"МУК 4.1.1786-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по измерению концентраций крезоксим-метила в воздухе рабочей зоны и атмосферном воздухе населенных мест методами газожидкостной и высокоэффективной жидкостной хроматографии"
(утв. Минздравом России 31.10.2003)

1. Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (академик РАМН, проф. В.Н. Ракитский, проф. Т.В. Юдина) при участии Департамента Госсанэпиднадзора Минздрава России (А.П. Веселов).

2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по госсанэпиднормированию при Минздраве России.

3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко 31 октября 2003 г.

4. Введены с 1 февраля 2004 г.

5. Введены впервые.

Фирма-производитель: БАСФ (Германия).

Торговое название: СТРОБИ.

Действующее вещество: крезоксим-метил

(Е)-Метил-2-метоксиимино-2-[2-(о-толилоксиметил)фенил]ацетат (IUPAC).

Структурная формула (не приводится).

Молекулярная масса: 313,3.

Кристаллическое вещество белого цвета со слабым ароматным запахом.

Температура плавления: 101,6 - 102,5 °С.

Растворимость в органических растворителях при 20 °С (г/куб. дм): ацетон - 217; метанол - 14,9; дихлорметан - 939; этилацетат - 123; толуол - 111; н-гептан - 1,7. Растворимость в воде - 0,002 мг/куб. дм.

Может присутствовать в воздухе в виде аэрозоля.

Не оказывает раздражающего действия на кожу и слизистую оболочку глаз, не обладает сенсибилизирующим действием.

Рекомендуемые гигиенические нормативы:

ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 1 мг/куб. м

ОБУВ в атмосферном воздухе - 0,1 мг/куб. м

ПДК в воде водоемов - 0,01 мг/куб. дм

ОДК в почве - 0,2 мг/кг.

Область применения препарата

Крезоксим-метил - синтетический фунгицид из класса стробилуринов, эффективен против широкого круга грибных патогенов хлебных злаков, овощных, кормовых, технических и плодовых культур. Обладает защитным, лечебным и искореняющим действием.

Проходит регистрационные испытания в России и странах СНГ под торговым названием Строби, 500 ВДГ (500 г/кг) с нормой расхода 140 - 320 г/га при трехкратной обработке (по розовому бутону, после опадения 75% лепестков и по мелким плодам).

2.1.1. Принцип методики

Методика основана на определении крезоксим-метила методом газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с детектором постоянной скорости рекомбинации ионов или высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором.

Отбор проб воздуха осуществляется концентрированием аэрозоля на бумажные фильтры "синяя лента". Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

2.1.2. Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии компонентов препаративной формы.

2.1.3. Метрологическая характеристика метода (Р = 0,95)

Число параллельных определений - 6.

Предел обнаружения в хроматографируемом объеме - 0,1 нг (измерение по п. 2.7.1, ГЖХ) и 2 нг (измерение по п. 2.7.2, ВЭЖХ).

Предел обнаружения в воздухе (при отборе 10 куб. дм) - 0,05 мг/куб. м.

Диапазон определяемых концентраций: 0,05 - 0,5 мг/куб. м (при отборе 10 куб. дм); 0,1 - 1,0 мг/куб. м (при отборе 5 куб. дм).

Среднее значение определения - 97%.

Стандартное отклонение (S) - 4,72% (ГЖХ), 2,50% (ВЭЖХ).

Относительное стандартное отклонение (DS) - 1,93% (ГЖХ), 1,02% (ВЭЖХ).

Доверительный интервал среднего - +/- 4,96 (ГЖХ), +/- 2,62% (ВЭЖХ).

Суммарная погрешность измерения не превышает 16% (ГЖХ), 12% (ВЭЖХ).

Крезоксим-метил с содержанием д.в. 99,9% (БАСФ, Германия).

Азот особой чистоты, из баллона, ГОСТ 9293-79.

Ацетонитрил для хроматографии, х.ч., ТУ 6-09-4326-76.

Вода бидистиллированная или деионизованная.

н-Гексан, х.ч., ТУ 6-09-4521-77.

Кислота ортофосфорная, х.ч., ГОСТ 6552-80.

Метиловый спирт, х.ч., ГОСТ 6995-77.

Толуол, ч.д.а., ГОСТ 5789-78.

Этиловый эфир уксусной кислоты, ч., ГОСТ 22300-76.

Хроматон-Супер с 5% ОV-17 (0,16 - 0,20 мм).

Бумажные фильтры "синяя лента", обеззоленные, ТУ 6-09-2678-77, предварительно промытые последовательно этанолом, затем этилацетатом.

Стекловата.

Фильтродержатели.

Хроматографическая колонка стеклянная длиной 1 м, внутренним диаметром 3 мм.

Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором фирмы Perkin-Elmer (США) или аналогичный.

Хроматографическая колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая Zorbax ODS, зернением 5 мкм.

Микрошприц типа МШ-1М, ТУ 2.833.105, вместимостью 1 мкл.

Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа вместимостью 50 - 100 мкл.

Аспирационное устройство типа ЭА-1, ТУ 25-11-1414-78, или аналогичное.

Барометр, ТУ 2504-1797-75.

Весы аналитические типа ВЛА-200, ГОСТ 34104-80Е.

Насос водоструйный, ГОСТ 10696-75.

Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-76, или аналогичный.

Термометр лабораторный шкальный ТЛ-2, цена деления 1 °С, пределы измерения 0 - 55 °С, ГОСТ 215-73Е.

Воронки химические конусные диаметром 34 - 40 мм, ГОСТ 25336-82Е.

Колбы грушевидные со шлифом, ГОСТ 10394-72, вместимостью 100 мл.

Колбы мерные, ГОСТ 1770-74, вместимостью 50 и 100 мл.

Пипетки, ГОСТ 20292-74, вместимостью 1, 2 и 5 мл.

Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74Е, вместимостью 10, 50 и 250 мл.

Пробирки центрифужные, ГОСТ 25336-82Е.

Ректификационная стационарная установка РУТ, ТУ 25-11-1103-75.

Стаканы химические, ГОСТ 25336-82Е, вместимостью 100 мл.

Груша резиновая.

Стеклянные палочки.

Установка для перегонки растворителей при атмосферном давлении.

Фильтродержатели.

Отбор проб воздуха рабочей зоны следует осуществлять в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны" или ГОСТ 17.2.4.02-81 "ОПА. Общие требования к методам определения загрязняющих веществ в воздухе населенных мест".

Воздух с объемным расходом 1 - 4 куб. дм/мин. аспирируют через фильтр "синяя лента", помещенный в фильтродержатель.

Для измерения 0,5 рекомендуемого ОБУВ в воздухе рабочей зоны следует отобрать 1 куб. дм воздуха; 0,8 ОБУВ в атмосферном воздухе - 7 куб. дм.

Фильтры с отобранными пробами, упакованные в полиэтиленовые пакеты, можно хранить в холодильнике при температуре 4 - 6 °С в течение 20-ти дней.

2.5.1. Подготовка органических растворителей

2.5.1.1. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

2.5.1.2. Очистка этилацетата

Этилацетат промывают последовательно 5%-ным водным раствором карбоната натрия, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над безводным карбонатом калия и перегоняют.

Необходимую чистоту растворителя можно достичь перегонкой коммерческого этилацетата на ректификационной колонне с числом теоретических тарелок не менее 50.

2.5.1.3. Очистка толуола

Толуол выдерживают над безводным хлористым кальцием и перегоняют перед употреблением, отбрасывая предгон объемом 10 - 15% от исходного.

2.5.2. Метод ГЖХ. Подготовка и кондиционирование колонки

Готовую насадку (5% ОV-17 на Хроматоне-супер, 0,16 - 0,20 мм) засыпают в стеклянную колонку, предварительно промытую последовательно этиловым спиртом, ацетоном и гексаном, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота при температуре 260 °С в течение 10 - 12 часов.

2.5.3. Метод ВЭЖХ

2.5.3.1. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 50 мл метилового спирта, 350 мл бидистиллированной воды, 0,5 мл ортофосфорной кислоты и 600 мл ацетонитрила, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

2.5.3.2. Кондиционирование колонки

Промывают колонку для ВЭЖХ смесью ацетонитрил - метанол - вода - ортофосфорная кислота (60:5:35:0,05 по объему) в течение 30 - 45 мин. при скорости подачи растворителя 1 мл/мин. до получения стабильной базовой линии.

2.5.4. Приготовление стандартных растворов

Стандартный раствор крезоксим-метила с содержанием 1 мг/мл готовят растворением 0,0500 г вещества в толуоле (измерение по п. 2.7.1, ГЖХ) или ацетонитриле (измерение по п. 2.7.2, ВЭЖХ) в мерной колбе на 50 мл. Раствор хранится в холодильнике в течение 3-х месяцев.

Для приготовления стандартного раствора крезоксим-метила с содержанием 10 мкг/мл в мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1 мл основного стандартного раствора (1 мг/мл), доводят объем до метки толуолом (измерение по п. 2.7.1, ГЖХ) или ацетонитрилом (измерение по п. 2.7.2, ВЭЖХ). Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.

Рабочие стандартные растворы с концентрацией 0,1; 0,2; 0,3; 0,5 и 1,0 мкг/мл готовят путем последовательного разбавления раствора, содержащего 10 мкг/мл крезоксим-метила в толуоле или ацетонитриле, толуолом (измерение по п. 2.7.1, ГЖХ) или подвижной фазой для ВЭЖХ (измерение по п. 2.7.2, ВЭЖХ). Растворы хранятся в холодильнике в течение 3-х дней.

2.5.5. Построение градуировочного графика

Для построения градуировочного графика в инжектор хроматографа вводят по 1 мкл (ГЖХ) или 20 мкл (ВЭЖХ) рабочих стандартных растворов крезоксим-метила с концентрацией 0,1; 0,2; 0,3; 0,5 и 1,0 мкг/мл.

Осуществляют не менее 5 параллельных измерений. Находят среднее значение высоты (ГЖХ) или площади (ВЭЖХ) хроматографического пика для каждой концентрации. Строят градуировочный график (А или Б) зависимости высоты или площади хроматографического пика (в мм или относительных единицах соответственно) от концентрации крезоксим-метила в растворе (в мкг/мл).

Фильтр с отобранной пробой переносят в химический стакан вместимостью 100 мл, заливают 10 мл этилацетата, оставляют на 5 - 7 минут, периодически перемешивая. Растворитель сливают, отжимая фильтр стеклянной палочкой. Фильтр еще дважды обрабатывают новыми порциями этилацетата объемом 10 мл.

Объединенный экстракт упаривают в грушевидной колбе на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани 40 - 45 °С почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха, остаток растворяют в 5 мл этилацетата (измерение по п. 2.7.1, ГЖХ) или подвижной фазы для ВЭЖХ (измерение по п. 2.7.2, ВЭЖХ), центрифугируют или фильтруют через слой стекловаты, помещенный в конусную химическую воронку, и хроматографируют.

2.7.1. ГЖХ

Хроматограф газовый "Цвет-560" с детектором постоянной скорости рекомбинации ионов

Колонка стеклянная длиной 1 м, внутренним диаметром 3 мм, заполненная 5% ОV-17 на Хроматоне-супер (0,16 - 0,20 мм).

Скорость газа-носителя (азота) - 30 +/- 2 мл/мин.

Объем вводимой пробы - 1 мкл.

Время выхода крезоксим-метила - 3 мин. 50 сек.

Линейный диапазон детектирования: 0,1 - 1 нг.

Образцы, дающие пики, большие чем стандартный раствор с концентрацией 1 мкг/мл, разбавляют этилацетатом.

2.7.2. ВЭЖХ

Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором фирмы Perkin-Elmer (США).

Хроматографическая колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая Zorbax ODS зернением 5 мкм.

Температура колонки: комнатная.

Подвижная фаза: ацетонитрил - метанол - вода - ортофосфорная кислота (60:5:35:0,05 по объему).

Скорость потока элюента: 1 мл/мин.

Рабочая длина волны: 236 нм.

Чувствительность: 0,005 ед. абсорбции на шкалу.

Объем вводимой пробы: 20 мкл.

Время выхода крезоксим-метила: 6,49 - 6,52 мин.

Линейный диапазон детектирования: 2 - 20 нг.

Образцы, дающие пики, большие чем стандартный раствор с концентрацией 1,0 мкг/мл, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.

Необходимо соблюдать требования безопасности при работе в химических лабораториях в соответствии с "Правилами устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемиологического режима и личной гигиены при работе в лечебных и санитарно-эпидемиологических учреждениях системы МЗ СССР" (N 2455-81 от 20.10.81), а также требования, изложенные в документации на приборы.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа.

Юдина Т.В., Федорова Н.Е., Волкова В.Н., Волчек С.И. (Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана Минздрава России, г. Мытищи Московской обл.).