"МУК 4.1.1138-02. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств квизалофоп-П-тефурила и его метаболитов в клубнях картофеля, ботве и корнеплодах сахарной и столовой свеклы, моркови и луке методом газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Минздравом России)

1. Методические указания подготовлены: Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (чл.-корр. РАМН, проф. В.Н. Ракитский, проф. Т.В. Юдина); Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева (проф. В.А. Калинин, к. хим. н. Довгилевич А.В.); Всероссийским НИИ фитопатологии (А.М. Макеев и др.); Всероссийским НИИ защиты растений (В.И. Долженко и др.); Санкт-Петербургским НИИ лесного хозяйства (Маслаков С.Е., Л.В. Григорьева и др.), при участии Департамента госсанэпиднадзора Минздрава России (А.П. Веселов).

2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Минздраве России.

3. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.

4. Введены впервые.

Фирма-производитель: Юнироял Кемикал Ко. Инк.

Торговое наименование препарата: ПАНТЕРА, КЭ.

Действующее вещество (д.в.): квизалофоп-П-тефурил.

Название д.в. по номенклатуре ИЮПАК: (R)-2-[4-(6-=хлорхиноксалин-2-илокси)фенокси]пропионовой кислоты тетрагидрофурфуриловый эфир.

Структурная формула (не приводится).

Основным продуктом гидролитического разложения (метаболитом) квизалофоп-П-тефурила является 2-[4-(6-хлорхиноксалин-2-илокси)фенокси]пропионовая кислота.

Токсикологическая характеристика: ДСД для массы тела человека - 0,004 мг/кг.

Гигиенические нормативы

МДУ в сельскохозяйственной продукции: свекла, картофель - 0,04 мг/кг; лук - 0,06 мг/кг.

ПАНТЕРА, КЭ - послевсходовый гербицид для борьбы с однолетними и многолетними злаковыми сорными растениями при возделывании овощных и технических культур.

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на извлечении остаточных количеств квизалофоп-П-тефурила и его метаболитов из анализируемого объекта метанолом, последующем гидролизе квизалофоп-П-тефурила и метаболитов с дериватизацией (метанолиз) до конечного продукта 2-метокси-6-хлорхиноксалина, проведении очистки экстрактов на колонке с оксидом алюминия и концентрирования конечных реэкстрактов.

Количественное определение проводят методом внешнего стандарта с применением газожидкостной хроматографии с использованием термоионного детектора (ТИД) или детектора электронного захвата (ДЭЗ), набивной или капиллярной колонки с неподвижной фазой типа SE-30.

2.1.2. Избирательность метода

Прочие пестициды, применяемые в интенсивной технологии выращивания овощей, определению не мешают. Использование колоночной хроматографии для очистки экстрактов, а также селективных детекторов позволяет устранить влияние возможных мешающих анализу примесей.

2.1.3. Метрологическая характеристика метода

Отбор проб для анализа проводят в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными 21.08.79 N 2051-79.

2.5.1. Подготовка и очистка растворителей

Перед началом работы рекомендуется проверить чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 мл растворителя упаривают в ротационном испарителе при температуре 40 °C до объема 1,0 мл и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку растворителей производят в соответствии с общепринятыми методиками.

2.5.2. Подготовка и кондиционирование колонки

Подготовленной насадкой (3% SE-30 на хроматоне N-AW или другом носителе) заполняют стеклянную колонку и уплотняют ее под вакуумом. Колонку устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и кондиционируют ее при рабочем расходе газа-носителя и температуре 260 °C в течение 8 - 10 ч.

2.5.3. Приготовление стандартных растворов

Основной раствор 2-метокси-6-хлорхиноксалина с концентрацией 100 мкг/мл готовят в мерной колбе растворением 0,01 г стандартного вещества в 100 мл н-гексана. Раствор хранят в холодильнике не более 3 месяцев. Рабочие стандартные растворы с концентрациями 2,0; 5,0; 10,0 и 25,0 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора 2-метокси-6-хлорхиноксалина соответствующим последовательным разбавлением н-гексаном. Рабочие растворы хранят в холодильнике не более месяца.

При определении в модельных пробах полноты извлечения квизалофоп-П-тефурила используют соответствующие растворы вещества в ацетоне.

2.5.4. Построение калибровочного графика

Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 1 - 3 мкл рабочего стандартного раствора 2-метокси-6-хлорхиноксалина с концентрацией 2,0; 5,0; 10,0 и 25,0 мкг/мл. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение высоты (площади) хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости высоты (площади) хроматографического пика в мм (кв. мм) от концентрации 2-метокси-6-хлорхиноксалина в растворе в мкг/мл.

2.5.5. Подготовка хроматографических колонок с оксидом алюминия 1-й и 4-й степени активности по Брокману для очистки экстрактов

Оксид алюминия прогревают в фарфоровой чашке в термостате при 150 °C в течение 5 ч и охлаждают до комнатной температуры (1-я степень активности по Брокману). Для приготовления оксида алюминия 4-й степени активности по Брокману внутреннюю поверхность колбы со шлифом объемом 0,5 л увлажняют 11,1 мл дистиллированной воды и добавляют в колбу 100 г активированного оксида алюминия. Содержимое колбы тщательно перемешивают. Колбы с подготовленным оксидом алюминия хранят герметично закрытыми.

Стеклянную колонку размером 30,0 x 1,0 см заполняют (при легком встряхивании) 5,0 г оксида алюминия (высота слоя ~ 7,0 см). Над слоем оксида алюминия помещают слой безводного сульфата натрия высотой 2,0 см и содержимое колонки перед использованием промывают 30,0 мл н-гексана.

2.5.6. Подготовка проб к определению

Клубни картофеля, корнеплоды моркови и свеклы промывают водой для удаления остатков почвы и обсушивают фильтровальной бумагой. Из каждого неочищенного клубня, корнеплода или репки лука берут сегменты (1/4 часть) по осевой линии. Сегменты нарезают ножом, гомогенизируют и после тщательного перемешивания выделяют средний образец. Ботву свеклы нарезают ножом, гомогенизируют, перемешивают и выделяют средний образец.

2.6.1. Обработка проб для газохроматографического анализа с использованием ДЭЗ

2.6.1.1. Проведение экстракции и метанолиза. Образец массой 10,0 +/- 0,1 г помещают в круглодонную колбу со шлифом емкостью 250 мл, добавляют 25 мл метилового спирта и 5 мл 40% водного раствора гидроокиси натрия, слегка встряхивают и добавляют 25 мл (вторая порция) метилового спирта. Колбу помещают на водяную баню, присоединяют обратный холодильник и содержимое колбы кипятят в течение 90 мин. Затем обратный холодильник отсоединяют, колбу закрывают пробкой и охлаждают в струе проточной холодной воды. Сразу же после этого содержимое колбы фильтруют через складчатый бумажный фильтр "красная лента" в делительную воронку емкостью 500 мл. Внутренние стенки колбы и фильтр промывают 15 мл метилового спирта. Затем в воронку добавляют 50 мл дистиллированной воды, 10 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия и с использованием концентрированной соляной кислоты (~ 3 мл) доводят содержимое воронки до pH 5 - 6. В воронку приливают 30 мл н-гексана и встряхивают в течение 3 мин. После 5-минутного отстаивания нижний водно-метанольный слой сливают в плоскодонную колбу емкостью 500 мл.

Гексановый экстракт, оставшийся в делительной воронке, пропускают через коническую воронку с ватным тампоном и слоем безводного сульфата натрия (толщина 1,0 - 1,5 см) в грушевидную колбу-концентратор емкостью 100 мл. Экстрагирование с использованием 30 мл н-гексана повторяют еще раз. Воронку и сульфат натрия промывают 5 мл н-гексана. Объединенный гексановый экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °C до объема 5,0 мл.

Водно-метанольный слой отбрасывают.

2.6.1.2. Проведение очистки экстрактов корнеплодов и ботвы свеклы, корнеплодов моркови и клубней картофеля на колонке с оксидом алюминия 4-й степени активности по Брокману. Остаток гексанового экстракта объемом 5 мл количественно переносят из колбы-концентратора в подготовленную колонку с оксидом алюминия. Элюирование 2-метокси-6-хлорхиноксалина осуществляют 20 мл н-гексана со скоростью ~ 60 кап./мин. в грушевидную колбу-концентратор.

Элюат после очистки концентрируют на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °C до объема 1,5 - 2,0 мл. Остаток количественно переносят в мерную коническую пробирку емкостью 10 мл и упаривают н-гексан в токе азота досуха. Сухой остаток в пробирке растворяют в 0,5 мл н-гексана и хроматографируют.

2.6.1.3. Проведение очистки экстрактов репок лука на колонке с оксидом алюминия 1-й степени активности по Брокману. При проведении анализа проб репок лука остаток гексанового экстракта репок лука объемом 5 мл количественно переносят в колонку с оксидом алюминия 1-й степени активности по Брокману.

Колонку с нанесенным экстрактом промывают 30 мл смеси н-гексан-метилен хлористый (98:2) и элюат отбрасывают. После этого проводят элюирование 2-метокси-6-хлорхиноксалина 15 мл смеси н-гексан-метилен хлористый (93:7) со скоростью ~ 60 кап./мин. в грушевидную колбу-концентратор.

Элюат после очистки концентрируют на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °C до объема 1,5 - 2,0 мл. Остаток количественно переносят в мерную коническую пробирку емкостью 10 мл и упаривают н-гексан в токе азота досуха. Сухой остаток в пробирке растворяют в 0,5 мл н-гексана и хроматографируют.

2.6.2. Обработка проб для газохроматографического анализа с использованием ТИД

Образец массой 10,0 +/- 0,1 г помещают в круглодонную колбу со шлифом емкостью 250 мл, добавляют 25 мл метилового спирта и 5 мл 40%-ного водного раствора гидроокиси натрия, слегка встряхивают и добавляют 25 мл (вторая порция) метилового спирта. Колбу помещают на водяную баню, присоединяют обратный холодильник и содержимое колбы кипятят в течение 90 мин. Затем обратный холодильник отсоединяют, колбу закрывают пробкой и охлаждают в струе проточной холодной воды. Сразу же после этого содержимое колбы фильтруют через складчатый бумажный фильтр "красная лента" в делительную воронку емкостью 500 мл. Внутренние стенки колбы и фильтр промывают 15 мл метилового спирта. Затем в воронку добавляют 50 мл дистиллированной воды, 10 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия и с использованием концентрированной соляной кислоты (~ 3 мл) доводят содержимое воронки до pH 5 - 6. В воронку приливают 30 мл н-гексана и встряхивают в течение 3 мин. После 5-минутного отстаивания нижний водно-метанольный слой сливают в плоскодонную колбу емкостью 500 мл.

Гексановый экстракт, оставшийся в делительной воронке, пропускают через коническую воронку с ватным тампоном и слоем безводного сульфата натрия (толщина 1,0 - 1,5 см) в грушевидную колбу-концентратор емкостью 100 мл. Экстрагирование с использованием 30 мл н-гексана повторяют еще раз. Воронку и сульфат натрия промывают 5 мл н-гексана. Водно-метанольный слой отбрасывают.

Объединенный гексановый экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °C до объема 5,0 мл. Остаток количественно переносят в мерную коническую пробирку емкостью 10 мл и упаривают н-гексан в токе азота досуха. Сухой остаток в пробирке растворяют в 0,5 мл н-гексана и хроматографируют.

2.7.1. При использовании насадочной колонки

Примечание: После выполнения 5 - 7 анализов насадочную колонку следует прогреть при температуре 260 °C в течение 1 ч.

2.7.2. При использовании капиллярной колонки

2.7.3. Расчет суммарного содержания квизалофоп-П-тефурила и его метаболитов

Расчет проводят по стандартному раствору 2-метокси-6-хлорхиноксалина, высота (площадь) пика которого наиболее близка высоте (площади) пика в рабочей пробе. Расчет суммарного содержания квизалофоп-П-тефурила и его метаболитов производят по следующей формуле:

Необходимо соблюдать общепринятые правила техники безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами, а также требования, изложенные в документации на приборы.

Долженко В.И., Крылов А.И., Григорьева Л.В., Тарарин П.А., Николаев М.Я. (ВНИИ защиты растений, 189620, Санкт-Петербург - Пушкин, шоссе Подбельского, 3).