"МУК 4.1.1440-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по измерению концентрации Фенпироксимата в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"
(утв. Минздравом России 24.06.2003)

1. Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (академик РАМН, проф. В.Н. Ракитский, проф. Т.В. Юдина), Российским государственным аграрным университетом - МСХА им. К.А. Тимирязева (проф. В.А. Калинин, к.х.н. А.В. Довгилевич) при участии Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (А.П. Веселов).

2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, академиком РАМН Г.Г. Онищенко 24 июня 2003 г.

4. Введены впервые.

Фирма-производитель: Нихон Нохияку Компани, ЛТД, Япония.

Торговое название: Ортус.

Название действующего вещества по ИСО: Фенпироксимат.

Название действующего вещества по ИСО: трет-бутил (Е)-альфа-(1,3-диметил-5-феноксипиразол-4-ил-метиленамино-р-толуат-окси) метил бензоат.

Структурная формула (не приводится).

Молекулярная масса: 421,5.

Химически чистый Фенпироксимат представляет собой белое кристаллическое вещество без запаха.

Давление паров - 0,0075 мПа (при 25 °С).

Температура плавления - 101,1 - 102,4 °С.

Коэффициент распределения н-октанол - вода: Кow log Р = 5,01 (20 °С).

В России установлены следующие гигиенические нормативы:

ДСД - 0,005 мг/кг/сут.;

ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 0,05 мг/куб. м;

ПДК в воде - 0,001 мг/л;

ОДК в почве - 0,3 мг/кг;

МДУ (мг/кг) в яблоках, винограде - 0,2.

Область применения: Фенпироксимат является контактным акарицидом из группы пиразолов, предназначенным для уничтожения различных видов клещей. Зарегистрирован в России и странах СНГ под торговой маркой Ортус, ск (50 г/л) в качестве акарицида на яблоне с нормой расхода 0,5 - 0,9 л/га, а также на виноградниках с нормой расхода 0,6 - 0,9 л/га при 2-кратной обработке.

При определенных условиях может трансформироваться в растениях и объектах окружающей среды с образованием Z-изомера и деметилфенпироксимата.

2.1.1. Принцип метода

Методика основана на определении Фенпироксимата методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием ультрафиолетового детектора.

Отбор проб воздуха осуществляется концентрированием аэрозоля на бумажные фильтры "синяя лента". Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

2.1.2. Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых при возделывании плодовых культур и виноградников (хлор- и фосфорорганические соединения, синтетические пиретроиды, фенилмочевины, тио- и дитиокарбаматы и т.д.).

2.1.3. Метрологическая характеристика метода (Р = 0,05)

Число параллельных определений - 6.

Предел обнаружения в хроматографируемом объеме - 1 нг (значение для "Hewlett-Packard НР 1050"); 2 нг (значение для "Милихром-4").

Предел обнаружения в пробе - 0,01 мг/куб. м (при отборе 10 л воздуха).

Диапазон определяемых концентраций - 0,01 - 0,1 мг/куб. м.

Среднее значение определения - 92,2%.

Стандартное отклонение - 5,33%.

Относительное стандартное отклонение - 2,17%.

Доверительный интервал среднего - 5,6%.

Суммарная погрешность измерения не превышает 25%.

2.2.1. Реактивы, растворы и материалы

Фенпироксимат, х.ч., аналитический стандарт с содержанием д.в. 99,7%.

Ацетонитрил, ч., ТУ 6-09-3534-87.

н-Гексан, ч., ТУ 6-09-3375-78.

Хлороформ, Фармакопея СССР.

Вода дистиллированная, ГОСТ 6709.

Фильтры бумажные, ТУ-6-09-1678-86.

2.2.2. Приборы, аппаратура, посуда

Жидкостной хроматограф "Hewlett-Packard НР 1050" с ультрафиолетовым детектором или аналогичный (например, "Beckman Gold System").

Хроматографическая колонка обращенно-фазовая Hypersyl RP-18, размером 200 мм х 4, 6 мм или аналогичная.

Жидкостной хроматограф "Милихром-4" (Россия) с ультрафиолетовым детектором.

Колонка аналитическая КАХ-4643, содержащая носитель Separon С18.

Встряхиватель механический, ТУ 64-1-1081-73.

Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-74, или аналогичный.

Насос водоструйный, ГОСТ 25336, или вакуумный насос масляный типа ВН-461-М или аналогичный.

Микрошприцы, ГОСТ 20292-74.

Баня водяная, ТУ 64-1-2850.

Колбы конические плоскодонные на 100 и 250 мл с притертыми пробками (шлиф N 29), КПШ-100-29/32 и КПШ-250-29/32, ГОСТ 10394-72.

Воронки для фильтрования стеклянные ГОСТ 8613.

Воронки делительные стеклянные на 100 и 500 мл, ГОСТ 8613.

Колбы круглодонные на шлифах на 250 мл, ГОСТ 25336-82.

Концентраторы конические НШ 19, КГУ-100-14/19, ТС, ГОСТ 10394-72.

Колбы грушевидные на шлифах на 50 и 100 мл, КГУ 50-14/19 и КГУ 100-14/19, ТС, ГОСТ 10394-72.

Пробирки градуированные стеклянные на 10 и 25 мл, ГОСТ 1770-74 Е.

Пипетки мерные на 100 мл, ГОСТ 25336-82.

Стаканы стеклянные на 100 мл, ГОСТ 25336-82 Е.

Колбы мерные на 50, 100, 250 и 500 мл, ГОСТ 1770-74 Е.

Фильтры бумажные "синяя лента", ТУ 6-09-2678.

Весы аналитические ВЛР-200 г, ГОСТ 24104-80.

Аспирационное устройство типа ЭА-1, ТУ 25-11-1414-78, или аналогичное.

Фильтродержатели.

2.3.1. Подготовка растворителей и приготовление подвижных фаз для ВЭЖХ-хроматографии

2.3.1.1. Метод очистки ацетонитрила

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентаоксидом фосфора несколько раз до тех пор, пока ацетонитрил не перестанет окрашиваться. После этого ацетонитрил отгоняют и перегоняют еще раз над карбонатом калия.

2.3.1.2. Метод очистки гексана

Гексан (1 л) выдерживают 15 часов с концентрированной серной кислотой (0,1 л). Гексан аккуратно декантируют в делительную воронку и трижды промывают: дистиллированной водой, 2%-ным водным раствором гидроксида натрия и снова водой. Осушают гексан гидроксидом калия, после чего перегоняют.

2.3.1.3. Приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ с обращенной фазой

Бидистиллят получают с помощью лабораторного бидистиллятора. Для получения подвижной фазы (ВЭЖХ) 750 мл ацетонитрила смешивают с 250 мл бидистиллята (800 мл и 200 мл для "Милихрома"). Полученную фазу тщательно дегазируют путем продувки гелием или вакуумированием в течение 10 мин. (до окончания вскипания при встряхивании).

2.3.2. Подготовка хроматографической системы к проведению анализа

Подготовку хроматографической системы проводят согласно заводской инструкции по эксплуатации хроматографа.

2.3.3. Приготовление стандартных растворов

На аналитических весах взвешивают 10 мг Фенпироксимата в колбе на 100 мл. Навеску растворяют в очищенном ацетонитриле и доводят объем до метки.

Полученный раствор с концентрацией 0,1 мг/мл (стандартный раствор N 1) хранят в холодильнике в течение 1 месяца.

Непосредственно перед анализом готовят серийные разведения стандартных растворов с концентрацией 2, 1, 0,5 и 0,1 мкг/мл. Для этого из стандартного раствора с концентрацией 100 мкг/мл (стандартные растворы N 1 и N 2) отбирают 2 мл, переносят в мерную колбу на 100 мл, доводят до метки ацетонитрилом и тщательно перемешивают. Затем бинарными разведениями получают стандартные растворы с требуемой концентрацией.

Вводят в хроматограф по 10 мкл каждого раствора, измеряют высоты пиков и строят график зависимости высоты пика от концентрации анализируемого вещества.

Отбор проб воздуха рабочей зоны проводится в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны".

Воздух со скоростью 5 л/мин. пропускают через фильтр "синяя лента", помещенный в фильтродержатель.

Фильтр с отобранной пробой измельчают ножницами, помещают в колбу емкостью 100 мл и экстрагируют 50 мл гексана в течение 1 часа. Экстракт отфильтровывают, навеску фильтра вновь экстрагируют 50 мл гексана.

Объединенный экстракт упаривают в грушевидной колбе на ротационном вакуумном испарителе досуха, при температуре водяной бани 40 °С. Остаток растворяют в 1 мл перегнанного ацетонитрила и хроматографируют.

2.6.1. Жидкостной хроматограф "Hewlett-Packard НР 1050" или аналогичный.

Детектор ультрафиолетовый, длина волны 258 нм.

Подвижная фаза: ацетонитрил/вода (75:25).

Скорость потока - 1,5 мкл/мин.

Объем дозирования - 10 мкл.

Чувствительность детектора - 2,000 aufs.

Скорость протяжки ленты - 0,2 мм/мин.

Линейный диапазон - 1 - 60 нг/колонку.

Время удерживания Фенпироксимата - 9,8 - 10,0 мин.

Хроматограф "Милихром-4".

Колонка обращенно-фазовая КАХ-4643.

Детектор ультрафиолетовый, длина волны 258 нм.

Подвижная фаза: ацетонитрил/вода (80:20).

Скорость потока - 50 мкл/мин.

Объем дозирования - 10 мкл.

Чувствительность детектора - 0,002 ед.оп.

Масштаб регистрации - 0,08

Чувствительность самописца - 0,1 V.

Скорость протяжки ленты - 0,2 мм/мин.

Линейный диапазон - 2 - 60 нг/колонку.

Объем удерживания Фенпироксимата - 590 мкл (11,8 мин.).

Каждую анализируемую пробу вводят 3 раза и вычисляют среднюю высоту пика. Образцы с концентрацией больше чем 5 мкг/мл (по стандартному раствору) разбавляют ацетонитрилом.

2.6.2. Обработка результатов анализа

Содержание Фенпироксимата рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности в лаборатории при работе с органическими растворителями, ЛВЖ, токсичными веществами и электронагревательными приборами.

А.В. Чигрин, главный специалист контрольно-токсикологической лаборатории "Краснодарская", кандидат биологических наук; Т.Ю. Тимофеева, химик-аналитик контрольно-токсикологической лаборатории "Краснодарская".

Телефон: 8-61-224-48-67.

В.А. Калинин, профессор, канд. с.-х.. наук.

Московская сельскохозяйственная академия имени К.А. Тимирязева, Испытательная лаборатория пищевой и сельскохозяйственной продукции, кафедра химических средств защиты растений.

127550, Москва, Тимирязевский пр., 2.

Телефон: (095) 976-02-20.