"МУК 4.1.1951-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по измерению концентраций пирипроксифена в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"
(утв. Роспотребнадзором 18.01.2005)

1. Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.

4. Введены впервые.

Настоящие Методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения в воздухе рабочей зоны массовой концентрации пирипроксифена в диапазоне 0,1 - 1 мг/куб. м.

Пирипроксифен - действующее вещество препарата АДМИРАЛ, 10% КЭ,

фирма-производитель Кромптон, Англия.

4-феноксифенил (RS)-2-(2-пиридилокси)пропиловый эфир (IUPAC).

Структурная формула (не приводится).

Область применения препарата

Пирипроксифен - инсектицид контактного и кишечного действия из группы аналогов ювенильного гормона, подавляющий эмбриогенез и процесс метаморфоза насекомых. Активно подавляет развитие мух, жуков, комаров и других насекомых.

Ориентировочный безопасный уровень воздействия (ОБУВ) пирипроксифена в воздухе рабочей зоны - 1,0 мг/куб. м.

Методика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью (дельта), не превышающей +/- 25%, при доверительной вероятности 0,95.

Измерения концентраций пирипроксифена выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на обращенной фазе с ультрафиолетовым детектором.

Концентрирование пирипроксифена из воздуха осуществляют на бумажные фильтры "синяя лента", экстракцию с фильтра проводят этанолом.

Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 4 нг.

Определению не мешают компоненты препаративной формы.

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами по ГОСТу 12.1.005.

4.2. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.019 и инструкцией по эксплуатации прибора.

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Перед выполнением измерений проводят очистку ацетонитрила (при необходимости), подготовку подвижной фазы для ВЭЖХ, приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 150 куб. см воды, добавляют 850 куб. см ацетонитрила, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 250 куб. см воды, добавляют 750 куб. см ацетонитрила, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

Промывают колонку подвижной фазой N 1 (приготовленной по п. 7.2) при скорости подачи растворителя 1 куб. см/мин. или подвижной фазой N 2 (приготовленной по п. 7.3) при скорости подачи растворителя 0,3 куб. см/мин. до установления стабильной базовой линии.

7.4.1. Исходный раствор пирипроксифена для градуировки (концентрация 100 мкг/куб. см)

В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,01 г пирипроксифена, доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.

Растворы N 1 - 5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора.

7.4.2. Раствор N 1 пирипроксифена для градуировки (концентрация 10 мкг/куб. см)

В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10 куб. см исходного раствора пирипроксифена с концентрацией 100 мкг/куб. см (п. 7.4.1), разбавляют подвижной фазой (п. 7.2 или 7.3) до метки. Раствор хранится в холодильнике в течение 3-х суток.

7.4.3. Рабочие растворы N 2 - 5 пирипроксифена для градуировки (концентрация 0,2 - 2,0 мкг/куб. см)

В 3 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают по 2,0; 5,0 и 10,0 куб. см градуировочного раствора N 1 с концентрацией 10 мкг/куб. см (п. 7.4.2), доводят до метки подвижной фазой (п. 7.2 или 7.3), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 4 с концентрацией пирипроксифена 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/куб. см соответственно. Для приготовления рабочего градуировочного раствора N 5 с концентрацией пирипроксифена 2,0 мкг/куб. см используют 10 куб. см градуировочного раствора N 1, разбавление проводят в мерной колбе вместимостью 50 куб. см.

Растворы хранятся в холодильнике в течение суток.

Отбор проб воздуха проводят в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны".

В течение 15 минут последовательно отбирают 3 пробы, для чего воздух аспирируют в течение 5 минут с объемным расходом 2 - 5 куб. дм/мин. через бумажный фильтр "синяя лента", помещенный в фильтродержатель.

Для измерения концентрации пирипроксифена на уровне 0,5 ОБУВ для воздуха рабочей зоны необходимо отобрать 2 куб. дм воздуха. Срок хранения отобранных проб, помещенных в полиэтиленовые пакеты, в холодильной камере при +4 °С - 5 дней.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (отн. единицы) от концентрации пирипроксифена в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки N 2 - 5.

В инжектор хроматографа вводят по 20 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. п. 7.6.1.1 или 7.6.1.2. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений. Устанавливают площадь пика пирипроксифена.

7.6.1. Условия хроматографирования

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:

Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором Perkin-Elmer (США)

Рабочая длина волны: 272 нм

Температура колонки: комнатная

Объем вводимой пробы: 20 куб. мм

7.6.1.1. Колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая Кромасил 100 С18, зернением 7 мкм

Подвижная фаза: ацетонитрил - вода (85:15, по объему)

Скорость потока элюента: 1 куб. см/мин.

Чувствительность: 0,01 ед. абсорбции на шкалу

Ориентировочное время выхода пирипроксифена: 6,0 - 6,33 мин.

7.6.1.2. Колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 2 мм, содержащая Spherisorb S5 ODS 2, зернением 5 мкм

Подвижная фаза: ацетонитрил - вода (75:25, по объему)

Скорость потока элюента: 0,3 куб. см/мин.

Чувствительность: 0,02 ед. абсорбции на шкалу

Ориентировочное время выхода пирипроксифена: 6,8 - 7,0 мин.

Линейный диапазон детектирования: 4 - 40 нг.

Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор пирипроксифена с концентрацией 2,0 мкг/куб. см, разбавляют подвижной фазой (п. 7.2 или 7.3).

Градуировочный график проверяют ежедневно по анализу 2-х стандартных растворов различной концентрации. Если значения площади отличаются более чем на 5% от данных, заложенных в градуировочную характеристику, ее строят заново, используя свежеприготовленные рабочие стандартные растворы.

Фильтр с отобранной пробой переносят в химический стакан вместимостью 100 куб. см, заливают 10 куб. см этанола, оставляют на 4 - 5 минут, периодически перемешивая. Растворитель сливают, фильтр еще дважды обрабатывают новыми порциями этанола объемом 10 куб. см.

Объединенный экстракт упаривают в грушевидной колбе на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °С почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха, остаток растворяют в 5 куб. см подвижной фазы N 1 или 2 и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 7.6.1.

Пробу вводят в инжектор хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь пика, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию пирипроксифена в хроматографируемом растворе.

Перед анализом опытной пробы проводят хроматографирование холостой (контрольной) пробы - экстракта неэкспонированного фильтра.

Массовую концентрацию пирипроксифена в пробе воздуха рабочей зоны (Х, мг/куб. м) рассчитывают по формуле:

где:

Т - температура воздуха при отборе пробы (на входе в аспиратор), град. С;

Р - атмосферное давление при отборе пробы, мм рт. ст.;

u - расход воздуха при отборе пробы, куб. дм/мин.;

t - длительность отбора пробы, мин.

Примечание: Идентификация и расчет концентрации пирипроксифена в пробах могут быть проведены с помощью программ обработки хроматографических данных с применением компьютера, включенного в аналитическую систему.

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана, г. Мытищи Московской обл.