"МУК 4.1.1941-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств бенсульфурон-метила в воде, почве, зерне и соломе риса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"
(утв. Роспотребнадзором 18.01.2005)

1. Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.

4. Введены впервые.

Торговое наименование: Лондакс.

Фирма-производитель: Дюпон де Немур Интернэшнл С.А.

Действующее вещество: бенсульфурон-метил.

Структурная формула (не приводится).

альфа-(4,6-диметоксипиримидин-2-илкарбамоилсульфамоил)-о-толуидиновая кислота (номенклатура IUPAC).

Молекулярная масса: 410,4.

Физическое состояние: белое светло-желтое кристаллическое вещество без запаха.

Растворимость в воде (мг/л, 25 °С): 2,9 (рН 5); 12 (рН 6); 120 (рН 7); 1200 (рН 8).

Растворимость в органических растворителях (г/л, 20 °С): ацетон - 1,38; ацетонитрил - 5,38; гексан - 0,01; хлористый метилен - 1,72; этилацетат - 1,66.

Температура плавления: 185 - 188 °С.

Гигиенические нормативы: ПДК в воде - 0,04 мг/л, МДУ для зерна риса - 0,02 мг/кг, ПДК в почве - 0,02 мг/кг.

Область применения: бенсульфурон-метил - действующее вещество гербицида Лондакс 600 г/кг СТС, применяемого для борьбы с сорняками в посевах риса с нормой расхода 50 - 100 г/га.

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на определении бенсульфурон-метила на высокоэффективном жидкостном хроматографе с ультрафиолетовым детектором. Бенсульфурон-метил экстрагируется: из почвы - водой с рН 10, из зерна и соломы риса - хлористым метиленом и из воды - хлороформом. При анализе почвы и растительной массы экстракт очищают сначала перераспределением между несмешивающимися растворителями, а затем на патроне Диапак С16. Очищенные и сконцентрированные упариванием экстракты анализируют методом ВЭЖХ с использованием обращенно-фазной колонки.

2.1.2. Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии других пестицидов, применяемых при возделывании риса.

2.1.3. Метрологическая характеристика метода

Метрологическая характеристика метода представлена в табл. 1 и 2.

2.2.1. Реактивы и материалы

Бенсульфурон-метил 99% (Дюпон де Немур Интернэшнл С.А.)

Аммиак водный 25%-ный, чда, ГОСТ 3760-79

Ацетонитрил для хроматографии, ТУ-6-09-4326-76

Вода бидистиллированная деионизированная, ГОСТ 7602-72

Гексан, хч, ТУ 6-09-3375-78

Кислота уксусная ледяная, хч, ГОСТ 61-75

Метанол, хч, ГОСТ 6995-77

Орто-фосфорная кислота, хч, имп., фирмы "Нева реактив"

Сульфат натрия безводный, чда, ГОСТ 4166-76

Толуол, хч, ГОСТ 5789-78

Фильтры бумажные "синяя лента", ТУ 6-09-1678-77

Хлористый метилен, ТУ 6-09-2662-77

Хлороформ, хч, ГОСТ 20015-74

2.2.2. Приборы, аппаратура и посуда

Аппарат для встряхивания, ТУ 64-1-1081-73, или аналогичный

Вакуумный роторный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-74, или аналогичный

Весы аналитические ВЛА-200, ГОСТ 34104-80Е, или аналогичные

Весы лабораторные технические ВЛТК-500 или аналогичные

Воронки конические стеклянные диаметром 50 - 60 мм, ГОСТ 25336-82Е

Делительные воронки на 100, 250 мл, ГОСТ 25336-82Е

Колбы конические емкостью 250 - 500 мл, ГОСТ 10394-72

Колбы грушевидные для отгонки растворителей, ГОСТ 23932-79

Колбы мерные на 100 мл, ГОСТ 1770-74

Колонка хроматографическая стальная длиной 250 мм и внутренним диаметром 4 мм, зернение 5 мкм, Диасфер-110 С18, ЗАО "БиоХиммак СТ"

Концентраторы грушевидные на 50 и 100 мл, КТУ-100-14/19, ГОСТ 10394-75

Концентрирующие патроны ДИАПАК С16, ЗАО "БиоХиммак СТ", ТУ 4215-002-05451931-94

Мельница электрическая лабораторная, ТУ 46-22-236-79, или аналогичная

Микрошприц на 50 мкл для жидкостного хроматографа

Пипетки мерные на 1,0; 2,0 и 5,0 мл, ГОСТ 20292

Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-74, или аналогичный

Стекловата

Хроматограф жидкостной высокоэффективный Кратос с ультрафиолетовым детектором Кратос 2500 с изменяемой длиной волны и чувствительностью не ниже 0,005 единиц адсорбции на шкалу или другой аналогичный

Центрифуга 10000 об./мин. с центрифужными стаканами на 200 мл

Цилиндры мерные на 25, 50, 100 мл, 250 мл и 500 мл, ГОСТ 1770-74Е

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР от 21.08.79 N 2051-79. Перед анализом зерно размалывают на мельнице, солому режут на части по 0,5 см. Образцы почвы и воды хранят до анализа в морозильной камере при температуре -18 °С.

2.4.1. Подготовка растворителей

Очистку растворителей осуществляют общепринятыми методами (А. Гордон, Р. Форд. Спутник химика, М., "Мир", 1976).

2.4.2. Приготовление стандартных растворов

Основной стандартный раствор 100 мкг/мл бенсульфурон-метила готовят в 100 мл мерной колбе, растворяя 10 мг действующего вещества в ацетонитриле. Из основного стандартного раствора бенсульфурон-метила методом последовательного разбавления готовят калибровочные растворы вещества в подвижной фазе с концентрациями: 0,1; 0,2; 0,5 и 1 мкг/мл. Рабочие стандартные растворы готовят в день анализа, основной стандартный раствор можно хранить при -18 °С в течение 3 месяцев.

2.4.3. Построение калибровочного графика

Для построения калибровочного графика снимают хроматограммы стандартных растворов, вводя в инжектор хроматографа последовательно 3 раза по 50 мкл каждого стандартного раствора. Измеряют площади пиков, рассчитывают их средние значения для каждой концентрации и строят график зависимости площади пика от концентрации бенсульфурон-метила.

2.4.4. Проверка хроматографического поведения бенсульфурон-метила на патроне Диапак С16

Все процедуры с патронами проводят с использованием вакуума (скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 мл/мин.). Патрон устанавливают на аллонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 мл. Нельзя допускать высыхания поверхности патрона в процессе его кондиционирования и при очистке на нем экстрактов!

При анализе зерна и соломы риса. Предварительно патрон Диапак С16 кондиционируют, пропуская через него 10 мл ацетонитрила и 10 мл 0,15 М раствора гидроксида аммония. На кондиционированный патрон наносят 0,1 мкг бенсульфурон-метила в 10 мл 0,15 М раствора гидроксида аммония. Затем бенсульфурон-метил элюируют последовательно десятью 1-мл порциями ацетонитрила. Каждую фракцию упаривают отдельно, после чего сухой остаток растворяют в 1 мл подвижной фазы и аликвоту 50 мкл вводят в хроматограф. Рассчитывают содержание бенсульфурон-метила в каждой фракции и определяют объем элюата, необходимый для наиболее полного элюирования вещества с патрона. Для данной методики он равен 5 мл ацетонитрила.

При анализе почвы. Кондиционирование патрона Диапак С16 проводят, последовательно промывая его 10 мл метанола, 10 мл дистиллированной воды и 10 мл дистиллированной воды с рН 10. На кондиционированный патрон наносят 0,1 мкг бенсульфурон-метила в 10 мл дистиллированной воды с рН 10. Промывают его 10 мл дистиллированной воды. Затем бенсульфурон-метил последовательно элюируют десятью 1-мл порциями метанола. Каждую фракцию упаривают отдельно, после чего сухой остаток растворяют в 1 мл подвижной фазы и аликвоту 50 мкл вводят в хроматограф. Рассчитывают содержание бенсульфурон-метила в каждой фракции и определяют объем элюента, необходимый для наиболее полного элюирования вещества с патрона. Для данной методики он равен 5 мл метанола.

2.4.5. Приготовление подвижной фазы

Готовят 0,05%-ный раствор орто-фосфорной кислоты. Для приготовления подвижной фазы 430 мл ацетонитрила смешивают с 570 мл 0,05%-ного раствора орто-фосфорной кислоты и дегазируют в ультразвуковой бане в течение 1 мин.

2.5.1. Вода

Пробу воды объемом 100 мл доводят до рН 4,0 добавлением 0,1 М HCl, помещают в делительную воронку на 250 мл, добавляют 50 мл хлороформа и встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения фаз нижний слой хлороформа сливают в концентратор на 250 мл, пропуская его через воронку с безводным сульфатом натрия. Процедуру повторяют. К объединенному хлороформенному экстракту добавляют 5 капель уксусной кислоты и упаривают его на вакуумном роторном испарителе при 35 °С. Сухой остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы и 50 мкл аликвоту хроматографируют.

2.5.2. Зерно риса

Экстракция. В коническую плоскодонную колбу на 250 мл помещают 10 г размолотого зерна риса, приливают 50 мл хлористого метилена и встряхивают в течение 30 мин. Суспензию фильтруют через бумажный фильтр. Процедуру экстракции повторяют. Экстракт объединяют и упаривают досуха на вакуумном роторном испарителе при 35 °С.

Первичная очистка. Сухой остаток растворяют в 30 мл ацетонитрила, переносят в делительную воронку на 100 мл и добавляют 30 мл н-гексана. Воронку встряхивают 2 мин. и гексановую фазу отбрасывают. Повторяют эту процедуру. Объединенный ацетонитриловый экстракт упаривают досуха при 35 °С.

Очистка на Диапак С16. Сухой остаток растворяют в 10 мл 0,15 М гидроксида аммония и пропускают по каплям через кондиционированный патрон Диапак С16. Испарительную колбу обмывают 5 мл 0,15 М гидроксида аммония и этот раствор также пропускают через патрон. Дают раствору полностью стечь и бенсульфурон-метил снимают с патрона 5 мл ацетонитрила. Элюат упаривают досуха на вакуумном роторном испарителе при 35 °С. Сухой остаток перед анализом растворяют в 1 мл подвижной фазы и 50 мкл аликвоту хроматографируют.

2.5.3. Солома риса

Экстракция. В коническую плоскодонную колбу на 250 мл помещают 5 г мелко нарезанной соломы риса, приливают 50 мл 0,5%-ной уксусной кислоты в хлористом метилене и встряхивают в течение 30 мин. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр. Процедуру экстракции повторяют.

Первичная очистка. Экстракт объединяют и упаривают досуха на вакуумном роторном испарителе при температуре не более 35 °С. Остаток растворяют в 30 мл ацетонитрила, переносят в делительную воронку на 100 мл и добавляют 30 мл н-гексана. Воронку встряхивают 2 мин. и гексановую фазу отбрасывают. Эту процедуру повторяют. Ацетонитриловый экстракт упаривают досуха при температуре не более 35 °С. Сухой остаток растворяют в 100 мл 0,15 М гидроксида аммония, переносят в делительную воронку на 250 мл и чистят 10 мл хлористого метилена, который затем отбрасывают. Процедуру повторяют. Водную фазу подкисляют до рН 4,0 разбавленной HCl, добавляют 0,5 мл ледяной уксусной кислоты и экстрагируют бенсульфурон-метил двумя 30 мл порциями хлористого метилена по две минуты. Объединенный экстракт упаривают досуха на вакуумном роторном испарителе при 35 °С.

Очистка на Диапак С16. Кондиционируют патрон 10 мл ацетонитрила и 10 мл 0,15 М гидроксида аммония. Сухой остаток растворяют в 10 мл 0,15 М гидроксида аммония и пропускают по каплям через Диапак С16. Испарительную колбу обмывают 5 мл 0,15 М гидроксида аммония и этот раствор также пропускают через патрон. Дают раствору полностью стечь и бенсульфурон-метил снимают с патрона 5 мл ацетонитрила. Элюат упаривают досуха на вакуумном роторном испарителе и перед анализом на хроматографе растворяют в 1 мл подвижной фазы и 50 мкл аликвоту хроматографируют.

2.5.4. Почва

Экстракция. 20 г почвы помещают в 500 мл коническую плоскодонную колбу, приливают 250 мл дистиллированной воды с рН 10 (нужный рН устанавливается с помощью гидроксида аммония) и встряхивают на механическом встряхивателе в течение 10 мин. Содержимое переносят в центрифужный стакан и центрифугируют в течение 15 мин. со скоростью 7000 об./мин. Раствор декантируют в цилиндр на 250 мл через воронку со стекловатой.

Первичная очистка. Аликвоту 125 мл переносят в делительную воронку на 250 мл, добавляют 30 мл смеси толуол - хлористый метилен в соотношении 9:1, встряхивают 1 мин. и оставляют для расслоения фаз на 20 - 30 мин. Нижний водный слой переносят в чистую делительную воронку на 250 мл, подкисляют до рН 2,5 с помощью 10%-ной HCl. Из подкисленного водного раствора бенсульфурон-метил экстрагируют 3 раза 30-ю мл хлористого метилена с добавлением 0,25 мл ледяной уксусной кислоты. Для полного разделения фаз используют центрифугирование. Объединенный хлористометиленовый экстракт переносят в колбу-концентратор через воронку с безводным сульфатом натрия и упаривают досуха на вакуумном роторном испарителе при 35 °С. Сухой остаток растворяют в 5 мл дистиллированной воды с рН 10.

Очистка на патроне Диапак С16. Кондиционирование патрона Диапак С16, проводят последовательно промывая его 10 мл метанола, 10 мл дистиллированной воды и 10 мл дистиллированной воды с рН 10. Количественно наносят образец на патрон и промывают его 10 мл дистиллированной воды. Бенсульфурон-метил с патрона элюируют 5 мл метанола. Элюат упаривают досуха на вакуумном роторном испарителе при 35 °С. Сухой остаток перед анализом растворяют в 1 мл подвижной фазы и 50 мкл аликвоту хроматографируют.

Хроматограф "Knauer 2500" с УФ-детектором

Колонка Диасфер-110-С18 размером 4,0 х 250 мм и зернением 5 мкм

Скорость подвижной фазы - 1 мл/мин.

Время удерживания бенсульфурон-метила 14 - 16 мин. (зависит от температуры помещения, если колонка не термостатируется)

Вводимый объем 50 мкл

Содержание бенсульфурон-метила рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.

Всероссийский научно-исследовательский институт фитопатологии.

143050, Московская обл., Одинцовский р-н, п/о Б. Вяземы.

Телефон: 592-92-63.