"МУК 4.1.1241-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение концентраций феназахина в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Минздравом России 16.03.2003)

1. Подготовлены: Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана; Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева; при участии Департамента Госсанэпиднадзора Минздрава России. Разработчики методики указаны в конце.

2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по госсанэпиднормированию при Минздраве России.

3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко 16 марта 2003 г.

4. Введены впервые.

5. Введены с 1 июля 2003 г.

Настоящие Методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения в воздухе рабочей зоны массовой концентрации феназахина в диапазоне 0,05 - 0,5 мг/куб. м.

Феназахин - действующее вещество препарата АНТИКЛЕЩ, СК (200 г/л), фирма-производитель ТПК Техноэкспорт, Россия.

4-[2-(4-трет-бутилфенил)этокси]хиназолин (IUPAC)

Агрегатное состояние в воздухе рабочей зоны - аэрозоль.

Область применения препарата. Феназахин рекомендуется к применению в качестве акарицида против паутинных и галлообразующих клещей на яблоне, груше и винограде в личных подсобных хозяйствах.

Ориентировочно безопасный уровень воздействия (ОБУВ) в воздухе рабочей зоны - 0,3 мг/куб. м.

Методика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью (дельта), не превышающей +/- 15,1%, при доверительной вероятности 0,95.

Измерения концентраций феназахина выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором.

Концентрирование феназахина из воздуха осуществляют на бумажные фильтры "синяя лента", экстракцию с фильтра проводят ацетоном.

Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 1 - 2,5 нг.

Определению не мешают компоненты препаративной формы, а также пестициды, применяемые при выращивании яблони, груши, винограда.

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1005-88.

4.2. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

Перед выполнением измерений проводят очистку ацетонитрила, н-гексана, подготовку подвижных фаз для ВЭЖХ, приготовление растворов, кондиционирование хроматографических колонок, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 ч, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.

7.3.1. Подвижная фаза N 1

В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 850 куб. см ацетонитрила, добавляют 150 куб. см бидистиллированной воды, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

7.3.2. Подвижная фаза N 2

В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 900 куб. см метанола, добавляют 100 куб. см бидистиллированной воды, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

7.3.3. Подвижная фаза N 3

В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 970 куб. см н-гексана, добавляют 30 куб. см изопропилового спирта, перемешивают, фильтруют.

7.4.1. Серия А (измерение по п. 7.7.1.1)

7.4.1.1. Исходный раствор феназахина в ацетонитриле для градуировки (концентрация 100 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,01 г феназахина, растворяют в 50 - 70 куб. см ацетонитрила, доводят до метки этим же растворителем, тщательно перемешивают. Раствор хранится в морозильной камере в течение месяца.

Рабочие градуировочные растворы феназахина готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного стандартного раствора.

7.4.1.2. Раствор N 1 феназахина для градуировки (концентрация 10 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10 куб. см исходного стандартного раствора феназахина с концентрацией 100 мкг/куб. см (п. 7.4.1.1), разбавляют ацетонитрилом до метки. Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.

7.4.1.3. Рабочие градуировочные растворы N 2 - 6 (концентрация 0,05 - 0,5 мкг/куб. см). В 5 мерных колб вместимостью 100 куб. см помещают по 0,5; 1,0; 2,0; 3,0 и 5,0 куб. см стандартного раствора N 1 с концентрацией 10 мкг/куб. см (п. 7.4.1.2), доводят до метки подвижной фазой N 1 (измерение по п. 7.7.1.1.1) или подвижной фазой N 2 (измерение по п. 7.7.1.1.2), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 6 с концентрацией феназахина 0,05; 0,1; 0,2; 0,3 и 0,5 мкг/куб. см соответственно. Растворы хранятся в холодильнике в течение 10 дней.

7.4.2. Серия Б (измерение по п. 7.7.1.2)

7.4.2.1. Исходный раствор феназахина в гексане для градуировки (концентрация 100 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,01 г феназахина, растворяют в 50 - 70 куб. см гексана, доводят до метки этим же растворителем, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.

7.4.2.2. Рабочие градуировочные растворы N 7 - 11 (концентрация 0,5 - 5,0 мкг/куб. см). В 5 мерных колб вместимостью 100 куб. см помещают по 0,5; 1,0; 2,0; 3,0 и 5,0 куб. см исходного стандартного раствора феназахина в гексане с концентрацией 100 мкг/куб. см, доводят до метки подвижной фазой N 3, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 7 - 11 с концентрацией феназахина 0,5; 1,0; 2,0; 3,0 и 5,0 мкг/куб. см соответственно. Рабочие стандартные растворы хранятся в холодильнике в течение 10 дней.

Отбор проб воздуха проводят в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны".

Воздух со скоростью 3 - 5 куб. дм/мин. с помощью электроаспиратора протягивают через бумажный фильтр "синяя лента", закрепленный в фильтродержателе. Для измерения концентрации феназахина на уровне 1/2 ОБУВ воздуха рабочей зоны необходимо отобрать 3,5 куб. дм воздуха.

Для измерения концентрации феназахина на уровне 0,8 ОБУВ атмосферного воздуха необходимо отобрать 90 куб. дм воздуха.

Срок хранения отобранных проб, помещенных в полиэтиленовые пакеты, в холодильной камере при 4 °С - 10 дней.

Промывают колонку подвижной фазой (п. 7.2) в течение 30 мин. при скорости подачи растворителя 0,4 или 0,1 куб. см/мин. до установления стабильной базовой линии.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади или высоты пика (отн. единицы, мм) от концентрации феназахина в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 5 растворам для градуировки: растворы N 2 - 6 или растворы N 7 - 11.

В инжектор хроматографа вводят по 20 куб. мм градуировочного раствора N 2 - 6 или по 5 куб. мм раствора N 7 - 11 и анализируют в условиях хроматографирования по п. 7.7.1. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений.

7.7.1. Условия хроматографического анализа

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:

7.7.1.1. Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором Perkin-Elmer (США).

Колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 2,1 мм, содержащая Spherisorb S5 ODS 2, зернением 5 мкм.

Температура колонки: комнатная.

Скорость потока элюента: 0,4 куб. см/мин.

Рабочая длина волны: 263 нм.

Чувствительность: 0,005 ед. абсорбции на шкалу.

Объем вводимой пробы: 20 куб. мм.

7.7.1.1.1. Подвижная фаза: ацетонитрил-вода(85:15, по объему)

Ориентировочное время выхода феназахина: 7,8 - 8,0 мин.

7.7.1.1.2. Подвижная фаза: метанол-вода (90:10, по объему).

Ориентировочное время выхода феназахина: 7,8 - 8,0 мин.

Линейный диапазон детектирования: 1 - 10 нг.

7.7.1.2. Альтернативные условия хроматографирования

Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором Милихром (Россия).

Колонка стальная длиной 64 мм, внутренним диаметром 2 мм, содержащая Силасорб 600, зернением 5 мкм.

Температура колонки: комнатная.

Подвижная фаза: н-гексан-изопропанол (97:3, по объему).

Скорость потока элюента: 100 куб. мм/мин.

Рабочая длина волны: 220 нм.

Чувствительность: 0,4 ед. абсорбции на шкалу.

Скорость движения диаграммной ленты 300 мм/ч.

Объем вводимой пробы: 5 куб. мм.

Ориентировочный удерживаемый объем феназахина: 260 куб. мм.

Линейный диапазон детектирования: 2,5 - 25 нг.

Образцы, дающие пики большие, чем рабочий градуировочный раствор с максимальной для используемых условий хроматографирования концентрацией, разбавляют соответствующей подвижной фазой.

Градуировочный график проверяют ежедневно по анализу 2-х стандартных растворов различной концентрации. При получении результатов, которые отличаются более чем на 6% от данных, заложенных в градуировочную характеристику, ее строят заново, используя свежеприготовленные рабочие стандартные растворы.

Фильтр с отобранной пробой переносят в химический стакан вместимостью 100 куб. см, заливают 10 куб. см ацетона, помещают на встряхиватель на 10 мин. Растворитель сливают, фильтр еще дважды обрабатывают новыми порциями ацетона объемом 10 куб. см.

Объединенный экстракт упаривают в грушевидной колбе на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °С почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха, остаток растворяют в 10 куб. см подвижной фазы N 1 (N 2) или в 1,0 куб. см подвижной фазы N 3 и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 7.7.1.1.1 (7.7.1.1.2) или 7.7.1.2 соответственно.

Пробу вводят в инжектор хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь (высоту) пика, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию феназахина в хроматографируемом растворе.

Перед анализом опытной пробы проводят хроматографирование холостой (контрольной) пробы - экстракта неэкспонированного фильтра.

Массовую концентрацию феназахина в пробе воздуха рабочей зоны X, мг/куб. м, рассчитывают по формуле:

где:

C - концентрация феназахина в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/куб. см;

W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;

где:

T - температура воздуха при отборе пробы (на входе в аспиратор), °С;

Р - атмосферное давление при отборе пробы, мм рт. ст.;

u - расход воздуха при отборе пробы, куб. дм/мин.;

t - длительность отбора пробы, мин.

Примечание. Идентификация и расчет концентрации феназахина в пробах могут быть проведены с помощью программ обработки хроматографических данных с применением компьютера, включенного в аналитическую систему.

где:

d - норматив оперативного контроля сходимости, мг/куб. м;

При превышении норматива оперативного контроля сходимости измерения повторяют. При повторном превышении норматива d выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

Результат количественного анализа представляют в виде:

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. "ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа".

Юдина Т.В., Федорова Н.Е., Волкова В.Н. (Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана, г. Мытищи Московской обл.).