"МУК 4.1.1452-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств дикамбы в зерне, соломе, зеленой массе растений, воде и почве газожидкостной и тонкослойной хроматографией. Методические указания"
(утв. Минздравом России 24.06.2003)

1. Сборник подготовлен: Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (чл.-корр. РАМН, проф. В.Н. Ракитский, проф. Т.В. Юдина); Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева (проф. В.А. Калинин, к.х.н. А.В. Довгилевич); при участии Департамента госсанэпиднадзора Минздрава России (А.П. Веселов). Разработчики методик указаны в конце каждой из них.

2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по госсанэпиднормированию при Минздраве России.

3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко 24 июня 2003 г.

4. Введены с 30 июня 2003 г.

5. Введены впервые.

Фирма-производитель: "Гарда", Индия.

Торговое название: дикамба.

Название действующего вещества по ISO: дикамба.

Название действующего вещества по IUPAC: 3,6-дихлор-о-анисовая кислота.

Структурная формула: (не приводится).

ПДК в воде 0,02 мг/л, ПДК в почве 0,2 - 0,25 мг/кг.

МДУ в зерне хлебных злаков "не допускается". Норматив "не допускается" установлен при нижнем пределе методом ТСХ 0,3 - 0,5 мг/кг и методом ГЖХ 1,5 мг/кг см в книге "Методы определения микроколичеств пестицидов в продуктах питания, кормах и внешней среде"/Под ред. М.А. Клисенко, М.: Колос, 1997, с. 188 - 238.

МДУ в США в зерне - 0,5 мг/кг, в молоке - 0,05 мг/кг.

Метод основан на извлечении дикамбы из подкисленной пробы диэтиловым эфиром, очистке экстракта перераспределением в водно-щелочную среду, а затем, после подкисления раствора, в хлороформ с последующей доочисткой сублимацией в вакууме. Для зеленой массы растений перед сублимацией проводится очистка активированным углем.

Определение дикамбы проводят ГЖХ в виде метилового эфира или ТСХ.

Метрологическая характеристика метода представлена в табл. 1.

Метод селективен. Селективность метода обеспечивается сочетанием метода ГЖХ с использованием двух альтернативных колонок, а ТСХ - двух альтернативных систем подвижных растворителей.

Отбор проб для анализа проводят в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными Минздравом СССР от 21.08.79 N 2051-79.

Для приготовления стандартного раствора 1 с содержанием 100 мкг/мл в мерную колбу вместимостью 100 мл помещают навеску дикамбы (10 мг), взятую с точностью до +/- 0,2 мг. Навеску растворяют в ацетоне и доводят до метки тем же растворителем.

Для приготовления раствора 2 из раствора 1 пипеткой отбирают 1 мл и переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят до метки ацетоном.

Стандартные растворы стабильны при хранении в холодильнике в течение 6 месяцев.

2.5.2.1. Приготовление диазометана.

В круглодонную колбу 1 вместимостью 100 мл, снабженную капельной воронкой с байпасом и обратным холодильником, помещают 12 г (0,2 моля) КОН, 6 мл метилового спирта, 6 мл или 6,1 г (0,12 моля) гидразин-гидрата. Колбу охлаждают до +5 °С смесью воды со льдом и начинают медленно, по каплям прибавлять из капельной воронки 10 мл (0,12 моля) хлороформа, постепенно увеличивая скорость. При этом реакционная масса становится желтой.

Выделяющийся в ходе реакции диазометан через обратный холодильник, соединенный с капилляром стеклянным переходом, поступает в двугорлую колбу-приемник 2 вместимостью 100 мл, содержащую 50 мл осушенного серного эфира. Колба 2 погружена в баню, содержащую смесь воды со льдом.

По окончании прибавления хлороформа реакционную колбу нагревают до 40 °С на водяной бане для полного удаления диазометана из реакционной массы. После обесцвечивания реакционной массы и стенок холодильника реакцию считают законченной. Диазометан хранят в склянке с притертой пробкой в морозильной камере.

2.5.2.2. Подготовка газохроматографической колонки.

Для газохроматографического анализа используют готовый товарный носитель хроматон N-AW-DMCS (0,16 - 0,20 мм) с 5% SE-30 и хроматон N-AW-DMSC (0,16 - 0,20 мм) с 5% OV-17. Хроматографическую колонку заполняют насадкой с подсоединением слабого вакуума. Достаточная плотность набивки обеспечивается равномерной загрузкой и непрерывным постукиванием по колонке. Колонку кондиционируют при скорости азота 30 мл/мин. в режиме программирования температуры от 50 до 220 °С со скоростью нагрева 2 °С/мин., а затем в изотермическом режиме при температуре 220 °С в течение 6 - 8 ч без подсоединения колонки к детектору.

Общую подготовку прибора к работе проводят согласно инструкции.

2.5.3.1. Приготовление градуировочных растворов.

Градуировочные растворы дикамбы в ацетоне с концентрацией от 10 до 60 мкг/мл готовят соответствующим разбавлением стандартного раствора в пробирках с притертыми пробками вместимостью 5 мл, согласно табл. 2.

Допустимый срок хранения градуировочных растворов при комнатной температуре не более 10 дней.

2.5.3.2. Приготовление проявляющих растворов.

2.5.3.3. Приготовление хроматографической камеры.

Хроматографическую камеру за 1 час до начала хроматографирования заливают смесью подвижных растворителей хлороформ-ацетон (3:1) и хлороформ-уксусная кислота (20:1). Объем подвижных растворителей в камере должен по высоте находиться не выше, чем на 0,7 - 1,0 см от дна камеры.

Зерно размалывают на кофейной мельнице до консистенции манной крупы. Отбирают навеску массой 20 г. Солому и зеленую массу растений измельчают ножом или ножницами и отбирают навески массой 5 г. Почву просеивают через почвенное сито, отбирают навески массой 20 г.

Объединенный экстракт концентрируют с помощью ротационного вакуумного испарителя до объема 30 - 40 мл. Остаток переносят в делительную воронку вместимостью 150 мл и несколько раз ополаскивают колбу 20%-м щелочным раствором КСl, общим объемом 20 мл. Промывные воды также переносят в делительную воронку и проводят экстракцию калиевой соли дикамбы путем встряхивания воронки в течение одной-двух минут. После разделения слоев, нижнюю, водную фазу, сливают в другую делительную воронку вместимостью 150 мл. Экстракцию повторяют еще один раз тем же количеством раствора КСl.

Объединенный водный раствор подкисляют серной кислотой, разбавленной водой (1:10), до рН 1 и трижды экстрагируют дикамбу хлороформом, порциями один раз по 30 и два раза по 20 мл. Хлороформный экстракт порциями фильтруют через слой безводного сульфата натрия в грушевидную колбочку вместимостью 50 мл. Каждую порцию фильтрата концентрируют с помощью ротационного вакуумного испарителя до объема 2 - 3 мл. Фильтр со слоем сульфата натрия промывают 5 мл хлороформа. Последнюю порцию сконцентрированного экстракта количественно, хлороформом, переносят в патрон сублиматора. На горячей водяной бане из сублиматора полностью отгоняют растворитель, регулируя равномерное распределение остатка по дну сублиматора. В патрон помещают "палец" сублиматора, подсоединяют холодную воду и вакуум. Сублимацию дикамбы проводят на кипящей водяной бане в течение 30 мин. при давлении 0,2 мм рт. ст. После окончания сублимации дикамбу смывают с "пальца" сублиматора в грушевидную колбочку вместимостью 25 мл ацетоном, общим объемом 15 мл. С помощью ротационного вакуумного испарителя из колбочки полностью отгоняют растворитель. К сухому остатку пипеткой добавляют 0,5 мл гексана, колбочку закрывают пробкой на шлифе и стенки колбы ополаскивают растворителем. Далее определение проводят методом ТСХ по п. 2.7.3.

При определении дикамбы методом ГЖХ по п. 2.7.2 к сухому остатку пипеткой добавляют 2 мл раствора диазометана в диэтиловом эфире. Через 10 - 15 мин. диазометан и эфир полностью отдувают слабым током воздуха. К сухому остатку пипеткой добавляют 4 мл гексана. Колбочку закрывают пробкой на шлифе и ее стенки тщательно ополаскивают растворителем.

Метилирование дикамбы и дальнейшие операции проводят по схеме, описанной выше для зерна.

Определение дикамбы в воде проводят только методом ГЖХ.

Почва. Анализ почвы проводят так же, как анализ зерна.

Из 4 мл подготовленного по п. 2.7.1 экстракта в хроматограф вводят 2 мкл.

Условия хроматографирования:

Количественное определение проводят методом соотношения со стандартом по высоте пиков.

Серию стандартов готовят следующим образом: в 5 пробирок, вместимостью 5 мл, с пробками на шлифах, пипеткой вносят из стандартного раствора 2 0,1; 0,2; 0,4; 1,0 и 2,0 мл, что соответствует 0,1; 0,2; 0,4; 1,0 и 2,0 мкг дикамбы. Из пробирок на горячей водяной бане или слабым током воздуха полностью отгоняют растворитель. К сухому остатку пипеткой одновременно с рабочей пробой добавляют по 2 мл раствора диазометана. Через 10 - 15 мин. эфир и диазометан отдувают слабым током воздуха. К сухому остатку пипеткой добавляют 4 мл гексана. Пробирку закрывают пробкой на шлифе и ее стенки тщательно обмывают растворителем. Параллельно с рабочей пробой в хроматограф вводят по 2 мкл полученных растворов. Расчет проводят по стандартному раствору, высота пика которого наиболее близка к высоте пика рабочей пробы.

На пластинку силуфол или сорбфил микрошприцем на 100 мкл или микропипеткой с оттянутым концом наносят 100 мкл (0,1 мл) полученного раствора. Справа и слева от рабочей пробы таким же образом наносят серию стандартных растворов дикамбы (1, 2, 3, 4, 5, 6 мкг). Необходимо следить, чтобы диаметр пятна наносимого раствора не превышал 0,5 см.

Содержание дикамбы в анализируемой пробе (X) в мг/кг, мг/л, вычисляют по формуле:

Если при введении в хроматограф получаются слишком большие пики или происходит зашкаливание, к рабочему раствору пипеткой добавляют замеренное количество гексана и анализируют более разбавленный раствор.

Количественное определение дикамбы в пробе проводят путем сравнения площади и интенсивности окраски пятен рабочей пробы и серии стандартов.

Содержание дикамбы в анализируемой пробе (X) в мг/кг, мг/л вычисляют по формуле:

Соблюдать требования безопасности, принятые для работы с пестицидами, легковоспламеняющимися жидкостями, в частности с диэтиловым эфиром.

Полное отсутствие открытого огня в лаборатории!!!

Соблюдать "Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях, отделениях, отделах санитарно-эпидемиологических учреждений системы МЗ СССР" N 2455-81 от 20.10.81, а также меры предосторожности при работе с ядовитым и взрывоопасным диазометаном.

Г.Ф. Бельская, К.Ф. Новикова, Г.А. Козырева, ФГУП ВНИИХСЗР, г. Москва.