"МУК 4.1.1243-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств бенсульфурон-метила в воде, почве, зерне и соломе риса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Минздравом России 16.03.2003)

1. Подготовлены: Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана; Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева; при участии Департамента Госсанэпиднадзора Минздрава России. Разработчики методики указаны в конце.

2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по госсанэпиднормированию при Минздраве России.

3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко 16 марта 2003 г.

4. Введены впервые.

5. Введены с 1 июля 2003 г.

Фирма-производитель: Комак Агрохим 2000.

Торговое наименование: Аризон.

Действующее вещество: бенсульфурон-метил.

Структурная формула: (не приводится).

Альфа-(4,6-диметоксипиримидин-2-илкарбомоилсульфамоил)-омикрон-толуиловой кислоты метиловый эфир (IUPAC).

Метил 2-[[[[[(4,6-диметоксипиридимин-2-ил)амино]карбонил]амино] сульфонил]метил]бензоат (С.А.).

Молекулярная масса: 410,4.

Бесцветное или светло-желтое без запаха кристаллическое вещество.

Температура плавления: 185 - 188 °С.

Растворимость в воде (мг/л, 25 °С): 2,9 (pH 5), 12 (pH 6), 120 (pH 7), 1200 (pH 8). Растворимость (г/л, 20 °С): в ацетоне - 1,38; ацетонитриле - 5,38; дихлорметане - 11,7; этилацетате - 1,66; гексане > 0,01; ксилене - 0,28.

Гигиенические нормативы для бенсульфурон-метила в России:

ОДК в почве - 0,02 мг/кг; ПДК в воде водоемов - 0,04 мг/л; МДУ для риса - 0,02 мг/кг.

Область применения препарата: бенсульфурон-метил - селективный системный гербицид, адсорбируемый листвой и корнями с быстрым перемещением к меристемным тканям. Используется для уничтожения многих видов однолетних и многолетних сорных растений.

2.1.1. Принцип метода

Методика основана на определении бенсульфурон-метила методом ВЭЖХ с использованием УФ-детектора после его извлечения из образцов водно-ацетоновой смесью и очистке путем перераспределения между двумя жидкими фазами, а также на колонке с силикагелем.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Метрологическая характеристика метода представлена в табл. 1.

2.1.3. Избирательность метода

Присутствие других пестицидов, близких по химическому строению и области применения, определению не мешает.

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79). Пробы растительных материалов хранятся до анализа в морозильной камере при температуре -18 °С, перед проведением анализа их измельчают на лабораторной мельнице.

2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей

2.5.2. Кондиционирование колонки

Перед началом анализа колонку Symmetry-C18 кондиционируют в потоке подвижной фазы (1 мл/мин.) до стабилизации нулевой линии в течение 1 - 2 ч.

2.5.3. Приготовление растворов

Для приготовления элюента N 1 в колбе на 1000 мл смешивают 600 мл н-гексана и 400 мл ацетона. Для приготовления элюента N 2 в колбе на 1000 мл смешивают 400 мл н-гексана и 600 мл ацетона.

2.5.4. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

Для приготовления подвижной фазы смешивают 330 мл ацетонитрила с 670 мл 0,005 М ортофосфорной кислоты в колбе на 1000 мл, смесь фильтруют, при необходимости дегазируют.

2.5.5. Приготовление стандартного и градуировочных растворов

Берут точную навеску бенсульфурон-метила (50 мг), переносят в мерную колбу на 50 мл, растворяют навеску в ацетонитриле и доводят до метки (стандартный раствор с концентрацией 1,0 мг/мл). Градуировочные растворы с концентрациями 0,1; 0,2; 0,5; 1,0 и 2,0 мкг/мл готовят методом последовательного разбавления, используя раствор подвижной фазы (смесь ацетонитрил - 0,005 М ортофосфорная кислота [33:67, по объему]). Стандартный раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °С в течение 1 месяца, градуировочные растворы - в течение суток.

2.5.6. Построение градуировочного графика

Для построения градуировочного графика (площадь пика - концентрация бенсульфурон-метила в растворе) в хроматограф вводят по 20 мкл градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации бенсульфурон-метила в градуировочном растворе (мкг/мл).

2.5.7. Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта

В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1 см помещают тампон из стекловаты, закрывают кран и вносят суспензию 7,5 г силикагеля в 30 мл смеси гексан-ацетон (60:40, по объему). Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента. Колонку последовательно промывают 50 мл смеси гексан-ацетон (40:60, по объему) и 50 мл смеси гексан-ацетон (60:40, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в секунду, после чего она готова к работе.

2.5.8. Проверка хроматографического поведения бенсульфурон-метила на колонке с силикагелем

В круглодонную колбу емкостью 10 мл отбирают 0,1 мл стандартного раствора бенсульфурон-метила с концентрацией 10 мкг/мл. Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 5 мл элюента N 1 и наносят на колонку. Колбу обмывают еще 5 мл элюента N 1 и также вносят на колонку. Промывают колонку 100 мл элюента N 1, затем 60 мл элюента N 2 со скоростью 1 - 2 капли в секунду. Отбирают фракции по 10 мл каждая, упаривают, остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы (п. 2.5.3) и анализируют на содержание бенсульфурон-метила по п. 2.6.5.

Фракции, содержащие бенсульфурон-метил, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы и вновь анализируют по п. 2.6.5. Рассчитывают содержание бенсульфурон-метила в элюате, определяя полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для этого объем элюента.

Примечание. Параметры удерживания бенсульфурон-метила и сопутствующих экстрактивных веществ могут меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.

2.5.9. Подготовка приборов и средств измерения

Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями стандартов и технической документации.

2.6.1. Определение бенсульфурон-метила в воде

Сухой остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы и 20 мкл раствора вводят в жидкостный хроматограф.

2.6.2. Экстракция бенсульфурон-метила из проб почвы, зерна и соломы риса

2.6.3. Очистка экстрактов

--------------------------------

<*> В случае образования сравнительно стойких эмульсий для сокращения времени расслоения можно добавить в делительную воронку: на стадии промывки экстрактов гексаном и хлористым метиленом - небольшое количество (до 10 мл) этилового спирта, а на стадии переэкстракции - насыщенный раствор хлорида натрия (5 - 10 мл).

<**> В случаях, когда очистка экстрактов контрольных проб (п. 2.6.3) дает удовлетворительные результаты, дополнительную очистку на колонке с силикагелем можно исключить.

2.6.4. Очистка на колонке с силикагелем

Сухой остаток в колбе, полученный при упаривании очищенных по п. п. 2.6.2 и 2.6.3 экстрактов почвы и растительного материала количественно переносят двумя 5-мл порциями смеси гексан-ацетон (60:40, по объему) в кондиционированную хроматографическую колонку (п. 2.5.6). Промывают колонку 100 мл элюента N 1, которые отбрасывают. Бенсульфурон-метил элюируют 60 мл элюента N 2, собирая элюат в грушевидную колбу емкостью 100 мл. Раствор упаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре не выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы и 20 мкл раствора вводят в жидкостный хроматограф.

2.6.5. Условия хроматографирования

Жидкостный хроматограф "Альянс" фирмы "Waters" с УФ-детектором (Waters 2487), снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки или другой с аналогичными характеристиками.

Колонка Nova-Pac-C18 (150 x 3,9) мм, зернение 4 мкм (Waters, USA) или аналогичная.

Температура колонки 30 +/- 1 °С.

Предколонка Waters Nova-Рас C-l8 для защиты аналитической колонки.

Подвижная фаза: ацетонитрил - 0,005 М ортофосфорная кислота в объемном соотношении 33:67.

Скорость потока элюента: 1 мл/мин.

Рабочая длина волны: 237 нм.

Объем вводимой пробы: 20 мкл.

Время удерживания бенсульфурон-метила: 9,4 +/- 0,1 мин.

Линейный диапазон детектирования: 0,1 - 2,00 мкг/мл.

Альтернативные условия хроматографирования.

Жидкостный хроматограф "Альянс" фирмы "Waters" с УФ-детектором (Waters 2487), снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки.

Колонка Symmetry - С18 (250 x 4,6) мм, зернение 5 мкм (Waters, USA).

Температура колонки: 30 +/- 1 °С.

Предколонка Waters Symmetry C-l8 для защиты аналитической колонки.

Подвижная фаза: ацетонитрил - 0,005 М ортофосфорная кислота в соотношении 33:67 (по объему).

Скорость потока элюента: 1 мл/мин.

Рабочая длина волны: 237 нм.

Объем вводимой пробы: 20 мкл.

Время удерживания бенсульфурон-метила: 9,4 +/- 0,1 мин.

Линейный диапазон детектирования: 0,1 - 2,00 мкг/мл.

2.6.6. Обработка результатов анализа

Количественное определение проводят методом абсолютной градуировки, содержание бенсульфурон-метила в образце воды, почвы или растительных материалов (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

V - объем пробы, подготовленной для хроматографического анализа, мл;

Р - навеска анализируемого образца, г, (для воды - объем, мл);

С - концентрация стандартного раствора бенсульфурон-метила, мкг/мл.

Содержание остаточных количеств бенсульфурон-метила в анализируемом образце вычисляют как среднее из 3 параллельных определений.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор бенсульфурон-метила 2 мкг/мл, разбавляют.

При проведении работы необходимо соблюдать требования инструкции "Основные правила безопасной работы в химической лаборатории", общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, а также инструкции по эксплуатации жидкостного хроматографа и электрооборудования до 400 В.

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95 "ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа".

Юзихин О.С., Черменская Т.Д., Цибульская И.А., Долженко В.И. Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений.