"МУК 4.1.1653-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение массовых концентраций (3-бета,5-бета,12-бета)-3-[(О-2,6-дидеокси-бета-D-рибогексопиранозил-(1->4)-О-2,6-дидеокси-бета-D-рибогексопиранозил-(1->4)-О-2,6-дидеокси-бета-D-рибогексопиранозил)окси-]-12,14-дигидроксикард-20(22)-енолида (дигоксин) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Минздравом России 29.06.2003)

1. Методические указания подготовлены творческим коллективом специалистов Научно-исследовательского института медицины труда РАМН (Л.Г. Макеева - руководитель, Г.В. Муравьева, Е.М. Малинина, Е.Н. Грицун, Г.Ф. Громова) при участии А.И. Кучеренко (Департамент Госсанэпиднадзора Минздрава России).

2. Разработаны сотрудниками Государственного унитарного предприятия "Всероссийский научный центр по безопасности биологически активных веществ" (ГУП ВНЦ БАВ).

3. Рекомендованы к утверждению на совместном заседании группы Главного эксперта Комиссии по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию по проблеме "Лабораторно-инструментальное дело и метрологическое обеспечение" и методбюро п/секции "Промышленно-санитарная химия" Проблемной комиссии "Научные основы гигиены труда и профпатологии".

4. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Министерстве здравоохранения Российской Федерации.

5. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации 29.06.03.

6. Введены впервые.

Сборник методических указаний "Измерение концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны" (выпуск 43) разработан с целью обеспечения контроля соответствия фактических концентраций вредных веществ их предельно допустимым концентрациям (ПДК) и ориентировочным безопасным уровням воздействия (ОБУВ) и являются обязательными при осуществлении санитарного контроля.

Включенные в данный сборник 28 методик контроля вредных веществ в воздухе рабочей зоны разработаны и подготовлены в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 ССБТ "Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования", ГОСТ Р 8.563-96 "Государственная система обеспечения единства измерений. Методики выполнения измерений", МИ 2335-95 "Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа", МИ 2336-95 "Характеристики погрешности результатов количественного химического анализа. Алгоритмы оценивания".

Методики выполнены с использованием современных методов исследования, метрологически аттестованы и дают возможность контролировать концентрации химических веществ на уровне и ниже их ПДК и ОБУВ в воздухе рабочей зоны, установленных в дополнениях 1 к гигиенически нормативам ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны" и ГН 2.2.5.1314-03 "Ориентировочные безопасные уровни воздействия (ОБУВ) вредных веществ в воздухе рабочей зоны".

Методические указания по измерению массовых концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны предназначены для центров госсанэпиднадзора, санитарных лабораторий промышленных предприятий при осуществлении контроля за содержанием вредных веществ в воздухе рабочей зоны, а также научно-исследовательских институтов и других заинтересованных министерств и ведомств.

Настоящие Методические указания устанавливают количественный анализ воздуха рабочей зоны на содержание дигоксина в диапазоне массовых концентраций 0,001 - 0,010 мг/куб. м методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

2.1. Структурная формула (не приводится).

2.3. Молекулярная масса 780,95.

2.4. Регистрационный номер CAS 20830-75-5.

2.5. Физико-химические свойства.

Дигоксин - белый кристаллический порошок без запаха с температурой плавления более 235 °С (с разложением). Практически нерастворим в воде, очень мало растворим в спирте этиловом 95%-м и хлороформе, растворим в спирте метиловом.

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

2.6. Токсикологическая характеристика.

Дигоксин - кардиотоническое, антиаритмическое сердечно-сосудистое средство из группы сердечных гликозидов (препаратов наперстянки), эффективен в чрезвычайно низких дозах (от 100 мкг). Дигоксин чрезвычайно опасен и токсичен при всех путях поступления в организм, обладает чрезвычайно выраженной кожно-резорбтивной и кумулятивной активностью, раздражающим действием, способен вызывать тератогенные и эмбриотоксические эффекты.

Контроль дигоксина в воздухе рабочей зоны на уровне чувствительности не менее 0,001 мг/куб. м; класс опасности - первый, с пометкой "++".

Методика обеспечивает выполнение измерений массовых концентраций дигоксина с погрешностью, не превышающей +/- 16%, при доверительной вероятности 0,95.

Измерения массовой концентрации дигоксина выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с УФ-детектированием при длине волны 220 нм.

Отбор проб проводят с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерения содержания дигоксина в анализируемом объеме пробы - 0,1 мкг.

Нижний предел измерения концентрации дигоксина в воздухе - 0,001 мг/куб. м (при отборе 2000 куб. дм воздуха).

Метод специфичен в условиях производства таблеток дигоксина. Определению не мешают глюкоза, сахар, сахар молочный (лактоза), крахмал картофельный, тальк, кальций стеариновокислый.

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы.

6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.

6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ должны соблюдаться меры противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91.

6.3. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа высокого давления соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора.

6.4. При проведении работ с дигоксином следует соблюдать особые меры предосторожности, так как вещество чрезвычайно ядовито. Работы проводят в резиновых перчатках, респираторе, в вытяжном шкафу.

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица с высшим или средним специальным образованием, прошедшие обучение и имеющие навыки работы по анализу веществ методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

8.1. Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20 +/- 5) °С, атмосферном давлении 84 - 106 кПа и относительной влажности воздуха не более 80%.

8.2. Выполнение измерений на жидкостном хроматографе высокого давления проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: приготовление растворов, растворителя и подвижной фазы, подготовку жидкостного хроматографа высокого давления, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

9.1.1. Основной стандартный раствор дигоксина с концентрацией 500 мкг/куб. см готовят растворением 0,0526 г вещества в 90%-м растворе спирта метилового в мерной колбе вместимостью 100 куб. см. Раствор устойчив в течение месяца при хранении в холодильнике.

9.1.2. Стандартный раствор дигоксина N 1 с концентрацией 100 мкг/куб. см готовят разведением 20 куб. см основного стандартного раствора 90%-м раствором спирта метилового в мерной колбе вместимостью 100 куб. см. Раствор устойчив в течение 2-х недель при хранении в холодильнике.

9.1.3. Стандартный раствор дигоксина N 2 с концентрацией 20 мкг/куб. см готовят разведением 20 куб. см стандартного раствора N 1 90%-м раствором спирта метилового в мерной колбе вместимостью 100 куб. см. Раствор используют свежеприготовленным.

9.1.4. Спирт метиловый, 90%-й раствор: 90 куб. см спирта метилового помещают в мерную колбу вместимостью 100 куб. см, доводят объем раствора бидистиллированной водой до метки и перемешивают. Раствор годен в течение месяца при хранении в прохладном, защищенном от света месте. Непосредственно перед измерением раствор фильтруют с помощью фильтров "Миллипор" и дегазируют под вакуумом.

9.1.5. Элюент: спирт метиловый-ацетонитрил-вода в соотношении (10:30:60) по объему. Непосредственно перед измерением раствор фильтруют с помощью фильтров "Миллипор" и дегазируют под вакуумом. Раствор хранят до полного использования.

Подготовку к работе жидкостного хроматографа высокого давления проводят в соответствии с руководством по его эксплуатации.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика от массы дигоксина в хроматографируемом объеме пробы, устанавливают по методу абсолютной калибровки с использованием 6 серий градуировочных растворов из 5 параллельных определений для каждой серии согласно табл. 1.

Растворы применяют свежеприготовленными.

Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб:

адсорбент - сорбент "Superspher(R) 60 RP-select В" с размером частиц 4 мкм;

подвижную фазу после перемешивания переносят в подходящий сосуд и дегазируют пропусканием гелия в течение 15 мин.;

Градуировочный график строят в координатах: количество введенного дигоксина (мкг) - площадь пиков.

Градуировку выполняют не менее чем по 6 точкам, проводя 5 параллельных измерений для каждой концентрации.

Проверка градуировочного графика проводится 1 раз в квартал или в случае использования новой партии реактивов, оборудования и после ремонта прибора.

Воздух с объемным расходом 200 куб. дм/мин. аспирируют через фильтр АФА-ВП-20, помещенный в фильтродержатель. Для измерения дигоксина на уровне 0,001 мг/куб. м необходимо отобрать 2000 куб. дм воздуха. Отобранные пробы хранят в бюксах с пришлифованными крышками в защищенном от света месте при комнатной температуре в течение месяца.

Фильтр с отобранной пробой помещают в химический бюкс с пришлифованной крышкой вместимостью 25 куб. см, добавляют 5 куб. см растворителя для обработки фильтров (спирт метиловый, 90%-й раствор) и оставляют на 15 мин., периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения вещества. Затем фильтр тщательно отжимают и повторно обрабатывают 5 куб. см того же растворителя. Фильтр снова тщательно отжимают и удаляют. Оба экстракта последовательно фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм в грушевидную колбу и упаривают досуха с помощью роторного испарителя при температуре 60 - 70 °С. Сухой остаток растворяют в 1,0 куб. см растворителя для обработки фильтров (спирт метиловый, 90%-й раствор) и используют полученный раствор для анализа. Степень десорбции с фильтра 97%.

Хроматографирование раствора пробы проводят в тех же условиях, что и хроматографирование градуировочных растворов. Количественное определение содержания дигоксина (мкг) в хроматографируемом объеме раствора пробы проводят по предварительно построенному градуировочному графику.

Примечание. Анализируемый раствор фильтруют для удаления нерастворимых в 90%-м растворе спирта метилового вспомогательных веществ, входящих в состав таблеток дигоксина.

Массовую концентрацию дигоксина (С, мг/куб. м) в воздухе вычисляют по формуле:

где:

а - содержание дигоксина в хроматографируемом объеме пробы, найденное по градуировочному графику, мкг;

в - общий объем пробы, куб. мм;

б - объем пробы, взятой для анализа, куб. мм;

V - объем воздуха, отобранного для анализа (куб. дм) и приведенного к стандартным условиям (Прилож. 1).

Результат количественного анализа представляют в виде: С +/- ДЕЛЬТА, мг/куб. м, Р = 0,95. Значение ДЕЛЬТА = 0,000027 + 0,16С, мг/куб. м, где ДЕЛЬТА - характеристика погрешности.

Значения характеристики погрешности, норматива оперативного контроля погрешности и норматива оперативного контроля воспроизводимости приведены в табл. 2.

Метрологические характеристики приведены в виде зависимости от значения массовой концентрации анализируемого компонента в пробе - С.

Оперативный контроль погрешности выполняют в одной серии с КХА рабочих проб.

Образцами для контроля являются реальные пробы воздуха рабочей зоны.

Объем отобранной для контроля пробы должен соответствовать удвоенному объему, необходимому для проведения анализа по методике. После отбора пробы экстракт с фильтра делят на две равные части и анализируют в точном соответствии с прописью методики, максимально варьируя условия проведения анализа, т.е. получают два результата анализа в разных лабораториях или в одной, используя при этом разные наборы мерной посуды, разные партии реактивов. Два результата анализа не должны отличаться друг от друга на величину допускаемых расхождений между результатами анализа:

При превышении норматива оперативного контроля воспроизводимости эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива D выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и устраняют их.

Для проведения серии анализов из 6 проб требуется 5 ч.

Методические указания разработаны Государственным унитарным предприятием "Всероссийский научный центр по безопасности биологически активных веществ" (В.П. Жестков, А.П. Крымов, В.Ф. Алещенко, Л.И. Крымова).

Приведение объема воздуха к стандартным условиям (температура 20 °С и давление 101,33 кПа) проводят по формуле:

1. Аглиам

2. N-ацетилглицин

3. Буторфанола тартрат

4. Глипина гидрохлорид

5. Глицират

6. Глицирризинат натрия

7. Дигоксин

8. Дийодид

9. Идебенон

10. Карбоксим

11. Кларитин

12. Кларотадин

13. Лоратадин

14. Д-мальтоза моногидрат

15. Метотрексат

16. Моксонидин

17. Оксимоэфир

18. 5-окситриптамина адипинат

19. Педифен

20. Пентифин

21. Рутин

22. Серотонина адипинат

23. Солодовый сахар

24. Физиотенз

25. Фторурацил

26. Цинт