"МУК 4.1.2063-06. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств триасульфурона в зерне хлебных злаков методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"
(утв. Роспотребнадзором 05.05.2006)

1. Подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Разработчики методов указаны в каждом из них.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.

4. Введены впервые.

Торговое наименование: Дукат.

Фирма-регистрант: ООО НПП "Агрусхим".

Действующее вещество: триасульфурон.

Структурная формула (не приводится).

1-[2-(2-хлорэтокси)фенилсульфонил]-3-(6-метил-4-метокси-1,3,5-триазин-2-ил)мочевина (IUPAC).

2-(2-хлорэтокси-[[(6-метил-4-метокси-1,3,5-триазин-2-ил)амино]карбонил]бензолсульфонамид (CA).

Мол. масса: 401,8.

Растворимость (г/куб. дм): в воде 0,032 (pH 5), 0,815 (pH 7), 13,5 (pH 8,4) при 25 °C;

дихлорметане - 36, ацетоне - 14, этилацетате - 4,3, этаноле - 0,42, толуоле - 0,3, н-октаноле - 0,13, гексане - 0,00004 (25 °C).

Стабилен на воздухе до 140 °C, в нейтральных и щелочных растворах при 25 °C.

Область применения: селективный гербицид, адсорбируется листьями, корнями и быстро попадает в меристему. Используется для контроля широколиственных сорняков на зерновых. Гигиенические нормативы для триасульфурона в России: МДУ в зерне хлебных злаков - 0,1 мг/кг.

2.1.1. Область применения и принцип метода

Настоящий документ устанавливает методику определения остаточных количеств триасульфурона в пробах зерна хлебных злаков в диапазоне концентраций 0,01 - 0,1 мг/кг.

Методика основана на определении триасульфурона методом ВЭЖХ с использованием УФ-детектора после его извлечения из образцов водно-ацетоновой смесью с последующей очисткой перераспределением между двумя несмешивающимися растворителями и на колонке с силикагелем.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Диапазон определяемых концентраций 0,01 - 0,1 мг/кг.

Нижний предел определения триасульфурона в зерне 0,01 мг/кг.

Полнота определения 80% (коэффициент извлечения K = 0,8).

Границы суммарной относительной погрешности результата измерений ДЕЛЬТА +/- 12% при доверительной вероятности P = 0,95 (n = 20).

Полнота определения триасульфурона в зерне зерновых колосовых культур (N = 5 для каждой концентрации):

2.1.3. Избирательность метода

Присутствие других пестицидов, близких по химическому строению и области применения, определению не мешает.

Ацетон, ос.ч., ТУ 6-09-3513-86.

Ацетонитрил для ВЭЖХ, "В-230НМ" или х.ч., ТУ 6-09-3534-87.

Бумажные фильтры "красная лента", ТУ 6.091678-86.

Вода бидистиллированная, деионизированная, ГОСТ 6709-72.

Калий углекислый, х.ч., ГОСТ 4221-76.

Калий фосфорнокислый 2-замещенный, 3-водный, ч.д.а., ГОСТ 2493-75.

Калия перманганат, ГОСТ 20490-75.

Кальция хлорид, х.ч., ГОСТ 4161-77.

Кислота ортофосфорная, имп. (Ferak, Германия) или х.ч., ГОСТ 6552-80; 2 М и 0,005 М водные растворы.

Кислота серная, х.ч., ГОСТ 4204-77.

Трибенурон-метил, аналитический стандарт с содержанием д.в. 98,2% (Sigma-Aldrich).

Натрий двууглекислый, ГОСТ 83-79.

Натрий сернокислый безводный, ч., ГОСТ 4166-76, свежепрокаленный.

Натрия гидроксид, х.ч., ГОСТ 4328-77.

н-Гексан, х.ч., ТУ 2631-003-05807999-98, свежеперегнанный.

Силикагель для колоночной хроматографии 60 (0,040 - 0,063 mm) (Merck, Германия).

Стекловата.

Фосфора пентоксид, ч., МРТУ 6-09-5759-69.

Элюент N 1 для колоночной хроматографии: смесь гексан-этилацетат (50:50, по объему).

Элюент N 2 для колоночной хроматографии: смесь гексан-этилацетат (10:90, по объему).

Этиловый эфир уксусной кислоты, ч.д.а., ГОСТ 22300-76.

Жидкостный хроматограф LC-10A фирмы Shimadzu с УФ-детектором (SPD-10A) или другой с аналогичными характеристиками.

Аналитическая колонка Supelcosil C-18 (150 x 4,6) мм, 5 мкм (Sigma-Aldrich).

Предколонка Supelcosil C-18.

Весы аналитические ВЛА-200, ГОСТ 24104-2001 или аналогичные.

Установка ультразвуковая "Серьга", ТУ 3.836.008.

Мельница лабораторная зерновая ЛМЗ, ТУ 1-01-0593-79.

Ротационный испаритель вакуумный ИР-1М, ТУ 25-11-917-74 или аналогичный.

Бидистиллятор.

PH-метр универсальный ЭВ-74, ГОСТ 22261-76.

Насос водоструйный, МРТУ 42 861-64.

Колбы плоскодонные на шлифах КШ500 29/32 ТС, ГОСТ 10384-72.

Колбы круглодонные на шлифах КШ50 29/32 ТС, ГОСТ 10384-72.

Воронки лабораторные В-75-110, ГОСТ 25336-82.

Воронки делительные ВД-3-500, ГОСТ 8613-75.

Цилиндры мерные на 100, 250 и 1000 куб. см, ГОСТ 1770-74.

Колбы мерные на 25, 50, 100 и 1000 куб. см, ГОСТ 1770-74.

Пипетки на 1, 2, 5, 10 куб. см, ГОСТ 22292-74.

Колонки стеклянные (25 x 1) см.

Допускается применять другое вспомогательное оборудование, материалы и реактивы с техническими и метрологическими характеристиками не хуже указанных.

Отбор проб производится в соответствии с ГОСТ Р 50436-92 (ИСО 950-79) "Зерновые. Отбор проб зерна". Пробы зерна для определения остатков в урожае хранят в бумажной или тканевой упаковке при комнатной температуре. Перед анализом зерно доводят до стандартной влажности и измельчают на лабораторной мельнице.

2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей

Для получения 50% водного ацетона в колбе емкостью 1 куб. дм смешивают 500 куб. см ацетона с 500 куб. см дистиллированной воды, используя мерные цилиндры.

Для приготовления подвижной фазы смешивают ацетонитрил с 0,01 М раствором ортофосфорной кислоты в соотношении 35:65 по объему, используя мерные цилиндры.

Для приготовления элюента N 1 в колбе на 1000 куб. см смешивают 500 куб. см н-гексана и 500 куб. см этилацетата. Для приготовления элюента N 2 в колбе на 1000 куб. см смешивают 100 куб. см н-гексана и 900 куб. см этилацетата.

Приготовление стандартного и градуировочных растворов:

Берут точную навеску триасульфурона (50 мг), переносят в мерную колбу на 100 куб. см, растворяют навеску в ацетонитриле и доводят до метки (стандартный раствор с концентрацией 0,5 мг/ куб. см). Градуировочные растворы с концентрациями 0,2, 0,5, 1,0 и 2,0 мкг/куб. см готовят методом последовательного разбавления по объему, используя раствор подвижной фазы - смесь ацетонитрил - 0,01 М ортофосфорная кислота (35:65, по объему).

Стандартный раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °C в течение 1 месяца, градуировочные растворы - в течение суток.

При изучении полноты определения триасульфурона используют ацетонитрильные растворы вещества. Растворы внесения с концентрациями 0,2 и 2,0 мкг/куб. см готовят из стандартного раствора с концентрацией 0,5 мг/куб. см методом последовательного разбавления по объему ацетонитрилом.

2.5.4. Построение градуировочного графика

Для построения градуировочного графика (площадь пика - концентрация триасульфурона в растворе) в хроматограф вводят по 20 куб. мм градуировочных растворов (не менее 3-х параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4-х точек по диапазону измеряемых концентраций). Затем измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации триасульфурона в градуировочном растворе (мкг/куб. см).

2.5.5. Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта

В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1 см помещают тампон из стекловаты, закрывают кран и вносят суспензию 5 г силикагеля в 30 куб. см смеси гексан-этилацетат (50:50, по объему). Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента. Колонку последовательно промывают 50 куб. см элюента N 2 и 50 куб. см элюента N 1 со скоростью 1 - 2 капли в секунду, после чего она готова к работе.

2.5.6. Проверка хроматографического поведения триасульфурона на колонке с силикагелем

В круглодонную колбу емкостью 10 куб. см отбирают 0,1 куб. см стандартного раствора триасульфурона с концентрацией 10 мкг/куб. см. Отдувают растворитель током теплого воздуха (температура не выше 40 °C), остаток растворяют в 5 куб. см элюента N 1 и наносят на колонку. Колбу обмывают еще 5 куб. см элюента N 1 и также вносят на колонку. Промывают колонку 50 куб. см элюента N 1, затем 100 куб. см элюента N 2 со скоростью 1 - 2 капли в секунду. Отбирают фракции по 10 куб. см каждая, упаривают, остаток растворяют в 1 куб. см подвижной фазы для ВЭЖХ (п. 2.5.3) и анализируют на содержание триасульфурона по п. 2.6.3.

Фракции, содержащие триасульфурон, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 1 куб. см подвижной фазы для ВЭЖХ и вновь анализируют по п. 2.6.3. Рассчитывают содержание триасульфурона в элюате, определяя полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для этого объем элюента.

Примечание: параметры удерживания триасульфурона и сопутствующих коэкстрактивных веществ могут меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.

2.6.1. Определение триасульфурона в зерне

Внимание! Отделение водного слоя следует производить только после полного расслоения жидкостей в делительной воронке.

Объединенный водный экстракт промывают в делительной воронке объемом 500 куб. см дважды гексаном порциями по 50 куб. см (верхний органический слой отбрасывают) и дважды этилацетатом порциями по 50 куб. см (верхний органический слой отбрасывают), встряхивая каждый раз делительную воронку в течение 2 - 3 мин. Водную фазу подкисляют 2 М ортофосфорной кислотой до pH 3 и триасульфурон экстрагируют этилацетатом трижды по 30 куб. см, встряхивая воронку каждый раз по 2 - 3 мин. <*>. Нижний водный слой отбрасывают. Объединенную органическую фазу фильтруют через слой безводного сульфата натрия (2 г), осушитель промывают 10 - 15 куб. см этилацетата. Полученный раствор выпаривают досуха на роторном испарителе при температуре не выше 40 °C. Дальнейшую очистку экстракта проводят по пункту 2.6.2 <**>.

--------------------------------

<*> В случае образования сравнительно стойких эмульсий для сокращения времени расслоения можно добавить в делительную воронку на стадии промывки экстрактов гексаном - небольшое количество (до 10 куб. см) этилового спирта.

<**> В случаях, когда очистка экстрактов контрольных проб (п. 2.6.1) дает удовлетворительные результаты, дополнительную очистку на колонке с силикагелем можно исключить.

2.6.2. Очистка на колонке с силикагелем

Сухой остаток в колбе, полученный при упаривании очищенных по п. 2.6.1 экстрактов зерна, количественно переносят двумя порциями по 5 куб. см смеси гексан-этилацетат (50:50, по объему) в кондиционированную хроматографическую колонку (п. 2.5.5). Промывают колонку 50 куб. см элюента N 1, которые отбрасывают. Триасульфурон элюируют 80 куб. см элюента N 2, собирая элюат в грушевидную колбу емкостью 250 куб. см. Раствор выпаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре не выше 40 °C. Сухой остаток растворяют в 1 куб. см подвижной фазы для ВЭЖХ и 20 куб. мм раствора вводят в жидкостный хроматограф.

2.6.3. Условия хроматографирования

Жидкостный хроматограф LC-10A фирмы Shimadzu с УФ-детектором (SPD-10A) или другой с аналогичными характеристиками.

Рабочая длина волны 223 нм.

Колонка Supelcosil C-18 (150 x 4,6) мм, 5 мкм (Sigma-Aldrich).

Предколонка Waters Symmetry C-18 для защиты аналитической колонки.

Температура колонки 30 +/- 1 °C.

Скорость потока элюента: 1 куб. см/мин.

Время удерживания триасульфурона 8,3 +/- 0,1 мин.

2.6.4. Обработка результатов анализа

Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки, содержание триасульфурона в образце зерна (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

Содержание остаточных количеств триасульфурона в анализируемом образце вычисляют как среднее из 2-х параллельных определений.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор триасульфурона 2 мкг/куб. см, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.

Результаты измерений содержания триасульфурона в образцах зерна представляют в виде:

где ДЕЛЬТА - показатель точности результатов анализа (границы, в которых погрешность любого из совокупности результатов анализа, полученных при реализации методики, находится с принятой вероятностью P = 0,95).

При проведении работы необходимо соблюдать требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1005-88).

При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа и работе с электроустановками соблюдать правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкциями по эксплуатации приборов.

Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91.

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации жидкостного хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 6.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости результатов измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ ИСО 5725-1-6.2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

ВНИИ защиты растений, Санкт-Петербург.