"МУК 4.1.1965-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств флутриафола в плодах яблони, ягодах и соке винограда методом газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 21.04.2005)

Действующее вещество: флутриафол.

Структурная формула (не приводится).

СА: (+/-)-альфа-(2-фторфенил)-альфа-(4-фторфенил)-1Н-1,2,4-триазол-1-этанол.

Гигиенические нормативы

МДУ (мг/кг) виноград - н.д., яблоки - 0,05*.

Область применения

Фунгицид широкого спектра действия для борьбы с болезнями листа и колоса зерновых культур, также применяется для защиты плодовых, зернобобовых и других культур. Используется для борьбы с почвенными, семенными и аэрогенными инфекциями.

Метод определения флутриафола в винограде и яблоках основан на экстракции пестицида органическими растворителями, очистке перераспределением между двумя несмешивающимися растворителями и, при необходимости, на колонке с флорисилом. Количественное определение проводят методом газожидкостной хроматографии с использованием детектора электронного захвата (ДЭЗ).

Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования. Присутствие других пестицидов, близких по химическому строению и области применения, определению не мешает.

Метрологическая характеристика метода представлена в таблице.

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (от 21.08.79 N 2051-79).

Растворители, используемые для анализа, специальной подготовки не требуют.

Рекомендуется проверить чистоту применяемых растворителей. Для этого 100 мл растворителя упаривают на вакуумном ротационном испарителе до объема 1 мл и хроматографируют. При обнаружении примесей, которые могут мешать определению, растворители очищают общепринятыми методами.

Перед началом анализа колонку, не присоединяя к детектору, кондиционируют в токе инертного газа (азот) при температуре 250 °C в течение 8 - 10 часов.

Для приготовления стандартного раствора с концентрацией 100 мг/мл количественно переносят 20 мг аналитического стандарта флутриафола в мерную колбу на 200 мл и растворяют навеску в ацетоне. Из полученного раствора готовят градуировочные растворы с концентрациями 5, 10, 25, 50 мкг/мл методом последовательного разбавления ацетоном.

Для внесения в образец при определении полноты извлечения используют соответствующий стандартный раствор флутриафола в ацетоне.

Для построения градуировочного графика зависимости высоты (площади) пика от концентрации флутриафола в растворе в хроматограф вводят по 1 мкл градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют высоты или площади пиков и строят график зависимости среднего значения высоты, мм, (площади, мВ х с) пика от концентрации флутриафола в градуировочном растворе (мкг/мл).

В нижнюю часть колонки помещают тампон из стекловаты, затем слой 0,5 см безводного сульфата натрия и заполняют через воронку суспензией 5 г флорисила в 25 мл гексана при открытом кране колонки. Затем вносят слой 1 см безводного сульфата натрия и подключают выход колонки к водоструйному насосу для уплотнения слоя сорбента. После этого колонку промывают 15 мл гексана, затем смесью гексан-ацетон в соотношении 2:3 и закрывают кран, когда уровень растворителя достигнет верхнего края сорбента. Колонка готова к работе.

В подготовленную колонку пипеткой вносят 1 мл стандартного раствора флутриафола и дают впитаться. После этого вносят 10 мл смеси гексан-ацетон (2:3), элюат отбрасывают. Элюирование флутриафола проводят 40 мл смеси гексан-ацетон (1:5), отбирая фракции по 5 мл, упаривают досуха, остаток растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют фракции, содержащие флутриафол, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют. Рассчитывают содержание флутриафола в элюате, определяют полноту извлечения препарата из колонки и необходимый для этого объем элюирующей смеси.

Примечание: профиль вымывания флутриафола может измениться при использовании флорисила другой партии.

Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями стандартов и технической документации.

2.6.1.1. Плоды яблони. Навеску измельченных плодов 50 г помещают в коническую колбу объемом 250 мл и экстрагируют флутриафол 150 мл ацетона на ультразвуковой установке в течение 15 мин. Надосадочную жидкость фильтруют через складчатый фильтр "красная лента" в делительную воронку объемом 1000 мл. Экстракцию повторяют дважды порциями по 100 мл ацетона. После третьей экстракции осадок переносят на фильтр, колбу ополаскивают 20 мл ацетона и вносят в делительную воронку через фильтр с осадком. К объединенному экстракту добавляют 100 мл дистиллированной воды и промывают 20 мл гексана, встряхивая делительную воронку в течение 2 мин. После полного разделения слоев верхний гексановый слой отбрасывают и промывку повторяют дважды порциями по 20 мл гексана. Промытый гексаном водно-ацетоновый экстракт концентрируют на роторном испарителе до объема 130 - 150 мл и переносят в делительную воронку, ополаскивая концентратор. Переэкстрагируют флутриафол в хлористый метилен трижды порциями по 50 мл, встряхивая воронку в течение 2 мин. Нижний органический слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия, затем промывают осушитель 10 мл хлористого метилена. Объединенный дихлорметановый экстракт упаривают досуха и проводят очистку на колонке с флорисилом по п. 2.6.2.

2.6.1.2. Ягоды винограда. Навеску размолотых ягод 50 г помещают в коническую колбу объемом 500 мл и экстрагируют флутриафол 150 мл ацетона на ультразвуковой установке в течение 15 мин. Экстракт фильтруют через складчатый фильтр "красная лента" в делительную воронку объемом 1000 мл. Экстракцию повторяют дважды порциями экстрагента по 150 мл, после чего остаток переносят на фильтр, колбу и осадок промывают 20 - 30 мл ацетона. К объединенному экстракту в делительную воронку добавляют 20 мл гексана и встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения фаз 90% нижнего водно-ацетонового слоя отделяют. После этого эмульсию пограничного слоя разбивают внесением в него малого количества хлористого натрия. Остатки водно-ацетонового слоя собирают, гексановый слой отбрасывают. Объединенный водно-ацетоновый экстракт упаривают на роторном испарителе до объема 150 - 180 мл и переносят в делительную воронку. Флутриафол переэкстрагируют в хлористый метилен трижды порциями по 50 мл, встряхивая делительную воронку в течение 2 мин. Нижние органические слои собирают, фильтруя через безводный сульфат натрия. Объединенный экстракт выпаривают досуха на роторном испарителе. Далее проводят очистку на колонке с флорисилом по п. 2.6.2.

2.6.1.3. Сок винограда. 50 мл сока помещают в делительную воронку объемом 500 мл, добавляют 50 мл смеси гексан-ацетон в соотношении 1:9 и встряхивают в течение 2 - 3 мин. Гексановый слой отбрасывают. К собранному водно-ацетоновому слою добавляют 5 мл гексана и интенсивно встряхивают в делительной воронке. После полного разделения фаз собирают водно-ацетоновый слой, гексановый слой отбрасывают. Объединенный экстракт переносят в чистую делительную воронку, добавляют 25 - 30 мл дистиллированной воды и переэкстрагируют флутриафол в хлористый метилен трижды порциями по 50 мл. Дихлорметановый экстракт фильтруют через безводный сульфат натрия и выпаривают досуха на роторном испарителе. Далее проводят очистку на колонке с флорисилом по п. 2.6.2.

Сухой остаток растворяют в 2 мл смеси гексан-ацетон (3:2). Пипеткой количественно вносят анализируемую пробу в хроматографическую колонку. Колбу ополаскивают еще 2 мл той же смеси и раствор вносят в хроматографическую колонку, затем открывают кран и дают раствору впитаться в сорбент. После этого в колонку вносят 10 мл смеси гексан-ацетон в соотношении 2:3, элюат отбрасывают. Флутриафол элюируют 10 мл смеси гексан-ацетон в соотношении 1:5, элюат собирают и выпаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют.

Газовый хроматограф "Кристалл 2000М" с ДЭЗ или аналогичный.

Колонка кварцевая капиллярная 30 м х 0,32 мм с неподвижной фазой НР-1 (0,25 мкм).

Температура колонки программируется от 200 °C (4 мин.) до 220 °C со скоростью 10 °C/мин.

Температура испарителя 250 °C, детектора 280 °C.

Скорость газа-носителя (азот) через колонку 3 куб. см/мин.

Объем вводимой пробы 2 мкл.

Время удерживания флутриафола 10 мин. 29 +/- 2 с.

Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки, содержание флутриафола в пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

Концентрацию флутриафола в анализируемом образце вычисляют как среднее из 2 параллельных определений.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор флутриафола 50 мкг/мл, разбавляют.

При проведении работы необходимо соблюдать требования инструкции "Основные правила безопасной работы в химической лаборатории", общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, а также инструкции по эксплуатации газового хроматографа и электрооборудования до 400 В.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости результатов измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-2003. "ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа".

Долженко В.И., Цибульская И.А., Карпова Л.М.

Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений, г. Санкт-Петербург.