"МУК 4.1.1973-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств эпоксиконазола в ботве и корнеплодах сахарной свеклы методом газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 21.04.2005)

Действующее вещество: эпоксиконазол.

(2RS,3SR)-1-[3-(2-хлорфенил)-2,3-эпокси-2-(4-фторфенил)пропил]-1H-1,2,4-триазол(ИЮПАК).

цис-1-[[3-(2-хлорфенил)-2-(4-фторфенил)оксиранил]метил]-1H-1,2,4-триазол(С.А.).

Структурная формула (не приводится).

Молекулярная масса: 329,8.

Бесцветное кристаллическое вещество без запаха.

Температура плавления: 136,2 °C.

Давление паров при 20 °C: менее 0,01 мПа.

Растворимость (г/л) при 20 °C: ацетон - 144, дихлорметан - 291, н-гептан - 0,4; вода - 6,6 мг/л.

Вещество стабильно при нормальных условиях хранения, не гидролизуется в водном растворе при различных значениях температуры и pH.

Краткая токсикологическая характеристика

Эпоксиконазол нетоксичен для пчел, дождевых червей, птиц, дафний и водорослей.

Гигиенические нормативы

МДУ в сахарной свекле 0,1 мг/кг.

Область применения препарата

Эпоксиконазол - системный фунгицид широкого спектра действия из класса триазолов. Высокоэффективен против возбудителей ржавчины, мучнистой росы, пятнистостей листьев и колоса зерновых культур.

2.1.1. Принцип метода

Методика основана на газохроматографическом определении эпоксиконазола на неподвижной фазе SE-30 с использованием электронозахватного детектора (ЭЗД) после экстракции его из растительного материала водным ацетоном, очистки экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и на колонке с силикагелем.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

2.1.2. Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых в интенсивной технологии выращивания сахарной свеклы.

2.1.3. Метрологическая характеристика метода

Отбор образцов проводится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79).

Отобранные пробы ботвы и корнеплодов хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более двух дней; при длительном хранении (не более трех месяцев) пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре -18 °C. Перед анализом ботву и корнеплоды измельчают и отбирают усредненную пробу.

2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей

Органические растворители перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Гексан встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока свежая порция кислоты не перестанет окрашиваться. Затем растворитель последовательно промывают водой, 2,5%-м раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего сушат над гидроксидом натрия и перегоняют.

Этилацетат промывают равным объемом 5%-го раствора двууглекислого натрия, сушат над хлористым кальцием и перегоняют.

Силикагель I степени активности встряхивают с двойным объемом очищенного ацетона и затем фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Силикагель на фильтре промывают 1,5 объемом ацетона и затем высушивают при температуре 150 °C в течение 3 ч.

2.5.2. Подготовка и кондиционирование колонки

Готовую насадку (3% SE-30 на Хромосорбе W/HP) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостат хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота при температуре 270 °C в течение 8 - 10 ч.

2.5.3. Приготовление стандартных растворов

Основной стандартный раствор эпоксиконазола с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г препарата, содержащего 99,8% д.в., в ацетоне в мерной колбе емкостью 100 мл. Раствор хранят в холодильнике не более месяца.

Рабочие растворы с концентрациями 0,05; 0,1; 0,25 и 0,5 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора эпоксиконазола соответствующим последовательным разведением ацетоном. Рабочие растворы хранят в холодильнике не более недели.

2.5.4. Построение калибровочного графика

Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 2 мкл рабочего стандартного раствора эпоксиконазола с концентрацией 0,05; 0,1; 0,25 и 0,5 мкг/мл. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение площади хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости площади хроматографического пика в мВ х с от концентрации эпоксиконазола в растворе в мкг/мл.

2.5.5. Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта

В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 0,8 см вставляют тампон из стекловаты, закрывают кран и вносят суспензию 5 г силикагеля в 10 мл гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку последовательно промывают 20 мл смеси гексан - ацетон (8:2, по объему) и 20 мл гексана со скоростью 1 - 2 капли в с, после чего она готова к работе.

2.5.6. Проверка хроматографического поведения эпоксиконазола на колонке с силикагелем

В круглодонную колбу емкостью 10 мл отбирают 1 мл стандартного раствора эпоксиконазола с концентрацией 1 мкг/мл. Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 3 мл смеси гексан - ацетон (8:2, по объему) и наносят на колонку. Промывают колонку 50 мл смеси гексан - ацетон (8:2) и затем 40 мл смеси гексан - ацетон (6:4) со скоростью 1 - 2 капли в с. Отбирают фракции по 10 мл каждая, упаривают досуха, остаток растворяют в 2 мл этилацетата и анализируют на содержание эпоксиконазола по п. 2.7.1.

Фракции, содержащие эпоксиконазол, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 4 мл этилацетата и вновь анализируют по п. 2.7.1. Рассчитывают содержание эпоксиконазола в элюате, определяют полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для очистки экстракта объем элюента.

Примечание. Профиль вымывания эпоксиконазола может меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.

2.6.1. Экстракция эпоксиконазола и очистка экстракта

К навеске (25 г) измельченной ботвы или корнеплодов добавляют 100 мл смеси ацетон - вода (80:20, по объему), гомогенизируют 3 мин. при 10000 об./мин. Добавляют 2 г целита и фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу емкостью 250 мл. Осадок на фильтре промывают 50 мл смеси ацетон - вода (80:20). Из объединенного экстракта отбирают аликвоту раствора (около 32 мл), эквивалентную 5 г растительного материала, и упаривают ее до водной фазы на роторном вакуумном испарителе при температуре 40 °C. Водный остаток переносят в делительную воронку емкостью 100 мл, приливают 15 мл насыщенного раствора хлорида натрия и 30 мл гексана и содержимое встряхивают в течение 1 мин. После разделения слоев отделяют гексановую фазу и собирают ее в колбу емкостью 100 мл. Оставшуюся водную фазу обрабатывают гексаном еще два раза (по 30 мл). Объединенный гексановый экстракт фильтруют через слой безводного сульфата натрия в грушевидную колбу емкостью 200 мл и затем упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °C. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 2.6.2.

2.6.2. Очистка на колонке с силикагелем

Остаток в колбе, полученный при упаривании экстракта растительного материала из п. 2.6.1, количественно переносят тремя 1-мл порциями смеси гексан - ацетон (8:2) в подготовленную хроматографическую колонку (п. 2.5.5). Промывают колонку 40 мл элюента N 1, элюат отбрасывают. Эпоксиконазол элюируют 30 мл элюента N 2, собирая элюат в грушевидную колбу емкостью 100 мл. Полученный раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °C. Сухой остаток растворяют в 5 мл этилацетата и анализируют на содержание эпоксиконазола по п. 2.7.1.

2.7.1. Метод ГЖХ с насадочными колонками

Колонка хроматографическая стеклянная, 1500 х 3 мм; неподвижная фаза - 3% SE-30 на Хромосорбе W/HP (0,12 - 0,15 мм).

Температура детектора - 320 °C, испарителя - 270 °C, термостата колонки - 230 °C.

Скорость потока газа-носителя (азота) - 40 мл/мин.

Объем вводимой пробы - 2 мкл.

Время удерживания эпоксиконазола - 2 мин. 10 с.

Предел детектирования - 0,1 нг.

Линейный диапазон детектирования - 0,1 - 1,0 нг.

Альтернативная фаза: 3% OV-17 на Хромосорбе W/HP (0,12 - 0,15 мм), хроматографическая колонка 1500 х 3 мм; температура детектора - 320 °С, инжектора - 270 °C, термостата колонки - 255 °C.

Время удерживания эпоксиконазола - 3 мин. 25 с.

Каждую анализируемую пробу вводят три раза и вычисляют среднюю площадь пика.

Образцы, дающие пики, большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,5 мкг/мл, разбавляют этилацетатом.

2.7.2. Метод ГЖХ с капиллярными колонками

Колонка капиллярная кварцевая ZB-1, 30 м х 0,32 мм х 0,5 мкм (SE-30).

Температура термостата испарителя - 270 °C, детектора - 320 °C, термостата колонки по следующей программе: 170 °C - 2 мин.; 25 °C/мин. до 250 °C; выдержка - 10 мин.

Газовый режим: газ-носитель - азот, общий расход - 22,5 мл/мин.; газ для поддува в детектор - азот, расход - 19,3 мл/мин.

Деление потока: 1:6.

Абсолютное время удерживания эпоксиконазола: 9 мин. 10 с.

Объем вводимой пробы - 1 мкл.

Линейный диапазон детектирования: 0,025 - 0,5 нг.

Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю площадь пика.

Образцы, дающие пики, большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,2 мкг/мл, разбавляют этилацетатом.

Содержание эпоксиконазола рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

Соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с легко воспламеняющимися жидкостями, токсичными веществами, электронагревательными приборами, сосудами, работающими под вакуумом.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа.

Назарова Т.А., Микитюк О.Д., Л.В. Дубовая, А.М. Макеев, ВНИИ фитопатологии, 143050, Московская обл., п/о Большие Вяземы, тел.: 592-92-20.