"МУК 4.1.2114-06. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение массовой концентрации хлороформа, 1,2-дихлорэтана, тетрахлорметана, хлорбензола в биосредах (моча) газохроматографическим методом. Методические указания"
(утв. Роспотребнадзором 09.08.2006)

Методические указания по определению концентраций химических веществ в биологических средах предназначены для использования Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, лечебными и научными учреждениями, работающими в области профпатологии и экологии человека, научно-исследовательскими институтами, занимающимися вопросами гигиены окружающей среды.

Методические указания разработаны с целью обеспечения контроля за содержанием органических соединений в биологических средах у населения, проживающего в районах с повышенным уровнем загрязнения окружающей среды.

Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ Р 8.563-96 "ГСОЕИ. Методики выполнения измерений", ГОСТ Р 1.5-92 "ГСС. Общие требования к построению, изложению, оформлению и содержанию стандартов". Методика анализа обеспечивает выполнение измерений массовой концентрации алифатических и ароматического хлорированных углеводородов в моче в диапазоне концентраций:

- хлороформ от 0,012 до 0,500 мкг/куб. см с погрешностью 24,9% при доверительной вероятности 0,95;

- тетрахлорметан от 0,001 до 0,030 мкг/куб. см с погрешностью 14,8% при доверительной вероятности 0,95;

- 1,2-дихлорэтан от 0,06 до 1,90 мкг/куб. см с погрешностью 25,0% при доверительной вероятности 0,95;

- хлорбензол от 0,044 до 2,200 мкг/куб. см с погрешностью 16,0% при доверительной вероятности 0,95.

Хлороформ (трихлорметан)

Хлороформ - бесцветная жидкость с характерным сладковатым запахом. Температура кипения 61,15 °С, температура плавления -63,5 °С. Хлороформ растворим в органических растворителях и малорастворим в воде, наркотик [1].

Тетрахлорметан

Тетрахлорметан - бесцветная жидкость. Температура кипения 76,75 °С, температура плавления -22,87 °С. Тетрахлорметан растворим в органических растворителях и малорастворим в воде. Тетрахлорметан - сильнейший наркотик [1].

1,2-Дихлорэтан

1,2-Дихлорэтан - бесцветная жидкость. Температура кипения 83,5 °С, температура плавления -35,3 °С, растворим в органических растворителях и малорастворим в воде. 1,2-Дихлорэтан является токсичным соединением [1].

Хлорбензол

Хлорбензол - бесцветная жидкость. Температура кипения 132 °С, температура плавления -45,6 °С. Хлорбензол хорошо растворим в органических растворителях и малорастворим в воде. Хлорбензол - наркотик, действующий на систему крови подобно бензолу, но значительно слабее [1].

Методика основана на предварительном концентрировании анализируемых соединений из биологического материала (моча) экстракцией гептаном (хлороформ, 1,2-дихлорэтан) или гексаном (тетрахлорметан, хлорбензол) и последующем газохроматографическом анализе экстракта.

Выполнение измерений массовой концентрации алифатических хлорированных углеводородов и хлорбензола проводят методом газовой хроматографии с детектором электронного захвата. Определению не мешают ацетон, ароматические углеводороды, алифатические спирты, трихлорэтилен при содержании каждого из указанных веществ не более 0,5 мкг/куб. см.

Длительность анализа одной пробы мочи, включая экстракцию пробы, - 40 мин.

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы и растворы. Допускается применение других типов средств измерений, вспомогательного оборудования и химреактивов с аналогичными или лучшими метрологическими и техническими характеристиками.

Раствор калия дихромата, 3%-й.

Раствор натрия гидроксид, 10%-й.

Раствор щавелевой кислоты, 10%-й.

4.1. При выполнении работ должны быть соблюдены меры противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.004-85 и правила техники безопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76.

4.2. При работе необходимо соблюдать "Правила по технике безопасности и производственной санитарии при работе в химических лабораториях" (утверждены МЗ СССР 20.12.82) и "Правила устройства и безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением" (утверждены Госгортехнадзором СССР 27.11.87).

4.3. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.

4.4. При выполнении измерений с использованием газового хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

К выполнению измерений допускаются лица, имеющие квалификацию не ниже инженера-химика и опыт работы на газовом хроматографе и в химической лаборатории, прошедшие соответствующий инструктаж, освоившие метод в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы оперативного контроля при выполнении процедур контроля погрешности.

6.1. При проведении процессов приготовления растворов и подготовки проб к анализу соблюдают следующие условия:

- температура воздуха (20 +/- 5) °С;

- атмосферное давление 630 - 800 мм рт. ст.;

- влажность воздуха не более 80% при температуре 25 °С.

6.2. Выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендуемых технической документацией к прибору.

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: подготовка посуды, хроматографической колонки, приготовление аттестованных смесей, установление градуировочной характеристики.

Используемую посуду замочить на 1 ч в свежеприготовленном 3%-м растворе дихромата калия в серной кислоте (3 г дихромата калия на 100 куб. см концентрированной серной кислоты), отмыть в проточной водопроводной воде, ополоснуть бидистиллированной водой и просушить при температуре 120 °С.

Хроматографическую колонку перед заполнением неподвижной фазой промывают бидистиллированной водой, ацетоном, высушивают в токе инертного газа. Заполнение хроматографической колонки насадкой проводят под вакуумом. Концы колонки закрывают стекловатой, устанавливают в хроматограф и, не подключая к детектору, кондиционируют в токе газа-носителя (азота) с расходом 30 куб. см/мин. при температуре 200 °С в течение 18 ч. После охлаждения колонку подключают к детектору, записывают нулевую линию в рабочем режиме. При отсутствии мешающих влияний колонка готова к работе.

Для построения градуировочного графика собирают мочу, не содержащую определяемых компонентов, и готовят серию аттестованных растворов.

Исходный аттестованный раствор N 1. В мерную колбу объемом 1000 куб. см, содержащую бидистиллированную воду в объеме 500 куб. см, вводят 0,8 куб. мм хлороформа, ГСО 7288-96, 5 куб. мм 1,2-дихлорэтана, ГСО 7288-96 и заполняют колбу до метки водой. Весовое содержание хлорорганических соединений в исходном аттестованном растворе составляет (с учетом плотности и содержания основного вещества): хлороформ - 1,19 мкг/куб. см, 1,2-дихлорэтан - 6,29 мкг/куб. см. Срок хранения - 12 ч.

Исходный аттестованный раствор N 2. В мерную колбу объемом 1000 куб. см, содержащую бидистиллированную воду в объеме 500 куб. см, вводят 1 куб. мм тетрахлорметана, ГСО 7211-95, 20 куб. мм хлорбензола, ГСО 7142-95 и заполняют колбу до метки водой. Весовое содержание хлорорганических соединений в исходном аттестованном растворе составляет (с учетом плотности и содержания основного вещества): тетрахлорметан - 1,63 мкг/куб. см, хлорбензол - 22,13 мкг/куб. см. Срок хранения - 12 ч.

Раствор гидроксида натрия. В небольшом количестве бидистиллированной воды растворяют 10 г гидроксида натрия, количественно переносят в мерную колбу объемом 100 куб. см и заполняют колбу до метки водой.

Градуировочную характеристику устанавливают методом абсолютной калибровки. Она выражает зависимость площади пика на хроматограмме (кв. мм) от массы хлорорганических соединений (мкг) и строится по 5 сериям рабочих аттестованных растворов. Каждую серию, состоящую из 5 рабочих аттестованных растворов, готовят в мерных колбах вместимостью 100 куб. см, содержащих 50 куб. см мочи. Для этого в каждую колбу вносят исходное вещество в соответствии с табл. 1, заполняют колбу до метки мочой.

Для построения градуировочной характеристики хлороформа и 1,2-дихлорэтана аттестованный раствор в объеме 100 куб. см помещают в делительную воронку, добавляют 30 г высаливателя (хлорид натрия), подкисляют 10%-м раствором щавелевой кислоты (pH = 2) (контроль ведут по лакмусовой бумаге) и приливают 10 куб. см гептана. Содержимое воронки интенсивно встряхивают 10 мин., после отстаивания гептановый экстракт сливают в пробирку и центрифугируют для денатурации белка 10 мин.

Для построения градуировочной характеристики тетрахлорметана и хлорбензола аттестованный раствор в объеме 100 куб. см помещают в делительную воронку, добавляют 30 г высаливателя (хлорид натрия), подщелачивают 10%-м раствором гидроксида натрия (pH = 10) (контроль ведут по лакмусовой бумаге) и приливают 10 куб. см гексана. Содержимое воронки интенсивно встряхивают 10 мин., после отстаивания гексановый экстракт сливают в пробирку и центрифугируют для денатурации белка 10 мин.

В хроматографическую колонку через испаритель вводят по 10 куб. мм каждого экстракта градуировочного раствора и анализируют в условиях:

На полученной хроматограмме определяют площади пиков определяемых компонентов и по средним результатам из 6 серий строят градуировочную характеристику. Градуировку проверяют 1 раз в квартал и при смене партии реактивов.

Отбор проб мочи в объеме не менее 400 куб. см производят в тщательно вымытый стеклянный сосуд с притертой пробкой. Анализ мочи проводить сразу или хранить в холодильнике не более 12 ч после отбора пробы.

Для определения хлороформа и 1,2-дихлорэтана. Пробу мочи в объеме 100 куб. см помещают в делительную воронку, добавляют 30 г высаливателя (хлорид натрия), подкисляют 10%-м раствором щавелевой кислоты (pH = 2) (контроль ведут по лакмусовой бумаге) и приливают 10 куб. см гептана. Содержимое воронки интенсивно встряхивают 10 мин., после отстаивания гептановый экстракт сливают в пробирку и центрифугируют для денатурации белка 10 мин. Полученный центрифугат в объеме 10 куб. мм хроматографируют и проводят количественное определение анализируемых соединений в подготовленной пробе по калибровочному графику. Процедуру повторяют аналогично для второго образца и проводят выполнение измерений двух параллельных проб мочи.

Для определения тетрахлорметана и хлорбензола. Пробу мочи в объеме 100 куб. см помещают в делительную воронку, добавляют 30 г высаливателя (хлорид натрия), подщелачивают 10%-м раствором гидроксида натрия (pH = 10) (контроль ведут по лакмусовой бумаге) и приливают 10 куб. см гексана. Содержимое воронки интенсивно встряхивают 10 мин., после отстаивания гексановый экстракт сливают в пробирку и центрифугируют для денатурации белка 10 мин. Полученный центрифугат в объеме 10 куб. мм хроматографируют и проводят количественное определение анализируемых соединений в подготовленной пробе по калибровочному графику. Процедуру повторяют аналогично для второго образца и проводят выполнение измерений двух параллельных проб мочи. Условия выполнения измерений аналогичны условиям при установлении градуировочной характеристики (п. 7.4).

Внутренний контроль качества (ВКК) результатов измерений - повторяемость, внутрилабораторная прецизионность (воспроизводимость), точность - осуществляют с целью получения оперативной информации о качестве измерений и принятия при необходимости оперативных мер по его повышению в соответствии с нормативным документом МИ 2335-2003 "ГСОЕИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа". Методика выполнения измерений обеспечивает получение результатов измерений с погрешностью, не превышающей значений, приведенных в табл. 2 и 3.

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят раз в квартал в анализируемой серии измерений. Определяют содержание исследуемых соединений в градуировочных растворах, которые соответствуют началу, середине и концу градуировочного интервала. Градуировка признается стабильной, если расхождение между заданными и измеренными значениями концентраций не превышает 5%.

Если условие не выполняется, эксперимент повторяют. При повторном получении отрицательного результата выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

Если условие не выполняется, эксперимент повторяют. При повторном получении отрицательного результата выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

При превышении норматива контроля К эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и устраняют их.

Периодичность ВКК регламентируют в руководстве по качеству лаборатории.

1. Бандман А.Л., Войтенко Г.А., Волкова Н.В. и др. Вредные химические вещества. Углеводороды. Галогенпроизводные углеводородов: Справ. изд. /Под ред. В.А. Филова и др. Л.: "Химия", 1990.

Методические указания разработаны Пермским научно-исследовательским клиническим институтом детской экопатологии (Т.С. Уланова, Т.В. Нурисламова, Н.А. Попова).