"МУК 4.1.2025-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств Прометрина в зерне гороха, масле сои, кукурузы и подсолнечника методом газожидкостной хроматографии"
(утв. Роспотребнадзором 17.10.2005)

1. Подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.

4. Введены впервые.

Фирма-производитель: Сингента Лимитед.

Торговое название: Гезагард.

Название действующего вещества по ИСО: Прометрин.

Растворимость в органических растворителях (г/л при 20 °С): ацетон - 300,0; гексан - 6,3; этанол - 140,0; толуол - 200,0; н-октанол - 110,0.

Прометрин стабилен в водных растворах в нейтральной, слабощелочной и слабокислой среде, быстро гидролизуется сильными кислотами и щелочами.

Период полураспада в почве в полевых условиях от 14 до 158 дней (в среднем 50 дней). Основным путем разложения вещества в почве является микробиологическое деалкилирование и окисление метилтио-группы.

В России установлены следующие гигиенические нормативы:

ДСД - 0,01 мг/кг/сут.

ПДК в почве - 0,5 (тр.); в воде - 0,002 мг/кг.

ПДК в воздухе рабочей зоны - 5,0, ОБУВ в воздухе атмосферы - 5,0 мг/куб. м.

МДУ в зерне кукурузы, гороха, фасоли, чечевицы, семенах и масле подсолнечника и сои, клубнях картофеля, в тмине, кориандре и чесноке - 0,1.

Область применения: Прометрин - гербицид из группы производных 1,3,5-триазина системного почвенного действия с длительным защитным эффектом, может проникать через листья растений, передвигаясь по ксилеме. Высокоэффективен против малолетних злаковых и двудольных сорняков в период их прорастания в посевах хлопчатника, зернобобовых, подсолнечника, сои, моркови и других зонтичных. Широко используется для приготовления смесевых промышленных препаратов.

Зарегистрирован под торговой маркой Гезагард-50 в России в качестве гербицида для подавления сорняков в посевах подсолнечника, сои, зернобобовых, лекарственных кормовых бобовых культур, моркови и других зонтичных, чеснока, посадках картофеля с нормой расхода 2 - 5 кг/га, однократная обработка.

2.1.1. Принцип метода

Методика основана на определении Прометрина методом газожидкостной хроматографии с использованием термоионного детектора после экстракции веществ органическим растворителем, очистке экстрактов путем перевода соединений в ионизированную форму и последующего перераспределения между двумя несмешивающимися растворителями.

Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Метрологическая характеристика метода приведена в таблицах 1 и 2.

2.1.3. Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых для защиты овощных и полевых культур от вредителей и болезней (хлор- и фосфорорганические пестициды, амиды, тио- и дитиокарбаматы, синтетические пиретроиды).

2.2.1. Реактивы, материалы и растворы

Аналитический стандарт Прометрина с содержанием не менее 95% д.в., фирма Сингента.

Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

Ацетон, ТУ 6-09-3513-86.

Ацетонитрил, ТУ 6-09-3534-87.

Гексан, ТУ 6-09-3375-78.

Гелий очищенный марки "А", ТУ-51-940-80.

Кислота хлороводородная, 0,1 н водный раствор.

Кислота хлороводородная, конц., х.ч., ГОСТ 3118-77.

Натрий сернокислый, безводный, х.ч., ГОСТ 4166-76.

Натрия хлорид, насыщенный водный раствор.

Натрия хлорид, х.ч., ГОСТ 4233-77.

Флоризил для колоночной хроматографии с размером частиц 60 - 80 меш, фирма Мерк, или аналогичный.

Хлороформ, ч., ГОСТ 20015-74.

Этилацетат, ГОСТ 22300-76.

Эфир диэтиловый (для наркоза, Фармакопея СССР).

2.2.2. Посуда и оборудование

Вакуумный ротационный испаритель МР-1М, ТУ 25-11-917-74.

Весы аналитические ВЛА-200, ГОСТ 34104-80Е, или аналогичные.

Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г, ГОСТ 19491-74.

Водоструйный насос, ГОСТ 10696-75.

Воронки делительные 250 мл, 500 мл, ГОСТ 25336-82Е.

Воронки для фильтрования стеклянные, ГОСТ 8613-75.

Встряхиватель механический, ТУ 64-1-1081-73.

Колбы конические плоскодонные на 100 и 250 мл, ГОСТ 10394-72.

Колбы мерные на 25, 50 и 100 мл, ГОСТ 1770-74.

Колонка хроматографическая капиллярная кварцевая НР-5 (5% фенилсиликона + 95% метилсиликона), длина 15 м, внутренний диаметр 0,32 мм, толщина пленки 0,25 мкм, фирма Хьюлетт Пакард, или аналогичная.

Концентраторы грушевидные (конические) 250 мл, ГОСТ 10394-72.

Микрошприц для газового хроматографа на 1 - 10 мкл.

Пипетки мерные на 1; 2,0; 5,0; 10 мл, ГОСТ 20292-74.

Фильтры бумажные "красная лента", ТУ 6-09-2678-77.

Хроматограф газовый "Кристалл 2000м" с термоионным детектором на азот и приспособлениями для капиллярной колонки или другой с аналогичными характеристиками.

Центрифужные банки полипропиленовые с крышками объемом 250 мл, Nalgene, cat. N 3120-0250.

2.3.1. Приготовление стандартных растворов

Взвешивают 50 мг Прометрина в мерной колбе на 50 мл, растворяют навеску в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном. Получают стандартный исходный раствор N 1 с концентрацией 1 мг/мл, который хранят в холодильнике в течение 6 месяцев.

Методом последовательного разведения готовят стандартный раствор N 2 с концентрацией Прометрина 10 мкг/мл в ацетоне, который можно хранить в холодильнике 30 дней.

2.3.2. Построение калибровочного графика

Для построения калибровочного графика из стандартного раствора N 2 готовят методом последовательного разбавления ацетоном стандартные растворы с концентрацией: 4,0; 2,0; 1,0; 0,5; 0,25 мкг/мл. Вводят в хроматограф по 2 - 3 мкл каждого стандартного раствора, измеряют высоту пиков и строят график зависимости высоты пика от концентрации раствора.

2.3.3. Подготовка колонки для очистки экстракта

2.3.3.1. Подготовка колонки с Флоризилом

В стеклянную или пластмассовую колонку длиной 15 см, диаметром 1,5 см помещают на дно стекловату и заполняют колонку Флоризилом на высоту 10 см. На слой Флоризила насыпают слой безводного сернокислого натрия толщиной 1,0 см. За день до очистки экстракта колонку промывают последовательно 20 мл ацетона и 10 мл гексана. После промывки колонка готова к работе.

2.3.3.2. Проверка хроматографического поведения Прометрина на колонках с Флоризилом

При отработке методики или поступлении новой партии сорбента (Флоризил) проводят изучение поведения Прометрина на колонке.

Для этого в концентратор (или пробирку) вносят 1 мл стандартного раствора Прометрина концентрацией 4 мкг/мл, выпаривают растворитель на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °С досуха или в токе теплого воздуха.

Затем растворяют Прометрин в 1 мл смеси растворителей - гексан:ацетон в соотношении 4:1 и наносят его на подготовленную, как указано выше, колонку. Промывают колонку 15 мл гексана, смыв отбрасывают. Затем пропускают через колонку 25 мл смеси гексан:этилацетат в соотношении 3:2, отбирая последовательно по 5 мл элюента. Каждую фракцию собирают отдельно в концентраторы и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °С досуха.

Сухой остаток растворяют в 2 мл ацетона и вводят в хроматограф 1 - 3 мкл. По результатам обнаружения Прометрина в каждой фракции определяют объем смеси гексан:этилацетат, необходимой для полного вымывания Прометрина.

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79). Пробы корнеплодов и зеленой массы хранятся при температуре 0 - 4 °С в течение суток. Для длительного хранения пробы замораживаются и хранятся при температуре -18 °С. Пробы растительного масла хранятся в плотно закрытой стеклянной таре в холодильнике при температуре 0 - 4 °С.

2.5.1. Зерно гороха

2.5.1.1. Экстракция и предварительная очистка

Навеску измельченного зерна гороха массой 25 г помещают в коническую колбу объемом 250 мл и прибавляют в нее 20 мл дистиллированной воды. Колбу встряхивают от руки и выдерживают 10 - 15 мин. для впитывания воды в муку. Затем в колбу наливают 70 мл ацетонитрила и встряхивают ее в течение 30 мин. Экстракт отфильтровывают через воронку с бумажным фильтром в концентратор емкостью 250 мл. Экстракцию повторяют еще 2 раза, используя каждый раз по 50 мл ацетонитрила и встряхивая смесь в течение 30 мин.

Экстракты отфильтровывают и объединяют в концентраторе. Растворитель выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °С досуха. (Упаривание проводить осторожно, т.к. возможно вспенивание ацетонитрила.)

Водный остаток в концентраторе растворяют в 25 мл 0,1 н раствора соляной кислоты и фильтруют через бумажный фильтр в делительную воронку объемом 250 мл. Концентратор еще раз ополаскивают 25 мл 0,1 н раствора соляной кислоты и через фильтр переносят в ту же делительную воронку. Объединенный в делительной воронке раствор промывают смесью гексан:эфир в соотношении 7:1 по объему 2 раза порциями по 20 мл. Сливают из делительной воронки нижний водный слой в химический стакан объемом 100 мл, а смесь гексан:эфир отбрасывают. После промывания водную фазу в стакане подщелачивают 1 н раствором едкого натрия (около 4,5 мл) до pH = 8.

Переносят полученный раствор в делительную воронку и реэкстрагируют Прометрин 3-мя порциями хлороформа по 20 мл каждая. Сливают из делительной воронки каждый раз нижний слой (хлороформ) в концентратор, пропуская его через безводный сульфат натрия. Объединенные экстракты выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °С досуха.

2.5.1.2. Очистка образцов на хроматографической колонке

Сухой остаток в концентраторе, полученный при упаривании хлороформа, растворяют в 1 мл смеси гексан:ацетон в соотношении 4:1 и наносят на колонку. Промывают колонку последовательно 15 мл гексана и 5 мл смеси гексан:этилацетат - 3:2, смывы отбрасывают.

Элюируют Прометрин 15 мл смеси гексан:этилацетат (3:2). Элюат собирают в концентратор и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °С досуха. Сухой остаток разводят в 2 мл ацетона и вводят в хроматограф 1 мкл.

2.5.2. Масло сои, кукурузы и подсолнечника

2.5.2.1. Экстракция и предварительная очистка

Навеску масла 10 г в конической колбе объемом 100 мл разводят 50 мл гексана (при анализе подсолнечного масла используют 30 мл гексана) и тщательно перемешивают. Содержимое колбы переносят в делительную воронку емкостью 250 мл, и обмывают колбу 10 мл ацетонитрила. В воронку добавляют 40 мл ацетонитрила и встряхивают в течение 2 минут. После разделения фаз ацетонитрил сливают в концентратор через безводный сульфат натрия. Экстракцию повторяют еще два раза, используя каждый раз по 50 мл ацетонитрила. Объединенный экстракт в концентраторе упаривают до объема 5 - 10 мл при температуре бани не выше 40° С.

Добавляют в концентратор 50 мл 0,1 н соляной кислоты, перемешивают содержимое и переносят в чистую делительную воронку емкостью 250 мл, обмывая концентратор 10 мл соляной кислоты. К пробе в воронке приливают 30 мл смеси гексан:этиловый эфир в соотношении 7:1. Осторожно встряхивают воронку и после разделения слоев нижний водный слой сливают в стакан емкостью 100 мл, а верхний слой отбрасывают. Водную фазу возвращают в воронку и повторяют операцию еще раз, используя 30 мл смеси гексан:этиловый эфир в соотношении 7:1. Водную фракцию объединяют и подщелачивают 1 н едким натром до pH 7 - 8 (около 4,5 мл).

Прометрин из водной фракции экстрагируют хлороформом 3 раза по 20 мл. Хлороформ сливают в концентратор через безводный сульфат натрия и выпаривают досуха при температуре бани не выше 40 °С.

Пробу в концентраторе разводят в 1 мл смеси гексан:ацетон - 4:1 и наносят на колонку с Флоризилом. Проводят очистку пробы, как указано в разделе 2.5.1.2.

Сухой остаток в концентраторе разводят в 2 мл ацетона и вводят в хроматограф 1 мкл пробы.

2.6.1. Условия хроматографирования

Хроматограф газовый "Кристалл 2000м" с термоионным детектором на азот.

Капиллярная кварцевая колонка НР-5 (5% фенилсиликона + 95% метилсиликона), длина 15 м, внутренний диаметр 0,32 мм, толщина пленки 0,25 мкм.

Температура термостата колонки программированная: начальная температура - 160 °С, выдержка - 2 мин.; нагрев колонки по 35 °С/мин. до 250 °С; выдержка 5 мин.

Регулятор расхода гелия - РРГ-11; режим - Splitless.

Газ 1 - гелий, линейная скорость - 20 см/сек., давление на входе - 27,29 кПа.

Газ 2 - гелий (продувка испарителя), расход - 1,0 мл/мин.; сброс 1:50.

Газ 3 - азот (поддув в детектор), расход во время анализа - 40 мл/мин.

Расход водорода - 16 мл/мин., воздуха - 180 мл/мин.

Абсолютное время удерживания Прометрина - 4 мин. 30 сек.

Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,25 - 4,0 нг.

Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю высоту пика.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией Прометрина 4,0 мкг/мл соответственно, разбавляют.

2.6.2. Обработка результатов анализов

Содержание Прометрина рассчитывают по формуле:

где:

X - содержание Прометрина в пробе, мг/кг;

Sст - высота (площадь) пика стандарта, мВ;

Sпр - высота (площадь) пика образца, мВ;

A - концентрация стандартного раствора, мкг/мл;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;

m - масса анализируемого образца, г;

P - содержание Прометрина в аналитическом стандарте, %.

Необходимо соблюдать требования безопасности при работе в химических лабораториях в соответствии с "Правилами устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемиологического режима и личной гигиены при работе в лечебных и санитарно-эпидемиологических учреждениях системы МЗ СССР" (N 2455-81 от 20.10.81), а также требования, изложенные в документации на приборы.

Московская сельскохозяйственная академия имени К.А. Тимирязева. Учебно-научный консультационный центр "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов".