"МУК 4.1.2115-06. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение массовой концентрации хлороформа, 1,2-дихлорэтана, тетрахлорметана в биосредах (кровь) методом газохроматографического анализа равновесного пара. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 09.08.2006)

Методические указания по определению концентраций химических веществ в биологических средах предназначены для использования Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, лечебными и научными учреждениями, работающими в области профпатологии и экологии человека, научно-исследовательскими институтами, занимающимися вопросами гигиены окружающей среды.

Методические указания разработаны с целью обеспечения контроля за содержанием органических соединений в биологических средах у населения, проживающего в районах с повышенным уровнем загрязнения окружающей среды.

Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ Р 8.563-96 "ГСОЕИ. Методики выполнения измерений", ГОСТ Р 1.5-92 "ГСС. Общие требования к построению, изложению, оформлению и содержанию стандартов". Методика анализа обеспечивает выполнение измерений массовой концентрации алифатических хлорированных углеводородов в крови в диапазоне концентраций:

- хлороформ от 0,005 до 0,120 мкг/куб. см с погрешностью 20,7% при доверительной вероятности 0,95;

- тетрахлорметан от 0,0006 до 0,0150 мкг/куб. см с погрешностью 17,6% при доверительной вероятности 0,95;

- 1,2-дихлорэтан от 0,05 до 1,25 мкг/куб. см с погрешностью 12,2% при доверительной вероятности 0,95.

Хлороформ (трихлорметан)

Хлороформ - бесцветная жидкость с характерным сладковатым запахом. Температура кипения 61,15 °С, температура плавления -63,5 °С. Хлороформ растворим в органических растворителях и малорастворим в воде, наркотик [1].

Тетрахлорметан

Тетрахлорметан - бесцветная жидкость. Температура кипения 76,75 °С, температура плавления (-22,87 °С). Тетрахлорметан растворим в органических растворителях и малорастворим в воде. Тетрахлорметан - сильнейший наркотик [1].

1,2-Дихлорэтан

1,2-Дихлорэтан - бесцветная жидкость. Температура кипения 83,5 °С, температура плавления -35,3 °С, растворим в органических растворителях и малорастворим в воде. 1,2-Дихлорэтан является токсичным соединением [1].

Методика основана на предварительном выделении алифатических хлорированных углеводородов из биологического материала (кровь) путем нагревания объекта и последующего газохроматографического анализа парогазовой пробы.

Выполнение измерений массовой концентрации алифатических хлорированных углеводородов проводят методом газовой хроматографии с детектором электронного захвата. Определению не мешают ацетон, ароматические углеводороды, алифатические спирты, трихлорэтилен при содержании каждого из указанных веществ не более 0,5 мкг/куб. см.

Длительность анализа одной пробы крови - 20 мин.

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы и растворы. Допускается применение других типов средств измерений, вспомогательного оборудования и химреактивов с аналогичными или лучшими метрологическими и техническими характеристиками.

Раствор калия дихромата, 3%-й

Раствор щавелевой кислоты, 10%-й.

4.1. При выполнении работ должны быть соблюдены меры противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.004-85 и правила техники безопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76.

4.2. При работе необходимо соблюдать "Правила по технике безопасности и производственной санитарии при работе в химических лабораториях" (утверждены МЗ СССР 20.12.82) и "Правила устройства и безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением" (утверждены Госгортехнадзором СССР 27.11.87).

4.3. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.

4.4. При выполнении измерений с использованием газового хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

К выполнению измерений допускаются лица, имеющие квалификацию не ниже инженера-химика и опыт работы на газовом хроматографе и в химической лаборатории, прошедшие соответствующий инструктаж, освоившие метод в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы оперативного контроля при выполнении процедур контроля погрешности.

6.1. При проведении процессов приготовления растворов и подготовки проб к анализу соблюдают следующие условия:

- температура воздуха (20 +/- 5) °С;

- атмосферное давление 630 - 800 мм рт. ст.;

- влажность воздуха не более 80% при температуре 25 °С.

6.2. Выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендуемых технической документацией по прибору.

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: подготовка посуды, подготовка хроматографической колонки, приготовление аттестованных смесей, установление градуировочной характеристики.

Используемую посуду замочить на 1 ч в свежеприготовленном 3%-м растворе дихромата калия в серной кислоте (3 г дихромата калия на 100 куб. см концентрированной серной кислоты), отмыть в проточной водопроводной воде, ополоснуть бидистиллированной водой и просушить при температуре 120 °С.

Хроматографическую колонку перед заполнением неподвижной фазой промывают дистиллированной водой, ацетоном, высушивают в токе инертного газа. Заполнение хроматографической колонки насадкой проводят под вакуумом. Концы колонки закрывают стекловатой, устанавливают в хроматограф и, не подключая к детектору, кондиционируют в токе газа-носителя (азота) с расходом 30 куб. см/мин. при температуре 250 °С в течение 18 ч. После охлаждения колонку подключают к детектору, записывают нулевую линию в рабочем режиме. При отсутствии мешающих влияний колонка готова к работе.

Для построения градуировочного графика собирают кровь, не содержащую исследуемых компонентов, и готовят серию рабочих стандартных растворов.

Исходный аттестованный раствор для градуировки.

В мерную колбу объемом 1000 куб. см, содержащую бидистиллированную воду в объеме 500 куб. см, вводят микрошприцем 8 куб. мм хлороформа, ГСО 7288-96, 1 куб. мм тетрахлорметана, ГСО 7211-95, 100 куб. мм 1,2-дихлорэтана, ГСО 7332-96 и заполняют колбу до метки водой. Весовое содержание компонентов в исходной аттестованной смеси составляет (с учетом плотности и содержания основного вещества): хлороформ - 11,9 мкг/куб. см, тетрахлорметан - 1,63 мкг/куб. см, 1,2-дихлорэтан - 125,77 мкг/куб. см. Срок хранения раствора - 12 ч.

Раствор щавелевой кислоты. В небольшом количестве воды растворяют 10 г щавелевой кислоты и доводят в мерной колбе на 100 куб. см водой.

Градуировочную характеристику устанавливают методом абсолютной калибровки на градуировочных смесях хлорированных углеводородов. Она выражает зависимость площади пика на хроматограмме (кв. мм) от массы компонента (мкг) и строится по 5 сериям аттестованных растворов для градуировки. Каждую серию, состоящую из 5 аттестованных растворов, готовят в мерных пробирках объемом 10 куб. см. Для этого в каждую пробирку вносят по 5 куб. см крови, 2 куб. см 10%-го раствора щавелевой кислоты и добавляют исходную аттестованную смесь для градуировки в соответствии с табл. 1 и доводят до метки бидистиллированной водой. Срок хранения - 12 ч.

Во флаконы из-под пенициллина помещают по 5 куб. см крови с аттестованной смесью, добавляют по 2 куб. см 10%-го раствора щавелевой кислоты, флаконы закрывают резиновой пробкой и ставят в металлические цилиндры с просверленными в стенках отверстиями и навинчивающейся крышкой (рис. 1 - не приводится). Первый цилиндр с флаконом погружают в кипящую водяную баню. По истечении 5 мин. отбирают нагретым в термостате при t = 60 °С шприцем из флакона 5 куб. см парогазовой пробы и вводят ее в хроматографическую колонку через испаритель. Процедуру повторяют аналогично для каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях:

температура термостата колонок - 90 °С;

температура испарителя - 170 °С;

температура детектора - 250 °С;

расход газа-носителя (азота) - 30 куб. см/мин.;

скорость диаграммной ленты - 240 мм/ч;

время удерживания хлороформа - 3 мин. 05 с;

тетрахлорметана - 4 мин. 20 с;

1,2-дихлорэтана - 5 мин. 30 с.

На полученной хроматограмме определяют площади пиков определяемых компонентов и по средним результатам из 5 серий строят градуировочную характеристику. Градуировку проверяют 1 раз в квартал и при смене партии реактивов.

Отбор проб венозной крови в объеме не менее 10 куб. см производится в тщательно вымытую стеклянную пробирку с притертой пробкой, в которую предварительно добавлено 0,1 куб. см раствора гепарина. Анализ крови проводить сразу или хранить в морозильной камере не более 5 дней.

В два флакона из-под пенициллина помещают по 5 куб. см крови, добавляют по 2 куб. см 10%-го раствора щавелевой кислоты, флаконы закрывают резиновой пробкой и ставят в металлические цилиндры с просверленными в стенках отверстиями и навинчивающейся крышкой (рис. 1). Первый цилиндр с флаконом погружают в кипящую водяную баню. По истечении 5 мин. отбирают нагретым в термостате при t = 60 °С шприцем из флакона 5 куб. см парогазовой пробы и вводят ее в хроматографическую колонку через испаритель. Процедуру повторяют аналогично для второго образца и проводят выполнение измерений двух параллельных проб крови. Условия выполнения измерений аналогичны условиям при установлении градуировочной характеристики (п. 7.4).

Внутренний контроль качества (ВКК) результатов измерений - повторяемость, внутрилабораторная прецизионность (воспроизводимость), точность - осуществляют с целью получения оперативной информации о качестве измерений и принятия при необходимости оперативных мер по его повышению в соответствии с нормативным документом МИ 2335-2003 "ГСОЕИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа". Методика выполнения измерений обеспечивает получение результатов измерений с погрешностью, не превышающей значений, приведенных в табл. 2 и 3.

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят раз в квартал в анализируемой серии измерений. Определяют содержание исследуемых соединений в градуировочных растворах, которые соответствуют началу, середине и концу градуировочного интервала.

Градуировка признается стабильной, если расхождение между заданными и измеренными значениями концентраций не превышает 5%.

Если условие не выполняется, эксперимент повторяют. При повторном получении отрицательного результата выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

Внутренний контроль качества воспроизводимости проводят с использованием рабочей пробы. Пробу делят на две равные части и анализируют в соответствии с методикой, максимально варьируя условия проведения анализа (разные операторы, разное время, разные партии реактивов одного типа, разные наборы мерной посуды и т.д.). Воспроизводимость результатов контрольных измерений признают удовлетворительной, если выполняется условие:

При превышении оперативного контроля погрешности эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и устраняют их.

Периодичность контроля исполнения процедуры ВКК регламентируют в руководстве по качеству лаборатории.

1. Бандман А.Л., Войтенко Г.А., Волкова Н.В. и др. Вредные химические вещества. Углеводороды. Галогенпроизводные углеводородов: Справ. изд./Под ред. В.А. Филова и др. Л.: "Химия", 1990.

Методические указания разработаны Пермским научно-исследовательским клиническим институтом детской экопатологии (Т.С. Уланова, Т.В. Нурисламова, Н.А. Попова).