"МУК 4.1.1404-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств бета-циперметрина в воде, семенах рапса, рапсовом масле, зерне и зеленой массе кукурузы методом газожидкостной хроматографии. Методические указания"
(утв. Минздравом России 24.06.2003)

1. Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана; Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева при участии Департамента Госсанэпиднадзора Минздрава России.

2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по госсанэпиднормированию при Минздраве России.

3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко 24 июня 2003 г.

4. Введены в действие с 30 июня 2003 г.

5. Введены впервые.

Торговое наименование: Кинмикс.

Фирма-производитель: Агро-Кеми КФТ (Венгрия).

Действующее вещество: бета-циперметрин.

Структурная формула (не приводится).

RS-альфа циано-3-феноксибензил(IRS)-cis-, trans-3-(2,2-дихлорвинил)-2,2-метилциклопропанкарбоксилат. Соотношение цис-, транс-изомеров - 40:60.

Молекулярная масса: 416,3.

Белый порошок без запаха.

Температура плавления: 63 - 64 °С.

Растворимость в воде: 93,4 мкг/л (pH 7, 25 °С).

Растворимость в органических растворителях (мг/мл, 20 °С): изопропанол - 11,5; ксилол - 349,8; дихлорметан - 387,8; ацетон - 2102,0; этилацетат - 1427,0; петролейный эфир - 13,1.

Стабильность: стабилен до 150 °С; на воздухе и при солнечном освещении; в нейтральной и слабокислой среде, гидролизуется в сильнощелочной среде.

Гигиенические нормативы: вода - 0,006 мг/л; кукуруза - 0,05 мг/кг; рапс - 0,1 мг/кг.

Область применения: бета-циперметрин - контактно-кишечный инсектицид широкого спектра действия из группы синтетических пиретроидов.

2.1.1. Принцип метода

Методика основана на определении бета-циперметрина с помощью газожидкостной хроматографии при использовании детектора с постоянной скоростью рекомбинации ионов после экстракции бета-циперметрина органическим растворителем, очистки экстракта перераспределением действующего вещества между несмешивающимися фазами, а также на колонке с оксидом алюминия.

2.1.2. Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии других пестицидов, применяемых при возделывании зерновых и масличных культур.

2.1.3. Метрологическая характеристика метода

Метрологическая характеристика метода представлена в табл.

2.2.1. Реактивы и материалы

2.2.2. Приборы, аппаратура и посуда

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79). Отобранные пробы зерна (семян) и соломы подсушивают до стандартной влажности и хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре не выше 4 °С не более 3 месяцев. Перед анализом зерно и солому размалывают на мельнице. Пробы воды хранят при температуре не выше 4 °С в течение 2 дней, при температуре -18 °С в течение месяца.

2.4.1. Подготовка растворителей

Очистку растворителей осуществляют общепринятыми методами.

2.4.2. Приготовление стандартных растворов

Берут точную навеску бета-циперметрина и растворяют в ацетоне таким образом, чтобы получить стандартный раствор с концентрацией 1 мг/мл. Стандартный раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °С в течение 6 месяцев. Из стандартного раствора методом последовательного разбавления по объему готовят рабочие стандартные растворы 0,25; 0,5; 1; 2,5; 5; 10 мкг/мл в ацетоне для внесения в образцы для оценки полноты извлечения бета-циперметрина. Для построения калибровочного графика готовят растворы бета-циперметрина в гексане концентрацией 0,1; 0,25; 0,5; 1; 1,5; 2 мкг/мл. Эти стандартные растворы можно использовать в течение 7 дней при хранении в холодильнике.

2.4.3. Кондиционирование колонки хроматографа

Металлическую колонку заполняют насадкой, состоящей на 1/4 по объему из неподвижной фазы 5% SE-30 на Gas-Chrom Q и 3/4 по объему 3% OV-17 на Inerton-Super. Уплотняют под вакуумом, после чего колонку устанавливают в термостат хроматографа, не подсоединяя к детектору, и кондиционируют в токе азота (20 мл/мин.) при температуре 300 °С в течение 8 - 10 часов.

2.4.4. Построение калибровочного графика

Для построения калибровочного графика снимают хроматограммы стандартных растворов, вводя в инжектор хроматографа последовательно 5 раз по 1 мкл растворов бета-циперметрина в гексане концентрацией 0,1; 0,25; 0,5; 1; 1,5; 2 мкг/мл. Измеряют высоты или площади пиков, рассчитывают среднее значение высоты или площади для каждой концентрации и строят график зависимости высоты или площади пика от концентрации бета-циперметрина.

2.4.5. Кондиционирование хроматографических колонок для очистки экстрактов образцов

Стеклянную колонку последовательно заполняют силанизированной стеклянной ватой, 10 г оксида алюминия, 1,5 г сульфата натрия.

Колонку устанавливают на аллонж с отводом для вакуума, промывают 25 мл гексана. Промывку проводят под вакуумом непосредственно перед очисткой экстрактов образцов со скоростью 1 мл/мин., не допуская высыхания поверхности адсорбента. Элюат отбрасывают.

2.4.6. Проверка хроматографического поведения бета-циперметрина на колонке с оксидом алюминия

На кондиционированную колонку наносят 1 мкг бета-циперметрина в 1 мл гексана. Колонку промывают 15 мл гексана, затем 15 мл смеси гексан - ацетон (1:1) и элюат отбрасывают. Затем бета-циперметрин элюируют последовательно десятью 2 мл порциями смеси бензол - этилацетат (6:4). Каждую фракцию упаривают отдельно, после чего сухой остаток растворяют в 1 мл гексана и аликвоту 1 мкл вводят в хроматограф.

Рассчитывают содержание бета-циперметрина в каждой фракции и определяют объем элюента, необходимый для наиболее полного элюирования вещества с колонки. Для данной методики он равен 15 мл смеси бензол - этилацетат (6:4).

2.5.1. Вода

Пробу воды объемом 250 мл помещают в делительную воронку емкостью 500 мл и трижды экстрагируют хлороформом порциями 50 мл, 50 мл и 40 мл, интенсивно встряхивая воронку в течение 2 мин. После разделения фаз нижний слой собирают в концентратор, пропуская его через безводный сульфат натрия. Затем осушитель обмывают 5 мл хлороформа, которые объединяют с экстрактом. Объединенный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 35 °С. Сухой остаток растворяют в необходимом объеме гексана (2 - 5 мл) и хроматографируют аликвоту 1 мкл.

2.5.2. Семена рапса, зерно и зеленая масса кукурузы

2.5.3. Рапсовое масло

Навеску масла массой 5 г помещают в делительную воронку объемом 250 мл и растворяют в 50 мл гексана. Затем приливают 50 мл ацетонитрила. Встряхивают в течение 2 мин. Ацетонитрильный экстракт (нижний слой) собирают через безводный сульфат натрия в концентратор (объемом 250 мл). Экстракцию ацетонитрилом повторяют дважды тем же количеством растворителя. Объединенный экстракт упаривают досуха на роторном вакуумном испарителе при 35 °С.

Упаренную пробу растворяют в 4 мл гексана, разделяют ее после растворения пополам и наносят на две параллельные подготовленные колонки с оксидом алюминия. Мешающие вещества элюируют 20 мл гексана, затем 5 мл смеси гексан - этилацетат (9:1). Элюат отбрасывают. Бета-циперметрин элюируют 15 мл смеси гексан - этилацетат (9:1) со скоростью 1 мл/мин. Объединенный элюат упаривают досуха на роторном вакуумном испарителе при 35 °С. Сухой остаток растворяют в 2 мл гексана и аликвоту 1 мкл хроматографируют.

Хроматограф "Цвет-500М", модель 560, с детектором постоянной скорости рекомбинации (ДПР).

Колонка металлическая 0,65 м х 3 мм со смешанной неподвижной фазой 5% SE-30 (1/4 по объему) на носителе Gas-Chrom Q (80 - 100 меш) и 3% OV-17 (3/4 по объему) на носителе Inerton-Super (0,16 - 0,20 мм). Расход газа-носителя (азот, осч) 55 мл/мин.

Скорость протяжки ленты самописца: 200 мм/ч.

Объем вводимой пробы: 1 мкл.

Время удерживания: 3,3 мин.

Линейный диапазон детектирования: 0,1 - 2 нг.

Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю высоту или площадь пика.

2.6.1. Возможность использования колонки с альтернативной фазой

Удовлетворительные результаты также дает использование хроматографической набивной колонки длиной 2 м с неподвижной фазой OV-1, 3% на Инертоне-Супер при следующих условиях хроматографирования: температура колонки - 260 °С, детектора - 340 °С, испарителя - 270 °С; расход газа-носителя - 40 мл/мин.

Содержание бета-циперметрина рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.

Всероссийский научно-исследовательский институт фитопатологии.