"МУК 4.1.1403-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств хлоримурон-этила в воде, почве, семенах и масле сои методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Минздравом России 24.06.2003)

1. Сборник подготовлен: Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (чл.-корр. РАМН, проф. В.Н. Ракитский, проф. Т.В. Юдина); Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева (проф. В.А. Калинин, к.х.н. А.В. Довгилевич); при участии Департамента госсанэпиднадзора Минздрава России (А.П. Веселов). Разработчики методик указаны в конце каждой из них.

2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по госсанэпиднормированию при Минздраве России.

3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко 24 июня 2003 года.

4. Введены с 30 июня 2003 года.

5. Введены впервые.

Фирма-производитель: Лазорик Агро.

Торговое наименование: Классик.

Действующее вещество: хлоримурон-этил.

Структурная формула: (не приводится).

1-(4-хлор-6-метоксипиримидин-2-илуреидосульфонил)бензойной кислоты этиловый эфир (IUРАС).

Этил 2-[[[[(4-хлоро-6-метокси-2-пиридиминил)амино]карбонил]амино]сульфонил]бензоат (С.А.).

Область применения препарата. Классик - гербицид для уничтожения многих видов однолетних двудольных сорных растений на сое, норма расхода 12 - 24 г/га для вегетирующих растений и 24 - 52,5 г/га при внесении в почву до посева или до появления всходов. Нельзя использовать препарат в почвах с рН 7 и выше (см. физические свойства). Чувствительные культуры в севообороте - кукуруза, сорго, хлопчатник, рис. Применяется также вместе с метрибузином (препараты канопи, превю) и минуром (препараты джемени, лорокс-плюс).

2.1.1. Принцип метода

Методика основана на определении хлоримурон-этила методом ВЭЖХ с использованием УФ детектора после его извлечения из образцов водно-ацетоновой смесью и очистке путем перераспределения между двумя жидкими фазами, а также на колонке с силикагелем.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Метрологическая характеристика метода представлена в табл. 1 и 2.

2.1.3. Избирательность метода

Присутствие других пестицидов, близких по химическому строению и области применения, определению не мешает.

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.1979). Пробы растительных материалов хранятся до анализа в морозильной камере при температуре -18 °С, перед проведением анализа их измельчают на лабораторной мельнице.

2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей

Органические растворители перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Гексан и хлористый метилен встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания свежей порции кислоты, затем промывают водой, 2%-ным раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего его сушат над гидроксидом натрия и перегоняют.

Ацетонитрил сушат над пентоксидом фосфора и перегоняют; отогнанный растворитель повторно перегоняют над углекислым калием.

2.5.2. Кондиционирование колонки

Перед началом анализа колонку Symmetry-C18 кондиционируют в потоке подвижной фазы (1 мл/мин.) до стабилизации нулевой линии в течение 1 - 2 ч.

2.5.3. Приготовление растворов

2.5.4. Приготовление стандартного и градуировочных растворов

Берут точную навеску хлоримурон-этила (50 мг), переносят в мерную колбу на 50 мл, растворяют навеску в ацетонитриле и доводят до метки (стандартный раствор с концентрацией 1,0 мг/мл). Градуировочные растворы с концентрациями 0,1; 0,2; 0,5; 1,0 и 2,0 мкг/мл готовят методом последовательного разбавления, используя раствор подвижной фазы (смесь ацетонитрил-0,005 М ортофосфорная кислота [55:45, по объему]). Стандартный раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °С в течение 1 месяца, градуировочные растворы - в течение суток.

2.5.5. Построение градуировочного графика

Для построения градуировочного графика (площадь пика - концентрация хлоримурон-этила в растворе) в хроматограф вводят по 20 мкл градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации хлоримурон-этила в градуировочном растворе (мкг/мл).

2.5.6. Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта

В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1 см помещают тампон из стекловаты, закрывают кран и вносят суспензию 5 г силикагеля в 20 мл смеси гексан-ацетон (85:15, по объему). Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента. Колонку последовательно промывают 50 мл смеси гексан-ацетон (70:30, по объему) и 30 мл смеси гексан-ацетон (85:15, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в секунду, после чего она готова к работе.

2.5.7. Проверка хроматографического поведения хлоримурон-этила на колонке с силикагелем

В круглодонную колбу емкостью 10 мл отбирают 0,1 мл стандартного раствора хлоримурон-этила с концентрацией 10 мкг/мл. Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 5 мл элюента N 1 и наносят на колонку. Колбу обмывают еще 5 мл элюента N 1 и также наносят на колонку. Промывают колонку 25 мл элюента N 1, затем 50 мл элюента N 2 со скоростью 1 - 2 капли в секунду. Отбирают фракции по 10 мл каждая, упаривают, остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы для ВЭЖХ (п. 2.5.3) и анализируют на содержание хлоримурон-этила по п. 2.6.6.

Фракции, содержащие хлоримурон-этил, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и вновь анализируют по п. 2.6.6. Рассчитывают содержание хлоримурон-этила в элюате, определяя полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для этого объем элюента.

Примечание: параметры удерживания хлоримурон-этила и сопутствующих экстрактивных веществ могут меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.

2.5.8. Подготовка приборов и средств измерения

Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями стандартов и технической документации.

--------------------------------

<*> В случаях, когда очистка экстрактов контрольных проб (п. 2.6.3) дает удовлетворительные результаты, дополнительную очистку на колонке с силикагелем можно исключить.

2.6.5. Очистка на колонке с силикагелем

Сухой остаток в колбе, полученный при упаривании очищенных по п. п. 2.6.2 и 2.6.3 экстрактов почвы и растительного материала количественно переносят двумя 3-мл порциями смеси гексан-ацетон (85:15, по объему) в кондиционированную хроматографическую колонку (п. 2.5.6). Промывают колонку 25 мл элюента N 1, которые отбрасывают. Хлоримурон-этил элюируют 50 мл элюента N 2, собирая элюат в грушевидную колбу емкостью 100 мл. Раствор упаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре не выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и 20 мкл раствора вводят в жидкостный хроматограф.

2.6.6. Условия хроматографирования

Жидкостный хроматограф "Альянс" фирмы "Waters" с УФ-детектором (Waters 2487), снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки или другой с аналогичными характеристиками.

Колонка Symmetry - С18 (250 х 4,6) мм, зернение 5 мкм (Waters, USA) или аналогичная.

Температура колонки 30 °С.

Предколонка Waters Symmetry C18 для защиты аналитической колонки.

Подвижная фаза: ацетонитрил-0,005 М ортофосфорная кислота в соотношении 55:45 (по объему).

Скорость потока элюента: 1 мл/мин.

Рабочая длина волны 236 нм.

Объем вводимой пробы 20 мкл.

Время удерживания хлоримурон-этила 9,2 +/- 0,1 мин.

Линейный диапазон детектирования 0,1 - 2,0 мкг/мл.

2.6.7. Обработка результатов анализа

Количественное определение проводят методом абсолютной градуировки, содержание хлоримурон-этила в образце воды, почвы или растительных материалов (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

Содержание остаточных количеств хлоримурон-этила в анализируемом образце вычисляют как среднее из 3 параллельных определений.

Образцы, дающие пики большие чем пик стандартного раствора хлоримурон-этила с концентрацией 2 мкг/мл, разбавляют.

При проведении работы необходимо соблюдать требования инструкции "Основные правила безопасной работы в химической лаборатории", общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, а также инструкции по эксплуатации жидкостного хроматографа и электрооборудования до 400 В.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости результатов измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95 "ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа".

Юзихин О.С, Черменская Т.Д., Цибульская И.А., Долженко В.И. Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений.