"МУК 4.1.1808-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств флукарбазона в воде, почве, зерне и соломе зерновых колосовых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"
(утв. Минздравом России 18.12.2003)

1. Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (проф. Т.В. Юдина), Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева (проф. В.А. Калинин) при участии Департамента госсанэпиднадзора Минздрава России (гл. специалист А.П. Веселов), под редакцией член-корр. РАМН В.В. Ракитского.

2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Минздраве России (прот. N 20 от 2 декабря 2003 г.).

3. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко 18 декабря 2003 г.

4. Введены впервые.

Фирма регистрант: Арвеста Корп.

Торговое наименование: Эверест.

Действующее вещество: флукарбазон-натрий.

Структурная формула (не приводится).

4,5-Дигидро-4-метил-3-метокси-5-оксо-N{[(2-трифторметокси)фенил]сульфонил}-1Н-1,2,4-триазол-1-карбоксамида Na-соль

Мол. масса: 418,3.

Растворимость в воде: 44 г/л (рН 4 - 9, 20 °С).

Оральная токсичность для крыс > 5000 мг/кг, ингаляционная токсичность > 5,13 мг/кг.

Область применения: послевсходовый гербицид системного действия, используется на зерновых против некоторых групп злаковых сорняков (овсюг, щетинник зеленый и др.). Гигиенические нормативы для флукарбазона в России не установлены.

2.1.1. Принцип метода

Методика основана на определении флукарбазона методом ВЭЖХ с использованием УФ детектора после его извлечения из образцов органическим растворителем и очистке путем перераспределения между двумя жидкими фазами.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Метрологические характеристики метода представлены в таблицах 1 и 2.

2.1.3. Избирательность метода

Присутствие других пестицидов, близких по химическому строению и области применения, определению не мешает.

Флукарбазон, аналитический стандарт с содержанием д.в. 98,2%.

Ацетонитрил для ВЭЖХ, "В-230НМ" или х.ч., ТУ 6-09-3534-87.

Кислота ортофосфорная, имп. (Ferak, Германия) или х.ч., ГОСТ 6552-80; 2М и 0,015М водные растворы.

Натрий сернокислый безводный, ч.д.а., ГОСТ 4166-76, свежепрокаленный.

Вода бидистиллированная деионизированная, ГОСТ 6709-79.

Ацетон, о.с.ч., ТУ 6-09-3513-86.

н-Гексан, ч., ТУ 6-09-3375-78, свежеперегнанный.

Дихлорметан, х.ч., ТУ 6-09-3716-80.

Калий фосфорнокислый двузамещенный, 3-водный, ч.д.а., ГОСТ 2493-75, 0,1М водный раствор.

Бумажные фильтры "красная лента", ТУ 6.091678-86.

Стекловата.

Жидкостный хроматограф "Альянс" фирмы "Waters" с УФ-детектором (Waters 2487), снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки или аналогичный.

Колонка Symmetry - С18 (250 х 4,6) мм, зернение 5 мкм (Waters, USA) или аналогичная.

Предколонка Waters Symmetry С-18.

Весы аналитические ВЛА-200, ГОСТ 34104-80Е или аналогичные.

Установка ультразвуковая "Серьга", ТУ 3.836.008.

Мельница ножевая РМ-120 и лабораторная зерновая ЛМЗ, ТУ 1-01-0593-79.

Ротационный испаритель вакуумный ИР-1М, ТУ 25-11-917-74 или аналогичный.

Бидистиллятор.

рН-метр универсальный ЭВ-74, ГОСТ 22261-76.

Насос водоструйный, МРТУ 42 861-64.

Колбы плоскодонные на шлифах КШ500 29/32 ТС, ГОСТ 10384-72.

Колбы круглодонные на шлифах КШ50 29-32 ТС, ГОСТ 10384-72.

Воронки лабораторные В-75-110, ГОСТ 25336-82.

Воронки делительные ВД-3-500, ГОСТ 8613-75.

Цилиндры мерные на 100, 250 и 1000 куб. см, ГОСТ 1774-74.

Колбы мерные на 25, 50, 100 и 1000 куб. см, ГОСТ 1770-74.

Пипетки на 1, 2, 5, 10 куб. см, ГОСТ 22292-74.

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79). Пробы зерна и соломы для определения остатков в урожае хранят в бумажной или тканевой упаковке при комнатной температуре. Для длительного хранения пробы почвы подсушиваются при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение года. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм, зерно и солому измельчают на лабораторной мельнице.

2.5.1. Кондиционирование колонки

Перед началом анализа колонку Symmetry - С18 кондиционируют в потоке подвижной фазы (1 мл/мин.) до стабилизации нулевой линии в течение 1 - 2 часов.

2.5.2. Приготовление растворов

Приготовление стандартного и градуировочных растворов:

Берут точную навеску флукарбазона (50 мг), переносят в мерную колбу на 100 мл, растворяют навеску в ацетонитриле и доводят до метки (стандартный раствор с концентрацией 0,5 мг/мл). Градуировочные растворы с концентрациями 0,1, 0,2, 0,4, 0,8 и 1,6 мкг/мл готовят методом последовательного разбавления по объему, используя раствор подвижной фазы (смесь ацетонитрил:0,015М ортофосфорная кислота (45:55, по объему). Стандартный раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °С в течение 1 месяца, градуировочные растворы - в течение суток.

При определении полноты извлечения для внесения в контрольный образец используют стандартный раствор флукарбазона, разбавленный до нужной концентрации ацетонитрилом.

2.5.3. Построение градуировочного графика

Для построения градуировочного графика (площадь пика - концентрация флукарбазона в растворе) в хроматограф вводят по 20 мкл градуировочных растворов (не менее 3-х параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4-х точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации флукарбазона в градуировочном растворе (мкг/мл).

2.5.4. Подготовка приборов и средств измерения

Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями стандартов и технической документации.

2.6.1. Определение флукарбазона в воде

Сухой остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и 20 мкл раствора вводят в жидкостный хроматограф.

2.6.2. Определение флукарбазона в почве

Образец воздушно-сухой почвы массой 50 г помещают в коническую колбу емкостью 250 мл с притертой пробкой, добавляют 100 мл 90%-го водного ацетона и экстрагируют в течение 15 мин. на ультразвуковой бане. Суспензию фильтруют на стеклянной воронке через бумажный фильтр "красная лента". Экстракцию повторяют с 50 мл 90%-ного водного ацетона. Объединенные экстракты упаривают до водного остатка (10 - 15 мл) на роторном испарителе при температуре не выше 40 °С.

2.6.3. Определение флукарбазона в соломе и зерне зерновых колосовых культур

Навеску измельченной на ножевой мельнице соломы (5 г) или размолотого на лабораторной мельнице зерна (20 г) помещают в коническую колбу емкостью 250 мл и экстрагируют флукарбазон 75 мл хлористого метилена на ультразвуковой установке в течение 15 мин. Суспензию фильтруют через бумажный фильтр "красная лента". Экстракцию повторяют дважды порциями по 50 мл. Объединенный экстракт концентрируют на роторном испарителе при температуре 40 °С до объема 20 - 25 мл.

2.6.4. Условия хроматографирования

Жидкостный хроматограф "Альянс" фирмы "Waters" с УФ-детектором (Waters 2487), снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки или другой с аналогичными характеристиками.

Колонка Symmetry - С18 (250 х 4,6) мм, зернение 5 мкм (Waters, USA) или аналогичная.

Температура колонки 25 °С.

Предколонка Waters Symmetry С-18 для защиты аналитической колонки.

Подвижная фаза: ацетонитрил - 0,015М раствор ортофосфорной кислоты в соотношении 45:55 (по объему). Скорость потока элюента: 1 мл/мин.

Рабочая длина волны 240 нм.

Объем вводимой пробы 20 мкл.

Время удерживания флукарбазона 12,7 +/- 0,10 мин.

Линейный диапазон детектирования 0,1 - 1,6 мкг/мл.

2.6.5. Обработка результатов анализа

Количественное определение проводят методом абсолютной градуировки, содержание флукарбазона в образце воды, почвы или растений (Х, мг/кг) вычисляют по формуле:

Содержание остаточных количеств флукарбазона в анализируемом образце вычисляют как среднее из 3-х параллельных определений.

Образцы, дающие пики большие чем стандартный раствор флукарбазона 2 мкг/мл, разбавляют.

При проведении работы необходимо соблюдать требования инструкции "Основные правила безопасной работы в химической лаборатории", общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, а также инструкции по эксплуатации жидкостного хроматографа и электрооборудования до 400 В.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости результатов измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа.

Юзихин О.С., Цибульская И.А., Долженко В.И.

Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений.