"МУК 4.1.1859-04. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по измерению концентраций дифлубензурона в воздухе рабочей зоны и атмосферном воздухе населенных мест методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"
(утв. Минздравом России 05.03.2004)

1. Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.

4. Введены впервые.

Настоящие Методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения в воздухе рабочей зоны и атмосферном воздухе массовой концентрации дифлубензурона в диапазонах 0,3 - 3,0 мг/куб. м (воздух рабочей зоны); 0,0048 - 0,048 мг/куб. м (атмосферный воздух).

Дифлубензурон - действующее вещество препарата ГЕРОЛЬД, СК (240 г/л), фирма-производитель Август, Россия.

3-(2,6-Дифторбензоил)-1-(4-хлорфенил)мочевина (IUPAC).

Структурная формула - не приводится.

Область применения препарата

Дифлубензурон используется в качестве инсектицида гормонального действия, нарушающего процесс образования хитина в организме насекомых. Активен против большого числа насекомых, обладает, в основном, кишечным действием. Рекомендуется для борьбы с болезнями плодовых культур (яблоня), овощных (капуста), в лесопосадках для защиты грибов, борьбы с личинками комаров.

Предельно допустимая концентрация (ПДК) в воздухе рабочей зоны - 3,0 мг/куб. м; ориентировочный безопасный уровень воздействия (ОБУВ) в атмосферном воздухе - 0,006 мг/куб. м.

Методика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью, не превышающей +/- 25%, при доверительной вероятности 0,95.

Измерения концентраций дифлубензурона выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на обращенной фазе с ультрафиолетовым детектором.

Концентрирование дифлубензурона из воздуха осуществляют на бумажные фильтры "синяя лента", экстракцию с фильтра проводят ацетоном.

Нижний предел измерения в хроматографируемом объеме пробы - 2 нг.

Определению не мешают компоненты препаративной формы.

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами по ГОСТу 12.1.005.

4.2. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.019 и инструкцией по эксплуатации прибора.

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С и относительной влажности не более 80%.

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Перед выполнением измерений проводят очистку ацетона и ацетонитрила (при необходимости), подготовку подвижной фазы для ВЭЖХ, приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

7.1. Подготовка органических растворителей

7.1.1. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют. Непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

7.1.2. Очистка ацетона

Растворитель сушат над молекулярными ситами 4А и подвергают фракционной перегонке на ректификационной колонне, целиком собранной из стекла с числом теоретических тарелок не менее 30. До начала отбора главной фракции приемник несколько раз промывают дистиллятом. Перегонку продолжают до тех пор, пока в сосуде для перегонки не останется приблизительно 100 куб. см ацетона. Температуру водяной бани следует снижать по мере уменьшения объема ацетона, во всех случаях она не должна превышать температуру кипения ацетона более чем на 20°.

7.1.3. Контроль чистоты ацетона

В круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 30 куб. см ацетона, упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха, в колбу вносят 5 куб. см подвижной фазы для ВЭЖХ (п. 7.1.2) и анализируют раствор в условиях хроматографирования по п. 7.6.1.1.

7.2. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 600 куб. см ацетонитрила, доводят объем до метки дистиллированной водой, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

7.3. Кондиционирование хроматографической колонки

Промывают колонку подвижной фазой (п. 7.2) в течение 30 минут при скорости подачи растворителя 1,0 куб. см/мин. до установления стабильной базовой линии.

7.4. Приготовление градуировочных растворов

7.4.1. Исходный раствор дифлубензурона для градуировки (концентрация 1 мг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 50 куб. см помещают 0,0500 г дифлубензурона, доводят ацетонитрилом до метки, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение 3-х месяцев.

7.4.2. Раствор N 1 дифлубензурона для градуировки (концентрация 10 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 1 куб. см исходного стандартного раствора дифлубензурона (п. 7.4.1) с концентрацией 1 мг/куб. см, разбавляют ацетонитрилом до метки. Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.

7.4.3. Рабочие растворы N 2 - 6 дифлубензурона для градуировки (концентрации 0,1 - 1,0 мкг/куб. см). В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают по 1,0; 2,0; 5,0 и 10,0 куб. см стандартного раствора N 1 (п. 7.4.2) с концентрацией 10 мкг/куб. см, доводят до метки подвижной фазой для ВЭЖХ (п. 7.2) и тщательно перемешивают. Получают рабочие растворы N 2 - 3, 5 - 6 с концентрацией дифлубензурона 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/куб. см соответственно. Раствор N 4 с концентрацией дифлубензурона 0,3 мкг/куб. см готовят аналогично, помещая в мерную колбу емкостью 50 куб. см 1,5 куб. см раствора N 1 (п. 7.4.2). Растворы хранятся в холодильнике в течение суток.

7.5. Отбор проб

7.5.1. Воздух рабочей зоны

Отбор проб воздуха проводят в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны".

В течение 15 минут последовательно отбирают 3 пробы, для чего воздух с объемным расходом 0,5 - 1 куб. дм/мин. аспирируют в течение 5 минут через фильтр "синяя лента", помещенный в фильтродержатель.

Для измерения концентрации дифлубензурона на уровне 0,5 ПДК воздуха рабочей зоны необходимо отобрать 0,33 куб. дм воздуха.

Срок хранения отобранных проб, помещенных в полиэтиленовые пакеты, в холодильной камере при +4 °С - 7 дней.

7.5.2. Атмосферный воздух

Отбор проб воздуха проводят в соответствии с требованиями ГОСТ 17.2.4.02-81 "ОПА. Общие требования к методам определения загрязняющих веществ в воздухе населенных мест". Воздух со скоростью 3 куб. дм/мин. аспирируют через фильтр "синяя лента", помещенный в фильтродержатель.

Для измерения концентрации дифлубензурона на уровне 0,8 ОБУВ необходимо отобрать 42 куб. дм воздуха.

Срок хранения отобранных проб, помещенных в полиэтиленовые пакеты, в холодильной камере при +4 °С - 7 дней.

7.6. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (отн. единицы) от концентрации дифлубензурона в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 5-ти растворам для градуировки N 2 - 6, приготовленным по п. 7.4.3.

В инжектор хроматографа вводят по 20 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 7.6.1.1. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений. Устанавливают площадь пика дифлубензурона.

7.6.1.1. Условия хроматографирования

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:

Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором

Колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 4,0 мм, содержащая Zorbax ODS, зернением 5 мкм

Температура колонки: комнатная

Подвижная фаза: ацетонитрил - вода (60:40, по объему)

Скорость потока элюента: 1 куб. см/мин.

Рабочая длина волны: 254 (или 280) <*> нм

Чувствительность: 0,01 ед. абсорбции на шкалу

Объем вводимой пробы: 20 куб. мм

Время выхода дифлубензурона: 5,8 - 6,0 мин.

Линейный диапазон детектирования: 2 - 20 нг.

--------------------------------

<*> Детектирование при длине волны 280 нм приемлемо при наличии в натурных пробах воздуха примесей, поглощающих в области 254 нм, время выхода которых совпадает с временем выхода дифлубензурона.

Образцы, дающие пики, большие, чем стандартный раствор биспирибака натрия с концентрацией 1,0 мкг/куб. см, разбавляют подвижной фазой (подготовленной по п. 7.2).

Градуировочный график проверяют ежедневно по анализу 2-х стандартных растворов различной концентрации. Если получаемые результаты отличаются более чем на +/- 5% от данных, заложенных в градуировочную характеристику, ее строят заново, используя свежеприготовленные рабочие градуировочные растворы.

Фильтр с отобранной пробой переносят в химический стакан вместимостью 100 куб. см, заливают 10 куб. см ацетона, оставляют на 10 минут, периодически перемешивая. Растворитель сливают, отжимая фильтр стеклянной палочкой. Фильтр еще дважды обрабатывают новыми порциями ацетона объемом 10 куб. см.

Объединенный экстракт упаривают в грушевидной колбе на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °С почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха, остаток растворяют в 5 куб. см (воздух рабочей зоны) или 2 куб. см (атмосферный воздух) подвижной фазы (подготовленной по п. 7.2) и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 7.6.1.1.

Пробу вводят в инжектор хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь пика, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию дифлубензурона в хроматографируемом растворе.

Перед анализом опытной пробы проводят хроматографирование холостой (контрольной) пробы - экстракта неэкспонированного фильтра.

Массовую концентрацию дифлубензурона в пробе воздуха рабочей зоны (атмосферного воздуха) Х, мг/куб. м, рассчитывают по формуле:

где:

Т - температура воздуха при отборе пробы (на входе в аспиратор), град. С;

Р - атмосферное давление при отборе пробы, мм рт. ст.;

u - расход воздуха при отборе пробы, куб. дм/мин.;

t - длительность отбора пробы, мин.

Примечание: Идентификация и расчет концентрации дифлубензурона в пробах могут быть проведены с помощью программ обработки хроматографических данных с применением компьютера, включенного в аналитическую систему.

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа.

Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана.