"МУК 4.1.1809-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств эсфенвалерата в семенах и масле подсолнечника и сои методом газожидкостной хроматографии"
(утв. Минздравом России 18.12.2003)

1. Подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (проф. Т.В. Юдина), Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева (проф. В.А. Калинин) при участии Департамента госсанэпиднадзора Минздрава России (гл. специалист А.П. Веселов), под редакцией член-корр. РАМН В.В. Ракитского.

2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Минздраве России (прот. N 20 от 2 декабря 2003 г.).

3. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко 18 декабря 2003 г.

4. Введены впервые.

Фирма-производитель: Август.

Торговое наименование: Сэмпай.

Действующее вещество: эсфенвалерат (ISO).

Структурная формула (не приводится).

(S)-альфа-циано-3-феноксибензил-(S)-2-(4-хлорфенил)-3-метилбутират (IUРАС).

Мол. масса: 419,9.

Химически чистый препарат - бесцветное кристаллическое вещество (до 23 °С).

Температура плавления: 59,0 - 60,2 °С.

Растворимость: в воде при 25 °С - 0,002 мг/л;

в н-гексане - 10 - 50, метаноле - 70 - 100;

в ксилоле, ацетоне, хлороформе, этилацетате, DMSO, DMFA - > 600 (в г/кг при 25 °С).

Вещество относительно стабильно на свету, стабильно к гидролизу при рН 5,7 и 9 (25 °С).

Класс токсичности по ВОЗ - II, ЕПА - II.

В России гигиенические нормативы для сои и подсолнечника не установлены.

Область применения: инсектицид широкого спектра действия (группа пиретроидов), применяется на зерновых, плодовых, горохе и др.

2.1.1. Принцип метода

Методика основана на извлечении эсфенвалерата из семян и масла подсолнечника и сои водно-ацетоновым раствором или ацетонитрилом с последующей очисткой перераспределением между двумя несмешивающимися жидкостями и на колонке с флорисилом. Количественное определение проводят методом газожидкостной хроматографии с использованием электронозахватного детектора.

2.1.2. Избирательность метода

Избирательность метода обеспечивается очисткой экстрактов анализируемых проб и сочетанием условий хроматографирования. Присутствие других пестицидов, близких по химическому строению и области применения, определению не мешает.

2.1.3. Метрологическая характеристика метода

Метрологическая характеристика метода представлена в таблицах 1 и 2.

Аналитический стандарт эсфенвалерата 99,8%.

Ацетон, ч.д.а., ГОСТ 2603-79.

Ацетонитрил, х.ч., ТУ 6-09-3534-87.

Азот газообразный в баллонах с редуктором, ТУ-6-16-40-14-88.

Бумажные фильтры "красная лента", ТУ 6.091678-86.

Вода дистиллированная, ГОСТ 6709-79.

Гексан, х.ч., ТУ 2631-003-05807999-98.

Калий углекислый, х.ч., ГОСТ 4221-76.

Калия перманганат, ГОСТ 20490-75.

Кальция хлорид, х.ч., ГОСТ 4161-77.

Насадка для колонки: хроматон N-Super (0,125 - 0,160 мм) с 5% SE-30 или ХЕ-60 (Чехия).

Натрий сернокислый безводный, ч., ГОСТ 4166-76, свежепрокаленный.

Натрия хлорид, х.ч., ГОСТ 4233-77.

Стекловата.

Флорисил 150-250 мю (Merck, Германия), содержание воды < 2,5%.

Фосфора пентоксид, ч., МРТУ 6-09-5759-69.

Хлороформ, ч.д.а., ТУ-2631-020-11291058-96.

Этиловый спирт ректификат, х.ч., ГОСТ 18300-87.

Этиловый эфир уксусной кислоты, ч.д.а., ГОСТ 22300-76.

Элюент для колоночной хроматографии N 1: гексан - этилацетат (50:50, по объему).

Элюент для колоночной хроматографии N 2: гексан - этилацетат (20:80, по объему).

Газовый хроматограф Цвет-550 М или аналогичный с ДЭЗ (ДПР) и стеклянной насадочной колонкой длиной 1 м, внутренним диаметром 3 мм.

Весы аналитические ВЛА-200, ГОСТ 34104-80Е, или аналогичные.

Весы технические ВЛКТ-500, ГОСТ 24104-80.

Мельница лабораторная зерновая ЛМЗ, ТУ 1-01-0593-79.

Установка ультразвуковая "Серьга", ТУ 3.836.008.

Ротационный испаритель вакуумный ИР-1М, ТУ 25-11-917-74, или аналогичный.

Микрошприц МШ-10, МШ-10М, ТУ 2-833-106.

Насос водоструйный, МРТУ 42861-64.

Колбы плоскодонные на шлифах КШ500 29/32 ТС, ГОСТ 10384-72.

Колбы круглодонные на шлифах КШ50 29-32 ТС, ГОСТ 10384-72.

Воронки лабораторные В-75-110, ГОСТ 25336-82.

Воронки делительные ВД-3-500, ГОСТ 8613-75.

Цилиндры мерные на 100 куб. см, ГОСТ 1774-74.

Колбы мерные на 25, 50, 100 куб. см, ГОСТ 1770-74.

Пипетки на 1, 2, 5, 10 куб. см, ГОСТ 22292-74.

Стаканы химические, ГОСТ 25336-82Е.

Колонка стеклянная хроматографическая длиной 25 см, диаметром 10 мм.

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79). Для длительного хранения пробы семян подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие образцы могут храниться в течение года. Перед анализом пробы семян подсолнечника и сои измельчают на лабораторной мельнице.

2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей

2.5.2. Кондиционирование колонки

Перед началом анализа колонку, заполненную хроматоном N-Super (0,125 - 0,160 мм) с 5% SE-30, не присоединяя к детектору, кондиционируют в токе инертного газа (азот) при температуре 250 °С в течение 8 - 10 часов.

2.5.3. Приготовление стандартного и градуировочных растворов:

Берут точную навеску эсфенвалерата (50 мг), переносят в мерную колбу на 50 мл, растворяют навеску в ацетоне и доводят до метки (стандартный раствор с концентрацией 1,0 мг/мл). Градуировочные растворы с концентрациями 0,1; 0,2; 0,5; 1,0 и 2,0 мкг/мл готовят методом последовательного разбавления по объему, используя для разбавления гексан. Стандартный раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °С в течение 6 месяцев, градуировочные растворы - в течение недели.

Для внесения в образец при определении полноты извлечения используют градуировочные растворы.

2.5.4. Построение градуировочного графика

Для построения градуировочного графика (площадь пика - концентрация эсфенвалерата в растворе) в хроматограф вводят по 1 мкл градуировочных растворов (не менее 3-х параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4-х точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют высоты или площади пиков и строят график зависимости среднего значения высоты (площади) пика от концентрации эсфенвалерата в градуировочном растворе (мкг/мл).

2.5.5. Подготовка колонки с флорисилом для очистки экстракта

В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1 см помещают тампон из стекловаты и вносят суспензию 4,5 г флорисила в 20 мл смеси гексан:этилацетат (1:1, по объему), дают растворителю стечь до верхнего края сорбента. Колонку промывают 25 мл этой же смеси со скоростью 1 - 2 капли в секунду, после чего она готова к работе.

2.5.6. Проверка хроматографического поведения эсфенвалерата на колонке с флорисилом

В круглодонную колбу емкостью 10 мл отбирают 0,5 мл стандартного раствора эсфенвалерата с концентрацией 1 мкг/мл. Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 2 мл элюента N 1 и вносят в колонку. Колбу обмывают еще 2 мл элюента N 1 и также вносят в колонку. Затем промывают колонку 25 мл гексана и элюируют эсфенвалерат 60 мл элюента N 2 со скоростью 1 - 2 капли в секунду. Отбирают фракции по 10 мл каждая, упаривают досуха, остаток растворяют в 2 мл гексана и анализируют на содержание эсфенвалерата по п. 2.6.4. Фракции, содержащие эсфенвалерат, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 2 мл гексана и анализируют по п. 2.6.4. Рассчитывают содержание эсфенвалерата в элюате, определяя полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для этого объем элюента.

Примечание: Профиль вымывания эсфенвалерата может меняться при использовании новой партии сорбента.

2.5.7. Подготовка приборов и средств измерения

Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями стандартов и технической документации.

2.6.1. Экстракция эсфенвалерата из семян сои н подсолнечника

Навеску измельченных на лабораторной мельнице семян массой 10 г помещают в коническую колбу на 250 мл, заливают 50 - 100 мл смеси растворителей ацетон - вода (в соотношении 1:1) и экстрагируют эсфенвалерат в ультразвуковой ванне в течение 15 мин. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр ("красная лента"). Экстракцию повторяют дважды 30 мл той же смеси. Объединенный фильтрат помещают в делительную воронку и переэкстрагируют эсфенвалерат гексаном трижды порциями по 30 мл. Объединенные гексановые экстракты фильтруют через слой безводного сернокислого натрия. Полученный раствор выпаривают на ротационном испарителе при температуре бани 50 °С до полного удаления гексана. Далее проводят очистку экстрактов по п. 2.6.3.

2.6.2. Экстракция эсфенвалерата из масла подсолнечника

Навеску масла 10 г растворяют в 60 мл гексана и экстрагируют эсфенвалерат 50 мл ацетонитрила в УЗ-ванне в течение 15 мин. Полученную смесь помещают в делительную воронку объемом 250 мл. После расслоения <*> нижний ацетонитрильный слой сливают, из верхнего гексанового слоя экстрагируют эсфенвалерат ацетонитрилом еще дважды порциями по 30 мл. К объединенному ацетонитрильному экстракту добавляют воду в соотношении ацетонитрил:вода = 1:4 и переэкстрагируют эсфенвалерат хлороформом трижды порциями по 30 мл. Объединенные хлороформные экстракты сушат над безводным сернокислым натрием и выпаривают досуха на ротационном испарителе при температуре 50 °С. Сухой остаток растворяют в 5 мл ацетона и помещают в морозильную камеру с температурой -18 °С на 2 часа. Охлажденный ацетоновый раствор декантируют в круглодонную колбу на 10 мл через фильтр "красная лента", после чего фильтр промывают 2 мл ацетона. Полученный раствор упаривают на ротационном испарителе при температуре бани не выше 40 °С до полного удаления ацетона. Далее очистку проводят по п. 2.6.3.

--------------------------------

<*> В случае образования сравнительно стойких эмульсий можно добавить несколько мл насыщенного раствора хлористого натрия или этилового спирта.

2.6.3. Очистка экстрактов на колонке с флорисилом

Остаток в колбе, полученный при упаривании очищенных по пп. 2.6.1 и 2.6.2 экстрактов семян или масла, количественно переносят двумя порциями по 2 мл смеси гексан - этилацетат (1:1, по объему) в кондиционированную хроматографическую колонку (п. 2.5.5). Промывают колонку 25 мл гексана, которые отбрасывают. Эсфенвалерат элюируют 60 мл элюента N 2 (гексан - этилацетат = 2:8). Весь элюат собирают в грушевидную колбу емкостью 100 мл. Раствор выпаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 50 °С. Сухой остаток растворяют в 1 - 2 мл гексана и 1 мкл раствора вводят в хроматограф.

2.6.4. Условия хроматографирования

Газовый хроматограф "Цвет-550М" с ДПР (ДЭЗ) или аналогичный.

Колонка стеклянная 1 м х 3 мм, заполненная хроматоном N-Super (0,125 - 0,160 мм) с 5% SE-30.

Температура колонки 250 °С, испарителя 250 °С, детектора 320 °С.

Скорость газа-носителя (азот) через колонку 41 куб. см/мин.

Объем вводимой пробы 1 мкл.

Время удерживания эсфенвалерата 3 мин. 15 сек.

Линейный диапазон детектирования 0,1 - 2 нг.

2.6.5. Обработка результатов анализа

Количественное определение проводят методом абсолютной градуировки, содержание эсфенвалерата в образце семян или масла (Х, мг/кг) вычисляют по формуле:

Содержание остаточных количеств эсфенвалерата в анализируемом образце вычисляют как среднее из 3-х параллельных определений.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор эсфенвалерата 2 мкг/мл, разбавляют.

При проведении работы необходимо соблюдать требования инструкции "Основные правила безопасной работы в химической лаборатории", общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, а также инструкции по эксплуатации газового хроматографа и электрооборудования до 400 В.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости результатов измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа.

Цибульская И.А., Копытова Ф.И.

Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений (ВИЗР).