"МУК 4.1.1909-04. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств Пиримифос-метила в ягодах и масле облепихи"
(утв. Минздравом России 01.01.2004)

1. Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.

4. Введены впервые.

Фирма-производитель: ООО "Сингента".

Торговое название: Актеллик.

Название действующего вещества по ИСО: Пиримифос-метил.

Название по ИЮПАК: O-2-диэтиламино-6-метилпиримидин-4-ил-O,O-диметил-фосфоротиоат.

Структурная формула: (не приводится).

Молекулярная масса: 305,3.

Химически чистый Пиримифос-метил представляет собой жидкость соломенного цвета.

Давление паров: 2 мПа при 20 °С, 15 мПа при 30 °С.

Растворимость в воде: 9,9 (pH 5,2), 8,6 (pH 7,3), 9,3 (pH 9,3) мг/л при 30 °С. Хорошо растворим в большинстве органических растворителей: спиртах, кетонах, эфирах, хлорированных углеводородах.

В ягодах и шампиньонах остаточные количества Пиримифос-метила не допускаются.

Область применения препарата: Пиримифос-метил - инсектицид и акарицид контактного и фумигационного действия из группы эфиров тиофосфорной кислоты, ингибиторов ацетилхолинэстеразы, обладающий глубинным эффектом и непродолжительным защитным действием. Высокоэффективен против сосущих, минирующих и грызущих насекомых, а также подвижных стадий клещей.

Зарегистрирован в России под торговым названием Актеллик, к.э. (500 г/л), для применения на пшенице и рисе, горохе, сахарной свекле, картофеле, кормовых бобовых, овощных и бахчевых культурах открытого и защищенного грунта, на плантациях винограда, ягодных, лекарственных и декоративных культур с нормой расхода препарата от 0,3 - 5,0 л/га (до 3-х обработок за сезон).

2.1.1. Принцип метода

Методика основана на определении Пиримифос-метила методом газожидкостной хроматографии с использованием термоионного детектора после его экстракции из растительных проб ацетонитрилом, переэкстракции в гексан и очистки на колонках с Флоризилом.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

2.1.2. Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых при возделывании вышеупомянутых культур.

2.1.3. Метрологическая характеристика метода

Метрологическая характеристика метода представлена в таблицах 1 - 3.

2.2.1. Реактивы, материалы и растворы

Пиримифос-метил, аналитический стандарт с содержанием д.в. 99,6%.

Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

Ацетон, ГОСТ 2603-79.

Ацетонитрил, ТУ 6-09-3534-87.

Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-72.

н-Гексан, ч., ТУ 6-09-3375-78.

Натрий хлористый, х.ч., ГОСТ 4233-77.

Натрий сернокислый, безводный, х.ч., ГОСТ 4166-76.

Флоризил для колоночной хроматографии, зернение 60/100 меш, фирмы Флюка.

Эфир диэтиловый, х.ч., ГОСТ 6225-74.

2.2.2. Приборы, аппаратура, посуда

Аппарат для встряхивания, ТУ 64-1-1081-73, или аналогичный.

Баня водяная, ТУ 46-22-603-75.

Банки с крышками для экстракции на 250 мл, полипропилен, кат. N 3120-0250, NALGENE.

Весы аналитические ВЛА-200, ГОСТ 34104-80Е, или аналогичные.

Воронки делительные на 250 мл, ГОСТ 23336-82.

Воронки для фильтрования стеклянные, ГОСТ 8613-75.

Испаритель ротационный вакуумный ИР-1М, ТУ 25-11-917-74, или аналогичный.

Колбы конические плоскодонные на 250 мл КПШ-250, ГОСТ 10394-72.

Колбы мерные на 10, 25, 50, 100 мл, ГОСТ 1770-74.

Колонки пластиковые для адсорбционной хроматографии длиной 15 см, диаметр 1,5 см.

Колонка газохроматографическая капиллярная кварцевая DB-1701 длиной 15 м с внутренним диаметром 0,32 мм, толщина пленки 0,25 мкм.

Концентраторы грушевидные на 100 и 250 мл НШ29 КГУ-100 (250), ГОСТ 10394-72.

Микрошприц на 10 мкл, ТУ Е-2.833.0.24.

Насос водоструйный, ГОСТ 10696-75.

Пипетки мерные на 1,0; 2,0 и 5,0 мл, ГОСТ 20292-74.

Стаканы химические на 100 мл, ГОСТ 25336-82Е.

Фильтры бумажные "Красная лента", ТУ 6-09-1678-86.

Цилиндры мерные емкостью 25, 50 и 100 мл, ГОСТ 1770-74.

2.3.1. Подготовка и кондиционирование колонок для газожидкостной хроматографии

Колонку устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе гелия при температуре на 20 °С ниже предельного значения для выбранной неподвижной фазы в течение 8 - 10 часов.

2.3.2. Приготовление стандартных растворов

Взвешивают 50 мг Пиримифос-метила в мерной колбе на 50 мл, растворяют навеску в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном (стандартный раствор N 1, концентрация 1 мг/мл). Стандартный раствор N 1 можно хранить в холодильнике в течение 6 месяцев.

Методом последовательного разбавления готовят стандартные растворы Пиримифос-метила в ацетоне с концентрацией 0,25; 0,5; 1,0; 2,5 мкг/мл для построения калибровочного графика и внесения в контрольный образец.

Подобным образом готовят раствор Пиримифос-метила в гексане с концентрацией 1,0 мкг/мл для проверки хроматографического поведения аналитического стандарта на колонке с Флоризилом.

2.3.3. Подготовка колонки с Флоризилом

В пластмассовую колонку длиной 15 см, диаметром 1,5 см помещают на дно чистую стекловату и заполняют колонку 5 г Флоризила 60/100 меш, уплотняя его путем вибрации колонки. На слой Флоризила наносят слой безводного сернокислого натрия толщиной 1 см. За день до определения Флоризил в колонке промывают 20 мл смеси гексан:эфир - 1:1, а в день определения - 10 мл гексана.

2.3.4. Проверка хроматографического поведения Пиримифос-метила на колонке

В подготовленную колонку вносят 1 мл стандартного раствора Пиримифос-метила в гексане с концентрацией 1,0 мкг/мл (раздел 2.3.2) и 4 мл гексана. Колонку промывают 5 мл гексана. Смыв отбрасывают. После этого пропускают через колонку 4 - 5 порций смеси гексан:эфир (1:1) по 5 мл каждая, собирая их в отдельные концентраторы. Собранные фракции выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и вводят в хроматограф 1 мкл пробы. Фракции, содержащие Пиримифос-метил, объединяют, выпаривают досуха. Сухой остаток вновь растворяют в 1 мл ацетона и вводят в хроматограф 1 мкл пробы. Рассчитывают содержание вещества в элюате, определяют полноту смыва с колонки и необходимый для очистки объем элюата.

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79). Пробы ягод облепихи хранят в запаянных пластиковых пакетах в замороженном виде, пробы масла хранят в плотно закрытой стеклянной или пластиковой таре в холодильнике.

2.5.1. Ягоды

Навеску измельченного материала 10 г помещают в пластиковую банку с крышкой емкостью 250 мл и заливают 50 мл ацетонитрила. Встряхивают 30 минут. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в концентратор емкостью 250 мл. Экстракцию повторяют еще два раза, заливая пробу 30 мл ацетонитрила и встряхивая каждый раз по 15 минут. Экстракты отфильтровывают в тот же концентратор. Объединенный фильтрат упаривают до объема 5 - 10 мл при температуре не выше 40 °С.

Остаток разводят 100 мл 2%-ого водного раствора хлористого натрия, обмывают стенки концентратора и переносят его содержимое в делительную воронку емкостью 250 мл. Добавляют в делительную воронку 30 мл гексана и экстрагируют Пиримифос-метил, встряхивая воронку 1 - 2 минуты. После разделения слоев нижний водный слой сливают в стакан, а верхний гексановый слой собирают в чистый концентратор, пропуская через безводный сульфат натрия. Экстракцию повторяют еще два раза, используя каждый раз 30 мл гексана и собирая гексан в тот же концентратор. Объединенные экстракты выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 40 °С. Сухой остаток в концентраторе растворяют в 5 мл гексана и проводят очистку пробы на колонке с Флоризилом.

2.5.1.1. Очистка на колонках с Флоризилом

В подготовленную (как указано в разделе 2.3.3) колонку с Флоризилом переносят содержимое концентратора. Концентратор ополаскивают 5 мл гексана и пропускают гексан через колонку. Смыв отбрасывают. Пиримифос-метил элюируют 15 мл смеси гексан:эфир - 1:1. Экстракт собирают в чистый концентратор и выпаривают его досуха на ротационном вакуумном испарителе. Сухой остаток разводят в 2 мл ацетона и вводят в хроматограф 1 мкл пробы.

2.5.2. Масло

Навеску масла 5 г помещают в стеклянный стакан емкостью 100 мл и разводят в 50 мл гексана. Содержимое стакана переносят в делительную воронку емкостью 250 мл. Добавляют в воронку 100 мл ацетонитрила, подогретого до температуры 40 °С, и встряхивают 2 минуты. После разделения фаз нижний ацетонитрильный слой сливают в коническую колбу, а верхний слой оставляют в делительной воронке. Добавляют туда 50 мл подогретого ацетонитрила и встряхивают 2 минуты. Ацетонитрильный экстракт сливают в ту же колбу. Экстракцию повторяют еще раз с тем же объемом ацетонитрила.

Объединенный ацетонитрильный экстракт переносят в чистую делительную воронку, добавляют туда 30 мл гексана и промывают ацетонитрил, встряхивая воронку 1 - 2 минуты. После разделения фаз нижний ацетонитрильный слой отфильтровывают в концентратор через безводный сульфат натрия. Гексановую фракцию промывают 25 мл ацетонитрила, ацетонитрил сливают в тот же концентратор. Гексан отбрасывают. Объединенный ацетонитрильный экстракт выпаривают досуха.

Сухой остаток в концентраторе разводят в 5 мл гексана и переносят на колонку с Флоризилом. Далее проводят очистку пробы на колонке, как указано в разделе 2.5.1.1. Очищенную пробу растворяют в 2 мл ацетона и вводят в хроматограф 1 мкл пробы.

2.6.1. Условия хроматографирования

Колонка капиллярная кварцевая DB-1701 длиной 15 м с внутренним диаметром 0,32 мм, толщина пленки 0,25 мкм.

Режим работы

Температура термостата колонки программированная. Начальная температура - 160 °С, выдержка 2 минуты; нагрев колонки по 15 градусов в минуту до температуры 230 °С, выдержка 5 минут; нагрев колонки по 30 градусов в минуту до температуры 250 °С.

Газовый режим - Splitless.

Газ-носитель - гелий (Г1). Тип регулятора расхода гелия - РРГ 11, линейная скорость - 21 см/сек., давление на входе 28,66 кПа.

Газ 2 (Г2) - гелий (продувка испарителя), расход 1,0 мл/мин., сброс 1:30.

Газ 3 (ГЗ) - азот (поддув в детектор), расход во время анализа - 35 мл/мин.

Продувка системы после анализа при температуре 250 °С в течение 3 минут: продувка испарителя гелием - 55 мл/мин.; продувка детектора азотом - 55 мл/мин.

Абсолютное время удерживания Пиримифос-метила - 6 мин. 41 сек.

Температура испарителя - 260 °С, детектора - 350 °С.

Расход водорода - 15 мл/мин.; расход воздуха - 180 мл/мин.

Объем вводимой пробы - 1 мкл.

Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,25 - 2,5 нг.

2.6.2. Обработка результатов анализов

Содержание Пиримифос-метила в пробах ягод и масла облепихи рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.

Московская сельскохозяйственная академия имени К.А. Тимирязева. Учебно-научный консультационный центр "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов".