круглодонную колбу со шлифом. Колбу присоединяют к ротационному испарителю и под вакуумом упаривают растворитель досуха при температуре 40 - 45 °С. Сухой остаток растворяют в 1,0 куб. см горячего этанола (t = 50 °С). Степень десорбции дифенакума с фильтра - 97%. Хроматографический анализ выполняют в тех же условиях, что и хроматографирование градуировочных растворов.

Количественное определение содержания дифенакума (в мкг) в анализируемом объеме раствора пробы проводят по предварительно построенной градуировочной характеристике.

11.1. Массовую концентрацию дифенакума в воздухе, С (мг/куб. м), вычисляют по формуле:

11.2. За результат измерений принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, если выполняются условия приемлемости.

11.3. Если условие (2) не выполняется, получают еще два результата в полном соответствии с данной методикой. За результат измерений принимают среднее арифметическое значение результатов четырех определений, если выполняется условие:

Если условие (3) не выполняется, выясняют причины превышения критического диапазона, устраняют их и повторяют выполнение измерений в соответствии с требованиями МВИ.

Результат анализа в документах, предусматривающих его использование, представляют в виде:

В случае, если полученный результат анализа ниже нижней (выше верхней) границы диапазона измерений, то производят следующую запись в журнале: "содержание дифенакума менее 0,001 мг/куб. м (более 0,04 мг/куб. м)".

Контроль качества результатов измерений в лаборатории при реализации методики осуществляют по ГОСТ Р ИСО 5725-6, используя контроль стабильности среднеквадратического (стандартного) отклонения повторяемости по п. 6.2.2 ГОСТ Р ИСО 5725-6 и показателя правильности по п. 6.2.4 ГОСТ Р ИСО 5725-6. Проверку стабильности осуществляют с применением контрольных карт Шухарта.

Периодичность контроля стабильности результатов выполнения измерений регламентируют в Руководстве по качеству лаборатории.

Рекомендуется устанавливать контролируемый период так, чтобы количество результатов контрольных измерений было от 20 до 30.

При неудовлетворительных результатах контроля, например, превышение предела действия или регулярное превышение предела предупреждения, выясняют причины этих отклонений, в том числе проводят смену реактивов, проверяют работу оператора.

Для проведения серии анализов из 6 проб требуется 2 ч. 30 мин.

Методические указания разработаны ГУ НИИ медицины труда РАМН.