"МУК 4.2.1071-01. 4.2. Методы контроля. Микробиологические факторы. Метод микробиологического измерения концентрации препарата ЭМ-1 "Байкал" по одному из ведущих компонентов (Lactobacillus casei-21) в воздухе рабочей зоны. Методические указания"
(утв. Минздравом России 20.09.2001)

1. Разработаны к.м.н. Сергеюк Н.П. (Научно-исследовательский центр "Экос").

2. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации 20 сентября 2001 г.

3. Введены впервые.

Настоящие методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентраций клеток штамма Lactobacillus casei-21, являющегося ведущим компонентом консорциума микроорганизмов (препарат ЭМ-1 "Байкал") в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентрации от 100 до 50000 клеток в 1 куб. м воздуха.

Методические указания разработаны с целью обеспечения микробиологического контроля концентрации препарата "Байкал ЭМ-1" по одному из ведущих компонентов Lactobacillus casei-21 в воздухе рабочей зоны и производственных помещений и оценки соответствия уровня его содержания гигиеническим нормативам на основе учета требований ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования", ГОСТ Р 8.563-96 "ГСИ. Методики выполнения измерений".

Методические указания предназначены для центров госсанэпиднадзора, санитарных лабораторий биотехнологических предприятий, микробиологических лабораторий, научно-исследовательских институтов, работающих в области гигиены окружающей среды и аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований.

Семейство: Lactobacillaceae

Род: Lactobacillus

Вид: casei

Штамм: 21.

На поверхности плотных питательных сред образует мелкие круглые колонии. Глубинные колонии - вогнутые, иногда с выростами. Форма клеток - палочки разной длины, образуют короткие и длинные цепочки, неподвижные, неспорообразующие, грамположительные. Отмечена также тенденция к образованию заметно искривленных (изогнутых) клеток.

Метод основан на аспирации из воздуха клеток Lactobacillus casei-21 на поверхность плотной питательной среды и подсчете выросших колоний по типичным морфологическим признакам.

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы.

Стерилизация при 3/4 атмосферы 20 мин. После остывания раствора добавляют 9 мл этилового спирта для подавления посторонней микрофлоры и разливают данный раствор асептично по 20 мл в чашки Петри.

При выполнении измерений концентрации клеток Lactobacillus casei-21 в воздушной среде соблюдают:

- правила техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.005-88;

- правила электробезопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцию по эксплуатации прибора;

- требования, изложенные в руководстве "Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности" (1980);

- положения "Инструкций по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности" (1977).

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица с высшим или средним специальным образованием, прошедшие соответствующую подготовку и имеющие навыки работы в области микробиологических исследований.

Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях в соответствии с ГОСТ 15150-69 при температуре воздуха (20 +/- 5) °С, атмосферном давлении 630 - 800 мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80%.

Для определения микроорганизма воздух аспирируют при помощи аппарата Кротова со скоростью 10 л/мин. на поверхность плотной питательной среды. Время аспирации воздуха 20 мин. Аппарат Кротова перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора, наружную и внутреннюю стенку крышки. На подвижный диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо. После отбора пробы воздуха и остановки диска прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы.

Метод предполагает учет количества типичных по морфологическим признакам колоний, выросших на 3 - 4 сутки после посева воздуха. Прямой метод позволяет учитывать на чашке до 200 колоний.

Селективную среду тщательно перемешивают и разливают по 20 мл в стеклянные чашки Петри на горизонтальной поверхности. Чашки с застывшей средой помещают в термостат на сутки при температуре 37 °С, после чего проросшие чашки бракуют, стерильные чашки используют для контроля воздуха.

После отбора проб воздуха чашки Петри инкубируют в термостате при 36 °С, через 72 ч производят подсчет выросших типичных колоний. При необходимости культуру подвергают микрокопированию.

Расчет концентрации клеток в 1 куб. м воздуха производят по формуле:

где:

Х - концентрация клеток в воздухе;

N - количество колоний, выросших на чашке;

1000 - коэффициент перерасчета на 1 куб. м воздуха;

V - объем воздуха, л (произведение скорости на время аспирации).

Препарат "Байкал ЭМ-1" представляет собой консорциум микроорганизмов, в котором Lactobacillus casei-21 составляют 30% от общего числа микроорганизмов, Streptococcus lactis - 30%, бактерии фотосинтеза Phodopseudomonas palistris - 30%, сахаромицеты - Saccaromyces cerevisial - 10%. Концентрацию препарата "Байкал ЭМ-1" рассчитывают исходя из процентного отношения микроорганизмов, входящих в его состав, по формуле:

где:

А - концентрация консорциума (кл./куб. м);

N - концентрация контрольного микроорганизма (кл/куб. м);

d - содержание контрольного микроорганизма в консорциуме (%).

Контрольным микроорганизмом для данной методики является Lactobacillus casei-21.

Результаты измерений оформляют протоколом по форме.

Дата проведения анализа ____________________________

Место отбора пробы _________________________________

Название лаборатории _______________________________

Юридический адрес организации ______________________

Ответственный исполнитель

Научный руководитель