"МУК 4.1.1837-04. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств циперметрина в семенах и масле рапса, подсолнечника и сои методом газожидкостной хроматографии"
(утв. Минздравом России 13.02.2004)

1. Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.

4. Введены впервые.

Торговое наименование: Шарней.

Фирма-производитель: ЗАО "Фирма "Август".

Действующее вещество: циперметрин (смесь двух цис- и двух трансизомеров).

Структурная формула (не приводится).

RS-альфа-циано-3-феноксибензил (IRS, 3RS, 1SR, 3RS)-3-(2,2-дихлорвинил)-2,2-метилциклопропанкарбосилат.

Молекулярная масса: 416,3.

Физическое состояние: вязкая желтая жидкость.

Растворимость в воде: 0,004 мг/л.

Растворимость в органических растворителях (г/л, 20 °С): ацетон, хлороформ, циклогексанон, ксилол > 450, этанол - 337, гексан - 103.

Стабильность: термически стабилен до 220 °С.

Гигиенические нормативы: рапс, подсолнечник - 0,1 мг/кг, соя - 0,01 мг/кг; масло рапса, сои - 0,1 мг/кг.

Область применения: контактно-кишечный инсектицид широкого спектра действия из группы синтетических пиретроидов.

2.1. Основные положения

2.1.1. Принципы метода

Методика основана на определении циперметрина с помощью жидкостной хроматографии при использовании электронно-захватного детектора после экстракции циперметрина органическим растворителем, очистки экстракта перераспределением действующего вещества между несмешивающимися фазами, а также на колонке с флорисилом.

2.1.2. Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии других пестицидов, применяемых при возделывании зерновых и масличных культур.

2.1.3. Метрологическая характеристика метода

Метрологическая характеристика метода представлена в табл. 1 и 2.

2.2. Реактивы, материалы и оборудование

2.2.1. Реактивы и материалы

Циперметрин аналитический (94,2 мас. %).

Ацетонитрил, осч, "Криохром", Санкт-Петербург.

Ацетон, осч. Криохром", Санкт-Петербург.

Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-72.

н-Гексан, хч, ТУ 6-09-4521-77.

Натрия сульфат, хч, свежепрокаленный, ГОСТ 4166-76.

Натрия хлорид, хч, ГОСТ 4233-77.

Флорисил, "Sigma", 60 - 100 меш.

Этилацетат, ГОСТ 22300-76.

Азот газообразный особой чистоты, ТУ-6-16-40-14-88.

Гелий газообразный особой чистоты.

Бумага фильтровальная, ТУ 6091678-86.

Вата силанизированная, стеклянная, осч, Serva.

2.2.2. Приборы, аппаратура и посуда

Газовые хроматографы "НР 5890 series 2 plus" и "Кристалл 2000М" или аналогичный с электронно-захватным детектором. Колонка капиллярная НР-1 30 м х 0,53 мм х 0,88 мкм или ZB-1 30 м х 0,32 мм х 0,50 мкм.

Микрошприц МШ-10, ТУ-833-106, или аналогичный.

Алонж прямой с отводом для вакуума, шлиф 14/23 - 14/23, кат. N 29300, фирма "БиоХимМак СТ".

Вакуумный растворный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-76, или аналогичный.

Весы аналитические ВЛР-200 или аналогичные, ГОСТ 19401-74.

Весы технические ВЛКТ-500 или аналогичные, ГОСТ 2404-80.

Водоструйный насос, ГОСТ 10696-75.

Воронки для фильтрования со стеклянным пористым фильтром, ГОСТ 25336-82.

Воронки делительные на 250 мл, ГОСТ 25336-82Е.

Встряхиватель механический, ТУ 64-1-1081-73.

Колбы конические, плоскодонные на 250 мл, ГОСТ 9737-70.

Колбы мерные на 50 и 100 мл, ГОСТ 1770-74.

Концентраторы грушевидные и круглодонные объемом 100, 250, 500 мл, КТУ-100-14119.

Пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5 мл, ГОСТ 20292-74.

Пробирки мерные с притертыми пробками, КШ 14/23, ГОСТ 1770-74.

Цилиндры мерные на 50, 100, 250 мл, ГОСТ 1770-74.

2.3. Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов (N 2051-79 от 21.08.79 г.). Отобранные пробы семян подсушивают до стандартной влажности. Семена и масло хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в темноте при комнатной температуре.

2.4. Подготовка к определению

2.4.1. Подготовка растворителей

Очистку растворителей осуществляют общепринятыми методами.

2.4.2. Приготовление стандартных растворов

Берут точную навеску циперметрина и растворяют в ацетоне таким образом, чтобы получить стандартный раствор с концентрацией 1 мг/мл. Стандартный раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °С в течение 6 месяцев. Из стандартного раствора методом последовательного разбавления по объему готовят рабочие стандартные растворы 0,05; 0,1; 0,2; 0,5; 1; 2; 10 мкг/мл в ацетоне для внесения в образцы семян и масла, и 0,25; 0,5; 1; 5 мкг/мл в гексане для оценки полноты извлечения циперметрина. Для построения калибровочного графика готовят растворы циперметрина в гексане концентрацией 0,025; 0,05; 0,1; 0,2; 0,5 мкг/мл. Эти стандартные растворы можно использовать в течение 7 дней при хранении в холодильнике.

2.4.3. Кондиционирование колонки хроматографа

Капиллярную колонку НР-1 или аналогичную ей устанавливают в термостат хроматографа, не подсоединяя к детектору, и кондиционируют в токе гелия (20 мл/мин.) при температуре 280 °С в течение 6 часов.

2.4.4. Построение калибровочного графика

Для построения калибровочного графика снимают хроматограммы стандартных растворов, вводя в инжектор хроматографа последовательно 5 раз по 2 мкл растворов циперметрина в гексане концентрацией 0,025; 0,05; 0,1; 0,2; 0,5 мкг/мл. С помощью интегратора хроматографа вычисляют площади пиков всех изомеров циперметрина, рассчитывают среднее значение площади для каждой концентрации и строят график зависимости площади пиков от концентрации циперметрина.

2.4.5. Кондиционирование хроматографических колонок для очистки экстрактов образцов

Стеклянную колонку последовательно заполняют силанизированной стеклянной ватой, 10 г флорисила и 1,0 г сульфата натрия.

Колонку устанавливают на алонж с отводом для вакуума, промывают 20 мл смеси гексанэтилацетат (9:1) и 40 мл гексана. Промывку проводят под вакуумом непосредственно перед очисткой экстрактов образцов со скоростью 1 мл/мин., не допуская высыхания поверхности адсорбента. Элюат отбрасывают.

2.4.6. Проверка хроматографического поведения циперметрина на колонке с флорисилом

На кондиционированную колонку наносят 0,5 мкг циперметрина в 1 мл гексана. Колонку промывают 10 мл гексана, затем 15 мл смеси гексанэтилацетат (9:1) и элюат отбрасывают. Затем циперметрин элюируют последовательно десятью 2 мл порциями смеси гексанэтилацетат (9:1). Каждую фракцию упаривают отдельно, после чего сухой остаток растворяют в 1 мл гексана и аликвоту 2 мкл вводят в хроматограф.

Рассчитывают содержание циперметрина в каждой фракции и определяют объем элюента, необходимый для наиболее полного элюирования вещества с колонки. Для данной методики он равен 12 мл смеси гексанэтилацетат (9:1).

2.5. Описание методики

2.5.1. Семена рапса, подсолнечника и сои

Измельченную пробу семян массой 10 г помещают в коническую колбу (объемом 250 мл), добавляют 100 мл 80%-ного водного раствора ацетонитрила и встряхивают в течение 30 минут (для сои - 45 минут). Фильтруют через стеклянный пористый фильтр в концентратор (объемом 500 мл). К остатку в конической колбе приливают 50 мл 80%-ного водного ацетонитрила и вновь встряхивают 30 минут. Фильтруют через тот же фильтр, перенеся все количество растительного материала на фильтр. Коническую колбу и осадок на фильтре споласкивают два раза по 20 мл 80%-ного водного ацетонитрила. Объединенный экстракт упаривают на роторном вакуумном испарителе при 40 °С до водного остатка. Водный остаток переносят в делительную воронку (объемом 250 мл). Концентратор обмывают два раза 15 мл 10%-ного водного раствора хлорида натрия. Экстракцию циперметрина из водного раствора проводят гексаном последовательно двумя порциями по 30 мл и одной - 20 мл. После полного разделения фаз водный (нижний) слой сливают в тот же концентратор, а верхний собирают в концентратор (объемом 100 мл) через безводный сульфат натрия (5 г помещают в воронку со стеклянным пористым фильтром), который промывают 5 мл гексана. Объединенный гексановый экстракт упаривают досуха на роторном вакуумном испарителе при температуре 40 °С. Сухой остаток растворяют в 4 мл гексана. Аликвоту объемом 2 мл наносят на одну кондиционированную колонку с флорисилом. Колонку промывают 10 мл гексана, затем 15 мл смеси гексанэтилацетат (9:1) и элюаты отбрасывают. Затем циперметрин элюируют 12 мл смеси гексанэтилацетат (9:1) со скоростью 1 мл/мин. Элюат упаривают досуха на роторном вакуумном испарителе при 40 °С, растворяют в 2 мл гексана (или, в зависимости от содержания циперметрина, в другом объеме гексана) и 2 мкл вводят в хроматограф. Для образцов семян сои с низким содержанием циперметрина (< МДУ), проводят очистку каждой половины экстракта, объединяют их перед упариванием и затем растворяют в 1 мл гексана.

2.5.2. Масло рапса, подсолнечника и сои

Навеску масла массой 5 г помещают в делительную воронку объемом 250 мл и растворяют в 50 мл гексана. Затем приливают 50 мл ацетонитрила. Встряхивают в течение 2 мин. Ацетонитрильный экстракт (нижний слой) собирают через безводный сульфат натрия в концентратор (объемом 250 мл). Экстракцию ацетонитрилом повторяют дважды тем же количеством растворителя. Объединенный экстракт упаривают досуха на роторном вакуумном испарителе при 40 °С.

Упаренную пробу растворяют в 4 мл гексана, разделяют ее после растворения пополам и наносят на подготовленную колонку с флорисилом. Промывают ее 10 мл гексана, затем 15 мл смеси гексан - этилацетат (9:1). Элюат отбрасывают. Циперметрин элюируют 12 мл смеси гексан - этилацетат (9:1) со скоростью 1 мл/мин. Элюат упаривают досуха на роторном вакуумном испарителе при 40 °С. Сухой остаток растворяют в 2 мл гексана (или, в зависимости от содержания циперметрина, в другом объеме гексана) и аликвоту 1 мкл хроматографируют.

2.6. Условия хроматографирования

Хроматограф "HP 5890 series 2 Plus" с электронно-захватным детектором (ЭЗД).

Капиллярная колонка - НР-1 30 м х 0,53 мм х 0,88 мкм. Расход газов: азот - 57,8 мл/мин.; газ-носитель гелий - 2,5 мл/мин. (30 psi). Режим без деления потока. Температурный режим: детектор - 320 °С, инжектора - 270 °С, термостат колонки - 260 °С 16 мин., далее 60 °С/мин. до 280 °С, выдержка 19,67 мин. Объем вводимой пробы 1 - 2 мкл. Время удерживания трех пиков изомеров циперметрина: 13,25; 13,59; 13,95 мин. (Cis-I, Trans-III, Cis-II + Trans-IV соответственно). Линейный диапазон детектирования 0,025 - 0,5 нг. Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю площадь суммы трех пиков.

Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю площадь суммы трех пиков.

2.6.1. Возможность использования другого газового хроматографа и колонки

Удовлетворительные результаты также дает использование газового хроматографа "Кристалл 2000М" с электронно-захватным детектором (ЭЗД) и хроматографической капиллярной колонки ZB-1 30 м х 0,32 мм х 0,50 мкм при следующих условиях хроматографирования: Температурный режим: детектор - 320 °С, инжектора - 270 °С, термостат колонки - 260 °С 16 мин., далее 60 °С/мин. до 280 °С, выдержка 19 мин.; расход газа-носителя 1 - 2,96 мл/мин. (скорость - 40 см/с), сброс газа 2 - 20 мл/мин. Объем вводимой пробы 2 мкл. Время удерживания трех пиков изомеров циперметрина: 13,50; 14,20; 14,47 мин. (Cis-I, Trans-III, Cis-II + Trans-IV соответственно). Линейный диапазон детектирования 0,05 - 0,5 нг.

2.7. Обработка результатов анализа

Содержание циперметрина рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.

Всероссийский научно-исследовательский институт фитопатологии.