"МУК 4.1.2017-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств Диазинона в мышечной ткани, печени, почках и жире овец"
(утв. Роспотребнадзором 17.10.2005)

1. Подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.

4. Введены впервые.

Фирма-производитель: ООО "Ариста Восток".

Торговое название: Диазинон.

Название действующего вещества по ИСО: Диазинон.

Название по ИЮПАК: O-O-диэтил O-[6-метил-2-(1-метилэтил)-4-пиридинил] фосфоротиоат.

Структурная формула (не приводится).

Молекулярная масса: 304,3.

Химически чистый Диазинон представляет собой бесцветную жидкость.

Температура кипения 89 °С при давлении 13 Па.

Область применения препарата: Диазинон - инсектицид широкого спектра действия из группы эфиров тиофосфорной кислоты, ингибиторов ацетилхолинэстеразы, с хорошо выраженной контактной и кишечной активностью. Высокоэффективен против сосущих, минирующих и грызущих насекомых, повреждающих растения, а также подвижных стадий растительноядных клещей. Препараты на основе Диазинона широко применяются для борьбы с эндопаразитами животных.

2.1.1. Принцип метода.

Методика основана на определении Диазинона методом газожидкостной хроматографии с использованием термоионного детектора после его экстракции из проб ацетонитрилом, переэкстракции в метиленхлорид и очистки на колонках с Флоризилом.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода.

Метрологическая характеристика метода представлена в таблицах 1 - 2.

2.2.1. Реактивы, материалы и растворы.

Диазинон, аналитический стандарт с содержанием д.в. 99,4%.

Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

Ацетон, ГОСТ 2603-79.

Ацетонитрил, ТУ 6-09-3534-87.

Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-72.

н-Гексан, ч., ТУ 6-09-3375-78.

Натрий сернокислый безводный, х.ч., ГОСТ 4166-76.

Метилен хлористый (метиленхлорид), х.ч., ГОСТ 19433-88.

Флоризил для колоночной хроматографии, зернение 60/100 меш, фирмы Флюка.

2.2.2. Приборы, аппаратура, посуда.

Аппарат для встряхивания, ТУ 64-1-1081-73, или аналогичный.

Баня водяная, ТУ 46-22-603-75.

Банки с крышками для экстракции на 250 мл, полипропилен, кат. N 3120-0250, NALGENE.

Весы аналитические ВЛА-200, ГОСТ 34104-80Е, или аналогичные.

Воронки делительные на 250 мл, ГОСТ 23336-82.

Воронки для фильтрования стеклянные, ГОСТ 8613-75.

Испаритель ротационный, вакуумный ИР-1М, ТУ 25-11-917-74, или аналогичный.

Колбы мерные на 10, 25, 50, 100 мл, ГОСТ 1770-74.

Колонки пластиковые для адсорбционной хроматографии длиной 15 см, диаметр 1,5 см.

Колонка газохроматографическая капиллярная кварцевая НР-5 длиной 15 м с внутренним диаметром 0,32 мм, толщина пленки 0,25 мкм.

Концентраторы грушевидные на 100 и 250 мл НШ29 КГУ-100 (250), ГОСТ 10394-72.

Микрошприц на 10 мкл, ТУ Е-2.833.0.24.

Насос водоструйный, ГОСТ 10696-75.

Пипетки мерные на 1,0, 2,0 и 5,0 мл, ГОСТ 20292-74.

Стаканы химические на 100 мл, ГОСТ 25336-82Е.

Фильтры бумажные "Красная лента", ТУ 6-09-1678-86.

Цилиндры мерные емкостью 25, 50 и 100 мл, ГОСТ 1770-74.

2.3.1. Подготовка и кондиционирование колонок для газожидкостной хроматографии.

Колонку устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе гелия при температуре на 20 °С ниже предельного значения для выбранной неподвижной фазы в течение 8 - 10 часов.

2.3.2. Приготовление стандартных растворов.

Взвешивают 50 мг Диазинона в мерной колбе на 50 мл, растворяют навеску в ацетоне и доводят объем до метки ацетоном (стандартный раствор N 1, концентрация 1 мг/мл). Стандартный раствор N 1 можно хранить в холодильнике в течение 6 месяцев.

Методом последовательного разбавления готовят стандартные растворы Диазинона в ацетоне с концентрацией 0,025; 0,05; 0,1; 0,25; 0,5 мкг/мл для построения калибровочного графика и внесения в контрольный образец.

Подобным образом готовят раствор Диазинона в гексане с концентрацией 1,0 мкг/мл для проверки хроматографического поведения аналитического стандарта на колонке с Флоризилом.

2.3.3. Подготовка колонки с Флоризилом.

В пластмассовую колонку длиной 15 см, диаметром 1,5 см помещают на дно чистую стекловату и заполняют колонку 5 г Флоризила 60/100 меш, уплотняя его путем вибрации колонки. На слой Флоризила наносят слой безводного сернокислого натрия толщиной 1 см. За день до определения Флоризил в колонке промывают последовательно 20 мл ацетона и 10 мл гексана.

2.3.4. Проверка хроматографического поведения Диазинона на колонке.

В подготовленную колонку вносят 1 мл стандартного раствора Диазинона в гексане с концентрацией 1,0 мкг/мл (раздел 2.3.2) и 9 мл гексана. Колонку промывают последовательно 10 мл гексана и 10 мл смеси гексан: ацетон - 9:1. Смывы отбрасывают. После этого пропускают через колонку 3 - 4 порции смеси гексан:ацетон (1:1) по 5 мл каждая, собирая их в отдельные концентраторы. Собранные фракции выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 мл ацетона и вводят в хроматограф 1 мкл пробы. Фракции, содержащие Диазинон, объединяют, выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 мл ацетона и вводят в хроматограф 1 мкл пробы. Рассчитывают содержание вещества в элюате, определяют полноту смыва с колонки и необходимый для очистки объем элюата.

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79). Пробы биологического материала хранят в запаянных пластиковых пакетах в замороженном виде в холодильнике. Перед анализом пробы размораживают и измельчают на мясорубке.

2.5.1. Мышечная ткань, печень, почки.

Навеску измельченного материала - 10 г помещают в пластиковую банку с крышкой емкостью 250 мл и заливают 50 мл ацетонитрила. Встряхивают 10 минут. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в делительную воронку емкостью 250 мл. Экстракцию повторяют еще раз, заливая пробу 50 мл ацетонитрила и встряхивая 10 минут. Экстракт отфильтровывают в ту же делительную воронку.

К фильтрату в воронке добавляют 20 мл гексана <*> и встряхивают содержимое воронки в течение 1 минуты. После разделения фаз нижнюю ацетонитрильную фазу сливают в стаканчик, гексан отбрасывают. Переносят экстракт из стаканчика в делительную воронку и промывают его еще раз 20 мл гексана. Ацетонитрильную фазу сливают в концентратор емкостью 250 мл через безводный сульфат натрия и упаривают до объема 5 - 10 мл при температуре не выше 35 °С.

2.5.1.1. Очистка на колонках с Флоризилом.

В подготовленную (как указано в разделе 2.3.3) колонку с Флоризилом переносят содержимое концентратора. Концентратор ополаскивают 10 мл гексана и пропускают гексан через колонку. Колонку промывают 10 мл смеси гексан:ацетон - 9:1. Смывы отбрасывают. Диазинон элюируют 15 мл смеси гексан:ацетон - 1:1, смыв собирают в чистый концентратор и выпаривают его содержимое досуха на ротационном вакуумном испарителе. Сухой остаток разводят в 2 мл ацетона (пробы печени - в 4 мл) и вводят в хроматограф 1 мкл пробы.

2.5.2. Жир.

Навеску жира 5 г помещают в пластиковую банку с крышкой емкостью 250 мл и заливают 50 мл гексана <*>. Встряхивают 10 минут. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в концентратор емкостью 250 мл. Экстракцию повторяют еще раз, заливая пробу 50 мл гексана и встряхивая 10 минут. Экстракт отфильтровывают в тот же концентратор. Объединенный фильтрат упаривают до объема 5 - 10 мл при температуре не выше 35 °С.

Остаток пробы из концентратора помещают в делительную воронку емкостью 250 мл. Концентратор ополаскивают 50 мл ацетонитрила <*> и переносят ацетонитрил в делительную воронку. Проводят переэкстракцию Диазинона из гексана в ацетонитрил, встряхивая делительную воронку в течение 2 минут. После разделения слоев нижний слой ацетонитрила сливают в концентратор через безводный сульфат натрия. Повторяют экстракцию еще два раза, используя каждый раз по 50 мл ацетонитрила. Экстракты собирают в тот же концентратор. Объединенный экстракт упаривают до объема 5 - 10 мл при температуре не выше 35 °С.

--------------------------------

<*> В анализе используют гексан, насыщенный ацетонитрилом, и ацетонитрил, насыщенный гексаном.

Очищенную пробу растворяют в 2 мл ацетона и вводят в хроматограф 1 мкл пробы.

2.6.1. Условия хроматографирования.

Колонка капиллярная кварцевая НР-5 длиной 15 м с внутренним диаметром 0,32 мм; толщина пленки 0,25 мкм.

Режим работы.

Температура термостата колонки программированная. Начальная температура - 150 °С, выдержка 2 минуты; нагрев колонки по 25 градусов в минуту до температуры 230 °С, выдержка 5 минут; нагрев колонки по 25 градусов в минуту до температуры 260 °С.

Газовый режим - Splitless.

Газ-носитель - гелий (Г1). Тип регулятора расхода гелия - РРГ 11, линейная скорость - 20 см/сек., давление на входе 27,29 кПа.

Газ 2 (Г2) - гелий (продувка испарителя), расход 1,0 мл/мин., сброс 1:50, начало сброса - 5 сек., длительность сброса - 2 мин.

Газ 3 (Г3) - азот (поддув в детектор), расход во время анализа - 20 мл/мин.

Продувка детектора азотом после анализа при температуре 260 °С в течение 2 минут - 65 мл/мин.

Абсолютное время удерживания Диазинона - 4 мин. 45 сек. - 4 мин. 47 сек.

Температура испарителя - 250 °С, детектора - 350 °С.

Расход водорода - 16 мл/мин.; расход воздуха - 180 мл/мин.

Объем вводимой пробы - 1 мкл.

Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,025 - 0,5 нг.

2.6.2. Обработка результатов анализов.

Содержание Диазинона в пробах рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

Необходимо соблюдать требования безопасности при работе в химических лабораториях в соответствии с "Правилами устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемиологического режима и личной гигиены при работе в лечебных и санитарно-эпидемиологических учреждениях системы МЗ СССР" (N 2455-81 от 20.10.81), а также требования, изложенные в документации на приборы.

Московская сельскохозяйственная академия имени К.А. Тимирязева. Учебно-научный консультационный центр "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов".